摘要：目的 介紹我院對(duì)傳統(tǒng)銀鹽染色法的改良方法及在幽門(mén)螺旋桿菌臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果與價(jià)值。方法 對(duì)我院收治的417例患者采用我院改良銀鹽染色法進(jìn)行幽門(mén)螺旋桿菌的檢驗(yàn)，同時(shí)與快速尿素酶試驗(yàn)和14C-尿素呼氣試驗(yàn)兩種檢驗(yàn)方法進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果 我院改良銀鹽染色法對(duì)幽門(mén)螺旋桿菌的陽(yáng)性檢出率、敏感度以及特異度均顯著高于其他兩種方法，比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 我院改良銀鹽染色法在幽門(mén)螺旋桿菌臨床檢驗(yàn)中不僅陽(yáng)性檢出率、敏感度、特異度均令人滿意，而且較傳統(tǒng)銀鹽染色法在操作流程方面更為合理簡(jiǎn)便，建議在臨床進(jìn)一步推廣使用。

關(guān)鍵詞：幽門(mén)螺旋桿菌；檢驗(yàn)；銀鹽染色法；改良

幽門(mén)螺旋桿菌（Helicobacter pylori，Hp）為一種微需氧的革蘭陰性螺旋狀細(xì)菌，其不僅是慢性活動(dòng)性胃炎與消化性潰瘍的重要致病菌，而且也是萎縮性胃炎與腸上皮化生等癌前病變的促成因子之一，故國(guó)際衛(wèi)生組織（WHO）已將其列為第一類(lèi)致癌因子，并建議臨床應(yīng)加強(qiáng)對(duì)Hp的檢驗(yàn)工作[1]。但就其檢驗(yàn)方法來(lái)看，銀鹽染色法（Warthin-Sharry，W-S）可謂是目前應(yīng)用最為普遍同時(shí)效果也最為滿意的檢驗(yàn)方法之一，但基于該方法在操作方面的復(fù)雜性，以至于在不同區(qū)域不同醫(yī)療機(jī)構(gòu)中的具體開(kāi)展流程時(shí)常存在有不同程度的差別，且多數(shù)均又存在不盡相同的不完善之處[2]。近些年內(nèi)，我院在傳統(tǒng)W-S法基礎(chǔ)上進(jìn)行了一定改良工作并在臨床實(shí)踐中獲得了頗為滿意的效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料 選擇于2012年5月～2014年6月因表現(xiàn)有不同程度消化系統(tǒng)癥狀并在我院接受胃鏡檢查的417例患者作為本研究對(duì)象，其中包括男255例，女162例；年齡18～71歲，平均（40.8±15.6）歲。所有患者均排除近1個(gè)月內(nèi)有使用過(guò)任何抑酸藥物及抗Hp藥物者以及近1 w內(nèi)有出現(xiàn)急性消化道出血者。

1.2方法 所有患者均在接受檢查前保持12 h以上的空腹，準(zhǔn)備妥當(dāng)后即在電子胃鏡輔助下于距幽門(mén)3 cm處取胃黏膜3塊待檢。其中2塊分別常規(guī)采用快速尿素酶試驗(yàn)（RUT法）與14C-尿素呼氣試驗(yàn)（14C-UBT法）進(jìn)行檢驗(yàn)[3]。另1塊則采用我院改良W-S法進(jìn)行檢驗(yàn)，具體方法為：首先對(duì)標(biāo)本采用0.14 mol/L的甲醛水溶液進(jìn)行固定處理，石蠟包埋切片（以4 um厚度為宜），接著采用二甲苯脫石蠟，之后再進(jìn)行脫苯處理，采用各級(jí)乙醇過(guò)度到蒸餾水的程序進(jìn)行刷洗，最后再將樣本在避光條件下置于維持溫度在60℃濃度為0.06 mol/L的AgNO3水溶液中進(jìn)行1 h的侵染處理，完成染色后再次進(jìn)行雙蒸餾水刷洗，接著將樣本置于顯影液中進(jìn)行顯影，若在2～4 min內(nèi)觀察到有出現(xiàn)組織變?yōu)樽睾稚珪r(shí)即可結(jié)束顯影，同時(shí)傾倒出顯影液，并用自來(lái)水對(duì)切片適當(dāng)涮洗，最后再將切片脫水處理至透明，采用光學(xué)樹(shù)脂封固后即可供醫(yī)生閱片診斷。

1.3陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn) RUT法中若標(biāo)本在試劑中放置30 min內(nèi)變?yōu)榧t色即認(rèn)為是陽(yáng)性；14C-UBT法中最后的14C放射強(qiáng)度測(cè)定結(jié)果若>1.67 Bq則認(rèn)定為陽(yáng)性；改良W-S法中，若閱片時(shí)觀察到組織與細(xì)胞核分別呈金黃色與棕黑色，并在胃黏膜上皮觀察到呈短棒狀或S狀黑色影像則判定為陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 對(duì)本次研究所得的數(shù)據(jù)通過(guò)SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三種檢驗(yàn)方法的陽(yáng)性率比較 改良（W-S）法、RUT法以及14C-UBT法三種檢驗(yàn)方法的陽(yáng)性率分別為81.8%、66.7%與67.4%，比較以改良（W-S）法顯著更高，與其他兩種方法比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2三種檢驗(yàn)方法的敏感度與特異度比較 改良（W-S）的敏感度與特異度分別達(dá)到了100.0%與96.4%，均顯著高于RUT法以與14C-UBT法（P<0.05）；同時(shí)RUT法與14C-UBT法的敏感度與特異度組間比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表2。

3討論

相關(guān)資料顯示，在我國(guó)，一般人群的Hp感染率已經(jīng)達(dá)到了50%以上[4]，在該種情況下，人們對(duì)Hp研究的關(guān)注愈發(fā)上升到了一個(gè)全新的高度，同時(shí)相關(guān)Hp感染的診斷學(xué)方法也成為了Hp研究領(lǐng)域的重要課題。這也在很大程度上促進(jìn)多中檢驗(yàn)方法的誕生，但基本上都尚存有某些不足之處。

就本研究所采用的3種檢驗(yàn)方法來(lái)看，RUT法雖然具備廉價(jià)、操作簡(jiǎn)便與反應(yīng)快速的有點(diǎn)，但同時(shí)其檢測(cè)結(jié)果也很容易受到標(biāo)本細(xì)菌密度與試劑靈敏度等因素的影響，以至于其陽(yáng)性率與假陰性率均難以獲得很好控制，普遍認(rèn)為不應(yīng)將其單獨(dú)作為判定Hp感染的依據(jù)。而14C-UBT法雖然為目前比較普遍認(rèn)可的非侵入性檢驗(yàn)方法，但由于口咽部的尿素酶陽(yáng)性細(xì)菌也很容易對(duì)尿素酶活性造成影響，故采用本法進(jìn)行Hp檢驗(yàn)時(shí)并不能達(dá)到非常理想的敏感度與特異度，而且在受到某些消化道雜菌或服藥與呼氣間隔時(shí)間等多種情況的影響，其檢驗(yàn)結(jié)果也很容易出現(xiàn)假陰性。在次基礎(chǔ)上，在當(dāng)前多種檢測(cè)侵入性Hp的方法當(dāng)中，微生物培養(yǎng)法因其敏感性非常高而且特異度甚至可達(dá)到100%，故目前已有不少學(xué)者建議將此類(lèi)方法作為診斷Hp感染的金標(biāo)準(zhǔn)，而W-S法即為此類(lèi)方法中的重要成員之一。但傳統(tǒng)的W-S法因?yàn)椴僮鞑襟E繁雜等原因常導(dǎo)致操作人員難以較好掌握，以至于可能致使最后檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)著色不牢顯影不清等不足[5]。而經(jīng)我院對(duì)W-S法進(jìn)行改良后筆者認(rèn)為已在以下3方面獲得了顯著進(jìn)步：①將傳統(tǒng)的醋酸鹽緩沖液用雙蒸餾水替代，在很大程度上簡(jiǎn)化了試劑配制；②顯影擺脫了傳統(tǒng)方法必須將溫度控制在40℃～50℃范圍的約束，本法在室溫下即可完成顯影故其過(guò)程也更為簡(jiǎn)單；③將染色時(shí)間延長(zhǎng)至2～4 min，大大提升了染色質(zhì)量，診斷更為明確。

本研究結(jié)果顯示，我院所開(kāi)展的改良W-S法較RUT法與14C-UBT法在陽(yáng)性檢出率、敏感度以及特異度3方面效果均顯著更具優(yōu)勢(shì)，同時(shí)也較傳統(tǒng)W-S法在操作流程方面更為合理簡(jiǎn)便，建議在臨床進(jìn)一步推廣使用。

參考文獻(xiàn)：

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[2]劉莉，劉都禮，李佽，等.檢測(cè)胃幽門(mén)螺旋桿菌三種染色方法比較[J].華西醫(yī)學(xué)，2010，25（1）：80-81.

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編輯/肖慧