摘要：目的 建立簡便的酶比色法測定血中同型半胱氨酸的方法，并與傳統(tǒng)的酶循環(huán)法相比較，評價同型半胱氨酸酶比色法臨床檢測的可行性。方法 通過精密度試驗、線性、干擾實驗，考察方法的可靠性，最后采用加樣回收的方法比較兩種方法的準(zhǔn)確性，并對臨床30份血液樣品進行了酶比色法檢測。結(jié)果 酶比色法具有很高的精密度，較寬的線性范圍，抗干擾能力較強，更高的回收率。結(jié)論 同型半胱氨酸酶比色法原理檢測試劑與目前常用的酶循環(huán)法檢測試劑相比，酶比色法具有更高的準(zhǔn)確性，可用于臨床同型半胱氨酸的檢測。

關(guān)鍵詞：酶比色法； 酶循環(huán)法；同型半胱氨酸；臨床檢測

同型半胱氨酸（Homocysteine， Hcy），即2-氨酸-4巰基丁酸，是一種體內(nèi)蛋氨酸代謝過程中產(chǎn)生的中間產(chǎn)物[1～3]。眾多的臨床研究與細(xì)胞實驗已經(jīng)證實高同型半胱氨酸血癥與冠狀動脈疾病、腦血管疾病、外周血管疾病等多種血管相關(guān)性疾病息息相關(guān)[4～7]。研究也發(fā)現(xiàn)同型半胱氨酸與糖尿病腎病等疾病相關(guān)[8，9]。血漿中Hcy測定已成為國外診斷維生素B12及葉酸缺乏、早期心腦血管疾病監(jiān)控療效的常規(guī)方法[10，11]。檢測同型半胱氨酸常用方法包括放射酶分析法[12]、酶聯(lián)免疫法[13]、氣相色譜-質(zhì)譜 （GC - M S ） 聯(lián)用法、HPLC法[14]、酶比色法[15]、循環(huán)酶法[16]、熒光偏振免疫分析法、高效毛細(xì)管電泳法及顆粒增強免疫比濁法[17]。但放射酶分析法存在放射性，操作繁瑣；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法和HPLC法操作繁瑣，耗時長，儀器價格昂貴；熒光偏振免疫法需要特殊儀器；高效毛細(xì)管電泳法，靈敏度相對偏低；酶比色法和循環(huán)酶法是臨床最常用的同型半胱氨酸，操作方便，耗時較短，不需要衍生等復(fù)雜操作。本研究通過對比酶比色法與循環(huán)酶法兩種同型半胱氨酸檢測方法的結(jié)果的比較，評價兩種檢測方法的臨床適用性，研究時間2013年6 月～9月，報告如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 MS205型分析天平（瑞士，梅特勒-托利多），日立7180全自動生化分析儀（日本，株式會社日立制作所）。

1.2 試劑 同型半胱氨酸檢測試劑盒（酶比色法，重慶中元生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)）；同型半胱氨酸檢測試劑盒檢測試劑（循環(huán)酶法，四川省邁克科技有限公司）；Hcy（美國，Sigma公司）；乳糜（西安立邦制藥有限公司）；血紅蛋白（牛血紅蛋白，北京經(jīng)科宏達(dá)生物公司）；膽紅素（北京經(jīng)科宏達(dá)生物公司）；抗壞血酸等其他試劑均為國產(chǎn)分析純。試劑均于4℃下低溫保存。

1.3 血清樣本 選擇30份2013年6 月～9月于我院就診的患者，空腹采血后，加入肝素抗凝后， 離心分離血漿，-20℃冷凍保存，并用同型半胱氨酸檢測試劑盒（酶比色法和酶循環(huán)法）在日立7180全自動生化分析儀進行測定。

2 方法

2.1 操作方法 酶比色法試劑盒和酶循環(huán)法試劑盒測定參數(shù)設(shè)置和操作嚴(yán)格按照試劑盒廠家說明書規(guī)定進行。

2.2 評價方法 按產(chǎn)品執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)及《臨床化學(xué)體外診斷試劑盒質(zhì)量檢驗總則》對試劑的精密度、線性范圍、抗干擾性進行評價，最后采用加樣回收的方法比較兩種方法的準(zhǔn)確性，并對臨床30份血液樣品進行了酶比色法檢測。

2.3 精密度實驗 取高、中、低濃度的Hcy質(zhì)控液各1份，用酶比色法連續(xù)測定20次，分別測定質(zhì)控液的日內(nèi)和日間重復(fù)性。

2.4 線性和范圍 選擇50.00μmol/L的Hcy質(zhì)控液，用緩沖溶液逐倍稀釋成6個不同濃度的標(biāo)本，用酶比色法重復(fù)測定3次，將測定值（Y）與理論值（X）進行線性回歸分析。

2.5 干擾實驗 以12.0 μmol/L的Hcy質(zhì)控液為基礎(chǔ)，加入不同濃度的乳糜、血紅蛋白、膽紅素和抗壞血酸進行干擾實驗，用酶比色法測定后計算結(jié)果偏差。

2.6 回收率 取已知含量的血漿9份，分別加入含量為12.0、24.0、36.0μmol/L的Hcy質(zhì)控液，每個濃度各三份。用酶比色法和酶循環(huán)法分別測定后，計算回收率。

2.7 臨床樣品測定 采用酶比色法對臨床30份樣品進行Hcy濃度測定，每個樣品重復(fù)測定3次。

3 結(jié)果

3.1 精密度實驗通過 高、中、低濃度精密度結(jié)果比較，結(jié)果表明，本方法的日間精密度的RSD值為2.1%～2.7%，日內(nèi)精密度為1.7～2.5%，RSD值均小于5%，表明方法精密度良好。

3.2線性和范圍通過理論值與實測值的回歸方程，結(jié)果表明，理論值和實測值之間的回歸方程為y=0.9857x+0.4528，相關(guān)系數(shù)（r）為0.9974，表明線性范圍為1.56～50μmol/L。

3.3 干擾實驗經(jīng)過酶比色法測定血漿Hcy的抗干擾實驗結(jié)果，由干擾實驗可知，乳糜、血紅蛋白、膽紅素和抗壞血酸均會對實驗測定結(jié)果產(chǎn)生影響，但總體影響不大，均能達(dá)到《臨床化學(xué)體外診斷試劑盒質(zhì)量檢驗總則》的要求。

3.4 回收率 見表1。

由表1可知，酶比色法的平均回收率為99.3%，酶循環(huán)法平均回收率為93.2%，且酶循環(huán)法每一份樣品的回收率都偏小。當(dāng)樣品含量較小的時候，如2μmol/L 時，測定結(jié)果可能偏小，甚至低于檢測線性范圍。所以酶比色法具有更高的準(zhǔn)確性，更適合臨床樣品的檢測，特別是健康人群的同型半胱氨酸的測定。

3.5 臨床樣品檢驗結(jié)果 采用建立的酶比色法對臨床樣品進行含量測定，測得的結(jié)果，見表2。

4結(jié)論

由于同型半胱氨酸具有重要的臨床意義，對多種疾病的具有重要的指示作用，隨著其檢測技術(shù)的發(fā)展，對其研究也逐漸深入。本研究通過精密度試驗、線性、干擾實驗，考察酶比色法的可靠性，最后采用加樣回收的方法比較酶比色法和酶循環(huán)法的準(zhǔn)確性，最后對臨床30份血液樣品進行了酶比色法檢測，結(jié)果表明同型半胱氨酸酶比色法原理檢測試劑與目前常用的酶循環(huán)法檢測試劑，酶比色法具有更高的準(zhǔn)確性，可用于臨床同型半胱氨酸的檢測。

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編輯/王海靜