摘要：目的 觀察PRDX6輔助治療創(chuàng)傷性傷口促進(jìn)愈合的效果。方法 體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞，用MTT法測PRDX6作用后其增殖率，外力損傷已經(jīng)貼壁的皮膚成纖維細(xì)胞加入PRDX6后HE染色電鏡下觀看損傷后細(xì)胞修復(fù)狀況。結(jié)果 PRDX6能促進(jìn)人皮膚成纖維細(xì)胞增殖，并對損傷后的皮膚成纖維細(xì)胞有促進(jìn)修復(fù)作用。結(jié)論 皮膚創(chuàng)傷后，PRDX6能促進(jìn)傷口進(jìn)愈合。

關(guān)鍵詞：人皮膚成纖維細(xì)胞；PRDX6；創(chuàng)傷性；促愈

創(chuàng)傷常會帶來強(qiáng)烈而持久的疼痛。傷口相關(guān)性疼痛是指與開放性傷口直接相關(guān)的有害癥狀或不愉快經(jīng)歷[1]。很多研究結(jié)果[2，3]表明PRDX6在保護(hù)機(jī)體細(xì)胞抗損傷過程中發(fā)揮重要的抗氧化作用，且對正常細(xì)胞無傷害。

1 資料與方法

1.1一般資料 人皮膚成纖維細(xì)胞購于中科院上海細(xì)胞庫；IMEM培養(yǎng)基及胎牛血清均購于美國Gibco公司。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng) 人皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)于含有15%胎牛血清、IMEM完全培養(yǎng)基中，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行貼壁培養(yǎng)，2～3d換液，取對數(shù)生長期細(xì)胞用于實驗。

1.2.2皮膚成纖維細(xì)胞傳代 當(dāng)細(xì)胞80%融合時行傳代培養(yǎng)，棄去培養(yǎng)液并用PBS洗2次，每培養(yǎng)皿加1.5ml胰蛋白酶室溫消化1～3min后，倒置顯微鏡下見細(xì)胞退縮變圓漂動，傾斜培養(yǎng)皿見細(xì)胞呈流沙樣下滑時，立即以含10%FBS的培養(yǎng)液終止消化，離心（1000rpm，5min）棄上清液，細(xì)胞以含15%FBS的IMEM重懸后均勻接種在培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)。

1.2.3 MTT法測PRDX6對皮膚成纖維細(xì)胞增值率 人皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)24h后，對照組加生理鹽水，實驗組分別加含100，200，300，400，500，600，700，800，900，

1000umol/LPRDX6繼續(xù)培養(yǎng)，48h后MTT法測定各孔的吸光值（A值）以示細(xì)胞增殖情況，細(xì)胞增值率（%）=實驗組的A值/對照組的A值×l00%。

1.2.4 PRDX6對皮膚成纖維細(xì)胞損傷后的修復(fù)作用 細(xì)胞傳代時提前在培養(yǎng)皿中放入細(xì)胞爬片，分為兩組。培養(yǎng)24h后分別用移液槍頭劃傷已經(jīng)貼壁的成纖維細(xì)胞，實驗組加500umol/L的PRDX6，對照組加等體積生理鹽水，繼續(xù)培養(yǎng)48h后HE染色電鏡下觀看。

2 結(jié)果

2.1 MTT法檢測皮膚成纖維細(xì)胞增值率（圖1） 可以看出隨著PRDX6濃度的增高，人皮膚成纖維細(xì)胞的增值率呈現(xiàn)出濃度依賴作用。

2.2 PRDX6對成纖維細(xì)胞損傷后的修復(fù)作用（圖2） A為對照組經(jīng)移液槍頭劃傷細(xì)胞后細(xì)胞纖維斷裂，劃痕處無細(xì)胞生長貼壁；而B實驗組劃痕處可見被損傷的細(xì)胞有纖維修復(fù)。表明PRDX6可促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞損傷后的修復(fù)。

3 討論

疼痛不但可引起軀體的不舒適反應(yīng)：心率和呼吸增快、血壓升高、出汗等，還可引起負(fù)性心理反應(yīng)：如恐懼、焦慮、緊張、煩躁不安等[4]。成纖維細(xì)胞作為創(chuàng)傷愈合過程中的主要效應(yīng)細(xì)胞，對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損有著十分重要的作用，其不斷地合成和分泌大量的膠原并沉積于創(chuàng)面促進(jìn)其愈合[5-6]。

本實驗中隨著PRDX6濃度的增高，皮膚成纖維細(xì)胞的增殖率呈遞增趨勢，表現(xiàn)為一定的濃度依賴性，表明PRDX6對正常皮膚成纖維細(xì)胞在一定的濃度范圍之內(nèi)有促進(jìn)生長作用。由圖2可以看出人皮膚成纖維細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，呈長梭形，核呈卵圓形，呈放射狀，編織狀或漩渦狀排列，輪廓清楚。圖2中對照組經(jīng)移液槍頭劃傷細(xì)胞后細(xì)胞纖維斷裂，劃痕處無細(xì)胞生長貼壁；而圖2實驗組劃痕處可見被損傷的細(xì)胞有纖維修復(fù)，表明PRDX6可促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞損傷后修復(fù)。

綜上所述：PRDX6有促進(jìn)人成纖維細(xì)胞增殖的作用，證明了其對正常細(xì)胞生長的無毒性且促進(jìn)細(xì)胞生長；能保護(hù)機(jī)體正常細(xì)胞的增值并促進(jìn)其損傷后修復(fù)， 可促進(jìn)患者創(chuàng)傷后傷口愈合，減少創(chuàng)傷疼痛時間。

參考文獻(xiàn)：

[1]Woo K Y， Sibbald R G. The improvement of wound-associated pain and healing trajectory with a comprehensive foot and leg ulcer care mode[J]. J Wound Ostomy Continence Nurs， 2009， 36（2）： 184-191.

[2]陳日玲，楊天驕.PRDX6 蛋白對小鼠骨髓造血干細(xì)胞保護(hù)作用及分化作用的研究[J].中華醫(yī)學(xué)會第十七次全國兒科學(xué)術(shù)大會論文匯編.471

[3]王燕，Aron B.Fisher，宋善路.抗氧化酶PRDX6保護(hù)肺II型上皮細(xì)胞抵抗過氧化氫誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用[J].中華實用兒科學(xué)雜志，2012；27（16）：1278-1281.

[4]蔣琪霞， 李曉華，周昕.紅光和紅外線輔助治療創(chuàng)傷性傷口減痛促愈效果觀察[J].護(hù)理學(xué)雜志，2012； 27（11）： 19-22.

[5]Ogawa R. Keloids as a serious disease such as malignancy[J].Plast Reconstr Surg，2008，122（3）：993-994.

[6]Robles DT， Moore E， Draznin M， et al. Keloids： pathophysiology and management[J]. Dermatol Online J，2007，13（3）：9.

編輯/哈濤