摘要:目的 探討淫羊藿苷(ICA)對東莨菪堿所致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠的保護(hù)作用。方法 40只小鼠隨機(jī)分為4組(對照組,模型組,ICA低、高劑量組)。連續(xù)給藥10d,通過自主活動、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測學(xué)習(xí)記憶能力的改變。結(jié)果 ICA可以改善記憶障礙小鼠的自主活動次數(shù)、空間探索能力以及定位航行能力,縮短小鼠在空間探索及定位航行實(shí)驗(yàn)的潛伏期。結(jié)論 淫羊藿苷可改善東莨菪堿所致小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙。
關(guān)鍵詞:淫羊藿苷;東莨菪堿;學(xué)習(xí)記憶障礙;保護(hù)作用
阿爾茨海默?。?Alzheimer's disease,AD) 是一種以認(rèn)知功能障礙為主要特征的漸進(jìn)性神經(jīng)退行性疾病,隨著社會老齡化,阿爾茨海默病發(fā)病率逐年增高,嚴(yán)重影響老年人的生活質(zhì)量。因此探尋該病的病因和治療具有深遠(yuǎn)的臨床意義和社會意義。目前,臨床治療癡呆多選用膽堿酯酶抑制劑。為尋找有效治療藥物,經(jīng)查閱大量的文獻(xiàn)資料,小檗科淫羊?qū)僦参镆蜣剑℉erba Epimedii),其主要有效成分為淫羊藿苷(icariin)[1-2]??商岣吣X內(nèi)胺類遞質(zhì)水平,對氧自由基有較強(qiáng)的清除能力,具有抗氧化、延緩衰老的作用,還可提高免疫功能,抑制血管平滑肌細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流,降低腦血管阻力,改善腦缺血的癥狀,抑制血栓形成。本研究旨在探討淫羊藿苷對東莨菪堿所致鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的影響及其作用機(jī)制,為其進(jìn)一步研究提供基礎(chǔ)藥理學(xué)依據(jù)。
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 動物 BALB-C小鼠,♀♂兼半,體重(24g±2)g,由河南科技大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供。
1.2 藥物與試劑 淫羊藿苷(西安昊軒生物科技有限公司,批號20140218,純度:98%);注射用丁溴東莨菪堿(成都天臺山制藥有限公司,批號120701);氯化鈉注射液0.9%(河南科倫藥業(yè)有限公司,批號B14012004-2);膽堿酯酶試劑盒(南京建成生物工程研究所)。
1.3 儀器 冷凍高速離心機(jī)(TGL-16G,上海安亭科學(xué)儀器廠);722S分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司);FA1004B(上海精密科學(xué)儀器有限公司);Morris水迷宮(成都泰盟有限公司)。
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 分組 BALB-C小鼠40只,隨機(jī)分為4組:對照組(生理鹽水,0.1ml/10g,ip)、模型組(東莨菪堿,0.1ml/10g,ip)、淫羊藿苷高、低劑量組(在模型組基礎(chǔ)上給淫羊藿苷75mg/kg、25mg/kg,ig)。
2.2 自主活動實(shí)驗(yàn) 給藥10d后進(jìn)行自主活動實(shí)驗(yàn),讓小鼠在活動盒(4×6個格,每格8.5cm×8.5cm)內(nèi)進(jìn)行自主活動,記錄小鼠在5min內(nèi)所走的格子數(shù)。
2.3 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) 各組于給藥第11d進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)。平臺放置于其中的一個象限中間,水池水面高出平臺2cm,水溫控制在(25±2)℃。在池中注水并放入適量牛奶使水呈乳白色,每只小鼠身上帶有黃色標(biāo)記,第一天進(jìn)行定位航行,訓(xùn)練1次,60s未找到平臺者,隨將其放置平臺上10s進(jìn)行引導(dǎo),記錄潛伏期和有效運(yùn)動距離。第2、3、4d重復(fù)進(jìn)行。第5d進(jìn)行空間探索測試,撤除平臺,在同樣的入水點(diǎn)將小鼠放入水中,讓小鼠在水中游泳60s,記錄有效運(yùn)動時間和有效運(yùn)動距離[3-4]。
2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn),數(shù)據(jù)用x±s表示。
3 結(jié)果
3.1 自主活動實(shí)驗(yàn)結(jié)果 與對照組相比,模型組自主活動次數(shù)明顯減少;與模型組相比,淫羊藿苷組自主活動明顯增加(P<0.05),見表1。
3.2 Morrois水迷宮實(shí)驗(yàn)
3.2.1藥物對小鼠定位航行能力的影響如圖1~4。
與對照組相比,模型組的潛伏期長(P<0.05),有效運(yùn)動距離短,表明模型組小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力差,造模成功;與模型組相比,淫羊藿苷2個劑量組的潛伏期短,有效運(yùn)動距離長,表明淫羊藿苷對小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力具有改善作用(見表2)。
3.2.2 藥物對小鼠空間探索能力的影響 ICA對空間搜索能力的影響:與對照組相比,模型組的空間搜索能力下降,在平臺象限停留的時間顯著縮短(P<0.05);有效區(qū)域運(yùn)動距離顯著減少(P<0.05)。ICA組小鼠的探索能力明顯提高(見表3)。
由表3及探索軌跡圖像可見:模型組搜索距離明顯延長,在原安全島所在象限的搜索時間明顯減少。淫羊藿苷組均可縮短小鼠的逃避潛伏期及搜索距離,明顯延長在原安全島所在象限的搜索時間,增加游泳距離。
4 討論
隨著老齡人的增加,老年癡呆發(fā)病率呈上升趨勢,老年性癡呆是以進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙為主要臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病,學(xué)習(xí)記憶障礙是其主要表現(xiàn)。老年斑、神經(jīng)纖維纏結(jié)和神經(jīng)元丟失為其特征,眾多學(xué)說如中樞膽堿能低下、鈣穩(wěn)態(tài)失衡、細(xì)胞凋亡、缺氧能量代謝障礙等為其發(fā)病機(jī)制,因此,目前對其治療采用綜合方法,臨床治療的一線藥物多是用擬膽堿藥、擴(kuò)腦血管藥以及抗氧化藥等[5-6]。
本實(shí)驗(yàn)通過腹腔注射東莨菪堿,較好的建立了癡呆小鼠模型。在傳統(tǒng)西藥治療的基礎(chǔ)上,中草藥的開發(fā)利用將為其治療保全增效,淫羊藿性味辛甘、溫,有補(bǔ)腎壯陽、祛風(fēng)除濕的功效。還具有強(qiáng)心、降血壓、抗心律失常、增加腦血流量、抑菌、抗病毒、抗炎、降血脂、抗腫瘤等多種作用,具有較高的藥用和保健價值。其有效成分淫羊藿苷能增加心腦血管血流量、促進(jìn)造血功能、免疫功能及骨代謝,具有補(bǔ)腎壯陽、抗衰老、抗腫瘤等功效[7-8]。通過本實(shí)驗(yàn)研究可見淫羊藿苷明顯縮短到達(dá)平臺的潛伏期,有效距離明顯延長等,ICA改善學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能。為其今后的開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ),至于其作用機(jī)制尚有待于進(jìn)一步的探討。
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