摘要：目的 對索林LIAISON XL化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)主要性能進(jìn)行評價。方法 以CLSI（美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會）制定的評價標(biāo)準(zhǔn)，通過一系列實驗設(shè)計，對索林LIAISON XL化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)乙肝兩對半檢測的精密度、線性范圍、符合率、分析靈敏度等進(jìn)行評價。結(jié)果 LIAISON XL化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)進(jìn)行乙肝兩對半檢測，批內(nèi)不精密度CV在 1.56～3.07%，批間不精密度在2.64～5.44%，HBsAg、HBsAb、HBeAg的分析靈敏度分別為 0.03IU/ml 、5 mlU/ml、0.01PEIU/ml。結(jié)論 LIAISON XL化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)各方面性能良好，測定樣本快速，準(zhǔn)確度精密度可靠，能適應(yīng)醫(yī)院臨床樣本的檢測需要。

關(guān)鍵詞：乙肝血清標(biāo)志物；化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)；性能評價

乙型肝炎（hepatitis B）是由HBV感染引起的傳染病，世界范圍內(nèi)均有流行，我國則是乙型肝炎病毒感染的高發(fā)區(qū)[1]，所有乙肝患者中有15%～25%將死于慢性肝?。ǜ伟斡不?，因此，HBV感染是一個嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。及時準(zhǔn)確的實驗室診斷方法對效控制HBV傳播顯得尤為重要。隨著對乙肝研究的深入和新的抗病毒藥物的問世，僅僅定性檢測己經(jīng)滿足不了臨床需求。近年來，隨著定量免疫檢測技術(shù)平臺的完善和新的檢測技術(shù)化學(xué)發(fā)光技術(shù)的發(fā)展和成熟[2，4]，乙型肝炎定量檢測己經(jīng)成為不少實驗室的選擇。隨著實驗室規(guī)范化建設(shè)的發(fā)展以及對檢驗質(zhì)量的追求，對于實驗室檢測系統(tǒng)的性能評價己經(jīng)越來越受到人們重視。我們對本科室目前新投入使用的LIAISON XL化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)及配套乙肝兩對半檢測試劑盒進(jìn)行了初步性能評價，現(xiàn)報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料 索林LIAISON XL化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)，乙肝兩對半檢測試劑盒及配套校準(zhǔn)品，上海市臨床檢驗中心提供的室內(nèi)質(zhì)控物（批號1401）。

1.2標(biāo)本來源 本院門診及住院患者血清以及各項目臨床異常高值標(biāo)本。

1.3方法

1.3.1實驗準(zhǔn)備 對儀器進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)及校準(zhǔn)，連續(xù)觀察儀器運行狀態(tài)一周，運行穩(wěn)定且狀態(tài)良好，熟悉儀器操作及實驗步驟后進(jìn)行各項性能評價。所有實驗運行均在儀器狀態(tài)良好，質(zhì)控在控前提下進(jìn)行。

1.3.2實驗設(shè)計

1.3.2.1 批內(nèi)及批間不精密度 依據(jù)NCCLS-EP15A文件，將患者混合血清分別分裝5管放置于-20℃冷凍保存，每天解凍1管上機(jī)重復(fù)檢測4次，連續(xù)5d。

1.3.2.2 線性評價 按照NCCLS-EP6要求：各選取一份高值（H）和低值（L）患者標(biāo)本（必須接近檢測高限和低限），用于線性范圍參數(shù)驗證實驗。樣本分別按H、4H+L、3H+2L、2H+3L、H+4L、L的比例進(jìn)行稀釋，每個稀釋度重復(fù)測定2次，計算均值。

1.3.2.3分析靈敏度 使用接近檢測下限的患者標(biāo)本， 將樣本上機(jī)后連續(xù)檢測20次，計算該濃度下光信號的檢測數(shù)據(jù)，統(tǒng)計平均值（mean）、標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）、變異系數(shù)（CV）。變異在20%內(nèi)為可接受。

1.3.2.4符合率 按照NCCLS-EP12-A2文件要求，HBeAb、HBcAb的檢測結(jié)果是以index的形式表達(dá)定性結(jié)果，符合率采用陰陽性樣品各50份與原先使用的LIAISON發(fā)光分析儀檢測結(jié)果做比對。

1.3.2.5數(shù)據(jù)處理 所有數(shù)據(jù)均使用Microsoft office Excel 2003軟件處理。

2結(jié)果

2.1批內(nèi)及批間不精密度評價 見表1所示，本實驗室檢測乙肝標(biāo)志物所得CV均在廠家聲明的范圍之內(nèi)，為可接受水平。

2.2 LIAISON X檢測乙肝標(biāo)志物線性評價 將實測值與理論值作比較，計算 y=bx+a，驗證線性范圍。斜率b值在1±0.05范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)r≥0.975即線性符合要求。HBsAg線性測試結(jié)果分別見表2及圖1所示。用相同方法分別驗證HBsAb、 HBeAg、HBeAb、HBcAb檢測線性結(jié)果見表3。

2.3分析靈敏度驗證 廠家提供的HBsAg、HBsAb 、HBeAg的檢出下限分別為 0.03IU/ml、5 mlU/ml、0.01PEIU/ml。采用接近檢出下限的患者標(biāo)本，連續(xù)檢測20次，得到該濃度下光信號的檢測數(shù)據(jù)，平均值（mean）分別為716.9、545.05、402.45；標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD） 分別為72.2123、94.5696、52.1864；變異系數(shù)（CV） 分別為10.07%、17.35%、12.97%，變異系數(shù)均在20%以下，為可接受范圍。

2.4符合率 用患者血清樣本對兩測試系統(tǒng)進(jìn)行方法學(xué)比對， HBeAb、HBcAb的檢測結(jié)果是以index的形式表達(dá)定性結(jié)果，符合率采用陰陽性樣品各50份與原先使用的LIAISON發(fā)光分析儀檢測結(jié)果做比對。兩種測試結(jié)果完全相同，符合率100%，即敏感性和特異性均為100%，敏感性差值（D）=0%；特異性差值（D）=0%。兩個系統(tǒng)檢測結(jié)果有很好地一致性（Kappa值=1）。

3討論

HBV血清標(biāo)志物的檢測方法包括酶聯(lián)免疫分析法（EIA）、放射免疫分析法（RIA）、微球酶免分析法（MEIA）、以及化學(xué)發(fā)光免疫分析法等。全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析方法極大地改善了HBV標(biāo)志物檢測的靈敏度和特異性。然而，由于免疫分析方法難以標(biāo)準(zhǔn)化，導(dǎo)致不同免疫分析系統(tǒng)測定結(jié)果之間存在差異，因此為保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，對全自動免疫分析系統(tǒng)進(jìn)行客觀的性能評估非常重要[3-5]。

檢測結(jié)果的重復(fù)性對乙肝標(biāo)志物檢測非常重要，可用精密度來評價結(jié)果的重復(fù)性。本文依據(jù)NCCLS-EP15A文件[6]，將患者混合血清分別分裝5管放置于-20℃冷凍保存，每天解凍1管上機(jī)重復(fù)檢測4次，連續(xù)5d。結(jié)果表明LIAISON XL化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)進(jìn)行乙肝兩對半檢測時很好的重復(fù)性，，批內(nèi)不精密度CV在 1.56～3.07%，總不精密度在2.64～5.44%。

檢測患者標(biāo)本時，當(dāng)標(biāo)本中乙肝標(biāo)志物濃度在檢測系統(tǒng)的線性范圍時，檢測結(jié)果更接近于被測物的真值，此謂檢測結(jié)果的可靠性。對于LIAISON XL檢測乙肝標(biāo)志物的線性范圍，未見有文獻(xiàn)進(jìn)行相關(guān)評價，廠家提供的申明認(rèn)為線性斜率b值在1±0.05范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)r≥0.975即線性符合要求。本驗證試驗所得HBsAg、 HBsAb、 HBeAg、HBeAb、HBcAb均有良好的線性范圍（斜率b在0.9608～1.0190 之間， r2 為0.9963～0.9998），能夠確保高值樣在稀釋的條件下，得到較高可信度的檢測結(jié)果。使用接近檢測下限的患者標(biāo)本， 將樣本上機(jī)后連續(xù)檢測20次，得到該濃度下光信號的檢測數(shù)據(jù)，計算變異系數(shù)（CV）均在20%以下，表明該檢測系統(tǒng)的分析靈敏度符合廠家的申明。

目前，國內(nèi)乙肝標(biāo)志物的檢測主要采用ELISA法和各種化學(xué)發(fā)光法。檢測試劑、儀器、操作人員等的差異，同一檢測標(biāo)本在不同實驗室、不同檢測方法、不同檢測系統(tǒng)之間檢測結(jié)果的一致性難以得到保證。LIAISON XL化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)是LIAISON升級版，反應(yīng)倉位增加，加樣的獨立性及一次性使用的吸樣頭避免了交叉污染的可能。按照NCCLS-EP12-A2文件要求[7]，HBeAb、HBcAb的檢測結(jié)果是以index的形式表達(dá)定性結(jié)果，本研究采用陰陽性樣品各50份與原先使用的LIAISON發(fā)光分析儀檢測結(jié)果作比對，計算符合率，兩者測試結(jié)果完全相同，符合率100%，確保了檢測結(jié)果的一致性。

隨著實驗室規(guī)范化建設(shè)的發(fā)展以及對檢驗質(zhì)量的追求，對于實驗室檢測系統(tǒng)的性能評價己經(jīng)越來越受到人們重視。綜合本研究對LIAISON XL化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)檢測乙肝標(biāo)志物HBsAg、 HBsAb、 HBeAg、HBeAb、HBcAb精密度、線性范圍、符合率、分析靈敏度等的系統(tǒng)評價，表明該系統(tǒng)測定樣本快速，各方面性能良好，能適應(yīng)醫(yī)院臨床樣本的檢測需要。

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[7] Clinical and Laboratory Standards Institute.Userprotocol for evaluation of qualitative test performance；approved guideline[J].EP12-A2，CLSI.2008.編輯/申磊