摘要：目的 建立測(cè)定透骨消痛膠囊異嗪皮啶含量的方法。方法 采用色譜柱Nova-pak C18（250×4.6mm，4um），流動(dòng)相為甲醇-0.1%甲酸（25：75），檢測(cè)波長(zhǎng)344nm。結(jié)果 用稀乙醇回流提取的方法效果較好，異嗪皮啶在0.6712μg/ml～67.12μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（r=0.9999），平均加樣回收率為101.6%，RSD為1.09%。結(jié)論 該法具有良好的重現(xiàn)性、穩(wěn)定性，可控制透骨消痛膠囊的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：透骨消痛膠囊；異嗪皮啶；高效液相色譜法

透骨消痛膠囊是根據(jù)劉獻(xiàn)祥教授用于治療骨性關(guān)節(jié)炎的臨床經(jīng)驗(yàn)方研制而成的中藥制劑[1，2]，由腫節(jié)風(fēng)、杭白芍、川芎等組成，具有補(bǔ)腎柔肝、活血祛風(fēng)的功效，對(duì)防治膝骨性關(guān)節(jié)炎（OA）療效確切[3]。異嗪皮啶為腫節(jié)風(fēng)中的有效成分，藥典規(guī)定其在腫節(jié)風(fēng)中的含量，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立高效液相色譜法測(cè)定透骨消痛膠囊中異嗪皮啶的方法，達(dá)到控制其質(zhì)量的目的。

1 儀器與試藥

1.1儀器 1100型安捷倫高效液相色譜儀；超純水器；超聲波發(fā)生器。

1.2對(duì)照品及試劑 異秦皮啶對(duì)照品；乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 色譜柱：Nova-pak C18（250×4.6mm，4um）；流動(dòng)相：甲醇-0.1%甲酸（25：75）；檢測(cè)波長(zhǎng)：344nm；柱溫：室溫；流速：1ml.min-1；進(jìn)樣量：10μl（自動(dòng)進(jìn)樣）。理論塔板數(shù)：按異嗪皮啶計(jì)算不得低于2000。見圖1。

2.2提取方法的選擇

2.2.1取樣品0.8g，分別精密加入甲醇、稀乙醇溶劑25ml超聲處理30min，取續(xù)濾液進(jìn)樣，測(cè)定異嗪皮啶成分的峰質(zhì)比。見表1。

2.2.2提取方法的選擇 見表2。

2.3對(duì)照品溶液、供試品溶液與陰性對(duì)照溶液的制備

2.3.1對(duì)照品溶液的制備 取異嗪皮啶對(duì)照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成每1ml含異嗪皮啶5μg的混合溶液，即得。

2.3.2供試品溶液的制備 取本品研細(xì)，取約0.8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，加熱回流30min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻?yàn)V過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3陰性樣品溶液的制備 按處方項(xiàng)下取各味藥材，制作空白樣品，并按供試品溶液制備方法制備腫節(jié)風(fēng)陰性樣品溶液。

2.4專屬性試驗(yàn) 分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果陰性樣品溶液在與對(duì)照品相應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明方中其他各味藥材不干擾異嗪皮啶的測(cè)定。

2.5方法學(xué)考察

2.5.1線性關(guān)系考察 見表3。

2.5.2穩(wěn)定性試驗(yàn) 見表4。

2.5.3重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品，按正文含量測(cè)定方法進(jìn)行6次平行測(cè)定，結(jié)果表明本法具有良好的重現(xiàn)性。

2.5.4回收率試驗(yàn) 見表5。

3 討論

透骨消痛膠囊由腫節(jié)風(fēng)、巴戟天、杭白芍等組成。腫節(jié)風(fēng)為植物草珊瑚Sarcandra glabra .Nakai的干燥全株，味苦，性平，苦能燥濕，辛能發(fā)散，行氣活血，能祛風(fēng)除濕，活血通絡(luò)。中國(guó)藥典規(guī)定本品含異嗪皮啶；不得少于0.020%。本文通過(guò)建立高效液相色譜法測(cè)定透骨消痛膠囊中異嗪皮啶的含量，并進(jìn)行科學(xué)方法考察，并進(jìn)行科學(xué)方法考察，結(jié)果較為滿意，可以作為透骨消痛膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

參考文獻(xiàn)：

[1]林木南，劉獻(xiàn)祥.透骨消痛方治療骨性關(guān)節(jié)炎30例[J].福建中醫(yī)藥，2005，36（4）：15-16.

[2]吳追樂，許惠鳳 ，李西海，等.透骨消痛膠囊含藥血清對(duì)軟骨細(xì)胞活性的影響[J].福建中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，04：24-27.

[3]唐勇，姜杰，孟輝.補(bǔ)腎益氣行血方治療膝骨性關(guān)節(jié)炎44例[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2005，16（9）：902-903.

編輯/哈濤