摘要：通過不同的抗凝劑對實驗影響，加強學(xué)生對實驗每一環(huán)節(jié)的重視，同時通過實驗對比來提高學(xué)生對實驗的興趣，從而達到實驗教學(xué)目的：精細、嚴謹。以枸櫞酸鈉與肝素分別制備血漿，對教材中《血漿纖維蛋白測定復(fù)鈣雙縮脲法》的實驗影響來提高學(xué)生對抗凝劑的重視為例。

關(guān)鍵詞：血漿 抗凝劑 枸櫞酸鈉 肝素

抗凝劑的問題是在《自擬中藥方劑對實驗性動脈硬化及血栓治療作用研究》科研中測定生化指標時遇到的。用不同抗凝劑制備血漿對本科研中的生化指標測定是有影響的，就此問題翻閱了教材，查閱了有關(guān)資料，從而保證了在抗凝劑這一環(huán)節(jié)不會出現(xiàn)差錯。

從科研中聯(lián)想到我們實驗教學(xué)，在《生化檢驗技術(shù)》的教學(xué)中，對學(xué)生在實驗課時被測物用的是血漿還是血清，用不同抗凝劑的血漿，對本次實驗有何種影響，不太重視。平時血漿制備都是按教材規(guī)定操作的。為了加強學(xué)生對實驗每一個環(huán)節(jié)的重視，以枸櫞酸鈉與肝素分別制備血漿，對教材中《血漿纖維蛋白測定復(fù)鈣雙縮脲法》的實驗有明顯影響，來提高學(xué)生對抗凝劑的重視。從而樹立學(xué)生對實驗的嚴謹態(tài)度。本次實驗，要求從加入不同種和不同量的抗凝劑制備的血漿開始，一直到測定吸收光度計算纖維蛋白含量，都讓學(xué)生親自動手，從而使學(xué)生對不同抗凝劑制備血漿對生化實驗的影響有深刻認識，在以后工作中不會因抗凝劑出現(xiàn)差錯。

一、實驗?zāi)康?/p>

驗證抗凝劑枸櫞酸鈉與肝素分別制備的血漿對實驗《血漿纖維蛋白測定復(fù)鈣雙縮脲法》的影響。

二、實驗原理

于稀釋的兩種血漿中分別加入鈣離子，在使纖維蛋白原轉(zhuǎn)化纖維蛋白使其凝聚形成絮狀物的試管中，吸入雙縮脲試劑來測定纖維蛋白含量，從而驗證哪種抗凝劑適合此實驗。

三、實驗試劑

225.2mmol/l氯化鈣溶液、生理鹽水、雙縮脲試劑、蛋白標準液。

枸櫞酸鈉抗凝劑制備的血漿（B1）、肝素鈉制備的血漿（B2）。

四、實驗器材

一次性試管1.5×10cm、小玻璃棒、0.5ml、5ml刻度吸管、微量加液器

五、實驗步驟

1.表1

2.將上述試管1中的絮狀物用小玻璃棒卷起，并輕輕轉(zhuǎn)動玻璃棒，在試管壁上輕輕擠壓，這樣絮狀物裹在玻璃棒上，用濾紙小心吸干絮狀物上液體。

3.取一支試管（測定管），加入生理鹽水0.1ml，雙縮脲試劑5ml，然后，把裹著絮狀物的小玻璃棒放入其中，置37℃水浴中不斷攪動玻棒，直到纖維蛋白絮狀物完全溶解。此時不要著急，如果絮狀物沒有完全溶解會影響測定的含量。

4.取兩支試管（標準管），加入10倍稀釋的蛋白標準液0.1ml（生理鹽水：蛋白標準液體積比為9︰1），雙縮脲試劑5ml。

5.取第三支試管（空白管），加入蒸餾水0.1ml，雙縮脲試劑5ml，見表2。

6.將以上3支試管混勻后，置37℃水浴10分鐘，然后取出，用540nm波長，以空白管調(diào)“0”，讀出吸光度A（標）、A（測）。

7.根據(jù)公式計算含量

復(fù)鈣雙縮脲法測定血漿蛋白的含量這種方法無疑義，但我們應(yīng)該看到本次實驗用到的是血漿，提到血漿就應(yīng)該考慮到抗凝劑。從實驗步驟1可以看到一次性試管1與一次性試管2的結(jié)果，如果預(yù)先不認真做預(yù)習(xí)，按照一次性試管2的結(jié)果，以下實驗操作無法進行。從而可以看到不同抗凝劑制備的血漿對生化實驗的重要性。分析原因：

首先，對抗凝過程做簡單概述：凝血酶原激活物的形成（Xa、V、Ca2+和PF3復(fù)合物）促使凝血酶原形成（血漿中無活性的因子Ⅱ被激活為有活性的因子Ⅱ）促使纖維蛋白的形成（絮狀物）。

其次，枸櫞酸的抗凝過程：枸櫞酸根與血中鈣離子形成難解離的絡(luò)合物，鈣離子是凝血過程中所需的物質(zhì)之一，血液中鈣離子減少，使血液凝固受阻。而肝素鈉的抗凝過程：肝素鈉是一種含有硫酸根的粘多糖，帶強大的負電荷，能干擾血凝過程的許多環(huán)節(jié)，在體內(nèi)外都有抗凝血作用。其作用機制比較復(fù)雜，主要通過與抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）結(jié)合，而增強后者對活化的Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ和Ⅻ凝血因子的抑制作用。其后果涉及阻止血小板凝集和破壞，妨礙凝血激活霉的形成；阻止凝血酶原變成凝血酶；抑制凝血酶，從而妨礙纖維蛋白原變成纖維蛋白?！杜R床檢驗學(xué)》教材中可以查到。了解兩種抗凝劑的作用機理，我們就不難分析上述實驗結(jié)果的不同。枸櫞酸鈉抑制凝血過程中的鈣離子，如果在體外環(huán)境中加入適量的鈣離子，那么凝血過程又被激活，最終有纖維蛋白絮狀物形成。肝素鈉抗凝是抑制凝血因子阻礙凝血酶的形成，即使加入鈣離子，抗凝過程也不會被激活。從而也就不會有纖維蛋白絮狀物形成。

上述生化實驗過程雖簡單明了，但是在實驗前學(xué)生應(yīng)有充分的預(yù)習(xí)，這是學(xué)生應(yīng)養(yǎng)成的良好習(xí)慣?？鼓齽┑闹R在《臨床檢驗學(xué)》中已學(xué)習(xí)過，那么就應(yīng)該使知識相互貫通。培養(yǎng)學(xué)生對待實驗不僅要有嚴謹?shù)膽B(tài)度，而且還要有科學(xué)理論做根基?！笆谌艘贼~不如授人以漁”，這是我們當代教師應(yīng)該遵循的教育理念。

參考文獻：

[1]沈岳奮.生物化學(xué)檢驗技術(shù).

[2]趙桂芝.臨床檢驗.