摘要以蘋(píng)果清汁為樣品，優(yōu)化多酚檢測(cè)條件，建立了不同品種蘋(píng)果清汁中多酚的HPLC指紋圖譜。結(jié)果表明，采用Welchrom C18色譜柱，在檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量20 μl，流動(dòng)相0.3%三氟乙酸水溶液和甲醇（流速1 ml/min）以及梯度洗脫的條件下，標(biāo)定了12個(gè)共有指紋峰，測(cè)定出10個(gè)品種蘋(píng)果清汁多酚的指紋相似度均在0.900以上，多酚含量為1 974～3 598 μg/ml，初步建立了蘋(píng)果清汁的高效液相指紋圖譜。該方法可為蘋(píng)果加工企業(yè)對(duì)蘋(píng)果多酚的質(zhì)量進(jìn)行定性、定量地控制提供試驗(yàn)依據(jù)。

關(guān)鍵詞 蘋(píng)果清汁；多酚；指紋圖譜；高效液相色譜分析

中圖分類(lèi)號(hào)S661.1；TS255.7文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）24-08335-06

HPLC Fingerprint of Polyphenol Compounds in Apple Juice

DENG Hong， MENG Yonghong et al（College of Food Engineering and Nutritional Science， Shaanxi Normal University， Xi’an， Shaanxi 710062）

AbstractThe HPLC fingerprint of polyphenols in different varieties apple juice was established using apple juice as a sample and after optimizing the polyphenol analysis conditions. The results show that under those conditions of using Welchrom C18 column， at the detection wavelength of 280 nm， the column temperature 30 ℃， amount of sample 20 μl， mobile phase of 0.3% three trifluoroacetic acid aqueous solution and methanol （flow 1 ml/min）， gradient elution， 12 common fingerprint peaks were determined. As well as the finger print similarity of polyphenol is above 0.900， and the content of polyphenol in 10 categories apple juice was 1 974 to 3 598 μg/ml. So the HPLC fingerprint of apple juice was initially established. This method will provide the test basis for apple juice processing enterprises in their qualitative and quantitative analysis and control of apple polyphenol.

Key wordsApple juice； Polyphenol； Fingerprint； HPLC analysis

蘋(píng)果（Malus domestica）是薔薇科蘋(píng)果亞科蘋(píng)果屬的落葉喬木。蘋(píng)果的果實(shí)富含礦物質(zhì)和維生素，是人們最常食用的一種水果。我國(guó)具有豐富的蘋(píng)果資源，除大部分蘋(píng)果用以鮮食外，還有部分蘋(píng)果用于濃縮果汁的生產(chǎn)。目前，我國(guó)蘋(píng)果濃縮汁產(chǎn)業(yè)規(guī)模較大，僅陜西就有多家蘋(píng)果濃縮汁生產(chǎn)企業(yè)，且濃縮蘋(píng)果汁產(chǎn)量位列世界濃縮蘋(píng)果汁生產(chǎn)和出口第一[1-2]。濃縮果汁以其可口的味道、低廉的價(jià)格，深受?chē)?guó)內(nèi)外飲料生產(chǎn)商的喜愛(ài)。

蘋(píng)果多酚（Applepolyphenols，APP）是蘋(píng)果中的一種次生代謝產(chǎn)物，具有預(yù)防高血壓、抗腫瘤、阻礙紫外線吸收等多種生理保健功能[3-5]，是蘋(píng)果汁的主要營(yíng)養(yǎng)功效成分之一。研究表明，蘋(píng)果多酚化合物的組分和含量因其品種、種植條件、氣候等條件的不同而改變，從而影響蘋(píng)果汁產(chǎn)品的質(zhì)量。

由于蘋(píng)果多酚（APP）是蘋(píng)果中所含的多元酚類(lèi)物質(zhì)的混合體，其產(chǎn)品質(zhì)量無(wú)法用單一的組分說(shuō)明，所以建立一種能夠綜合反映蘋(píng)果中多酚組分及其含量的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法非常有必要。指紋圖譜[6-7]是國(guó)內(nèi)外能普遍接受的一種食品及藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)的模式，它可宏觀地綜合分析其所含成分的復(fù)雜性和相關(guān)性，能更好地評(píng)價(jià)蘋(píng)果多酚的質(zhì)量；因而建立蘋(píng)果汁多酚的高效液相（HPLC）指紋圖譜對(duì)控制多酚的質(zhì)量及蘋(píng)果汁產(chǎn)品的摻假鑒別具有重要的意義。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1試驗(yàn)原料與試劑。試驗(yàn)收集了10個(gè)不同品種的蘋(píng)果樣品（表1），0～5 ℃低溫冰箱保存，分析前自行榨汁獲得蘋(píng)果清汁供提取多酚用。

3 結(jié)論

蘋(píng)果清汁多酚的高效液相色譜檢測(cè)的條件為：檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，流動(dòng)相為甲醇-0.3%三氟乙酸水溶液，梯度洗脫程序?yàn)椋?～70 min，B為10%～45%；70～80 min，B為50%～50%，流速為1 ml/min。

通過(guò)對(duì)蘋(píng)果清汁多酚指紋圖譜的研究，發(fā)現(xiàn)不同品種的蘋(píng)果清汁的多酚雖然出現(xiàn)了相應(yīng)的主成分峰，但是峰高和峰面積具有顯著性差異，說(shuō)明蘋(píng)果多酚與蘋(píng)果的品種、產(chǎn)地、種植條件等因素有關(guān)。

不同品種蘋(píng)果清汁多酚的12種共有峰中標(biāo)定的9種單體酚分別是兒茶素、綠原酸、咖啡酸、表兒茶素、金絲桃苷、蘆丁、根皮苷、槲皮苷、槲皮素。其中含量最高的是綠原酸（2號(hào)峰），含量最低的是槲皮素（12號(hào)峰）。

該試驗(yàn)初步建立的蘋(píng)果清汁的高效液相指紋圖譜方法，其精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性均很好，測(cè)定出10種蘋(píng)果清汁多酚的指紋相似度均在0.900以上，蘋(píng)果清汁總多酚含量為1 974～3 598 μg/ml。

參考文獻(xiàn)

[1] 楊杰，辛力.2013年我國(guó)蘋(píng)果市場(chǎng)發(fā)展態(tài)勢(shì)評(píng)述[J].煙臺(tái)果樹(shù)，2014（1）：4-6.

[2] 魏公銘.提升我國(guó)蘋(píng)果產(chǎn)業(yè)綜合實(shí)力[N].中國(guó)食品報(bào)，2014-01-29（004）.

[3] HAMAUZU Y，IRIE M，KONDO M，et al.Anti ulcerative properties of crude polyphenols and juice of apple，and Chinese quince extracts[J].Food Chemistry，2008，108（2）：488-495.

[4] REMINGTON R，CHAN A，TCHANTCHOU F，et al.Neuroprotective effects of apples on cognition and Alzheimer's disease[J].Agro Food Industry HiTech，2010，20（6）：30-32.

[5] 譚飔，秦曉曉，蘇卿，等.蘋(píng)果生物活性物質(zhì)研究與利用現(xiàn)狀[J].食品工業(yè)科技，2013（1）：358-361，367.

[6] 劉文，蔣世云.中藥指紋圖譜研究與應(yīng)用進(jìn)展[J].中國(guó)藥房，2011（19）：1819-1822.

[7] 蔡寶昌，劉訓(xùn)紅.常用中藥材HPLC指紋圖譜測(cè)定技術(shù)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：15.

[8] 夏秋敏.榨前分離濃縮蘋(píng)果汁加工工藝的基礎(chǔ)理論研究[D].西安：陜西師范大學(xué)，2013.

[9] 冉軍艦.蘋(píng)果多酚的組分鑒定及功能特性研究[D].楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2013.

[10] 韓國(guó)民.葡萄酒多酚HPLC指紋圖譜的初步研究[D].楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2010.

[11] 楊建榮，孫承鋒.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定蘋(píng)果中 9 種多酚物質(zhì)[J].食品與機(jī)械，2008（1）：127-129.

[12] 孫偉.桑椹多酚HPLC指紋圖譜的研究[D].楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2007.

[13] 曹建軍.地黃基于HPLC指紋圖譜的質(zhì)量評(píng)價(jià)及種質(zhì)資源利用研究[D].楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2012.

[14] 王璽，王文宇，張克榮，等.中藥HPLC指紋圖譜相似性研究的探討[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2003（5）：360-362，366.

[15] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.關(guān)于印發(fā)《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求（暫行）》的通知[J].中成藥，2000，22（10）：671.