摘 要：為考察貴陽市生鮮乳中金黃色葡萄球菌污染環(huán)節(jié)及其對(duì)藥物的敏感性，采集貴陽市周邊5個(gè)大型奶牛場(chǎng)及一個(gè)牛奶加工廠的乳區(qū)棉簽拭子75份和各生產(chǎn)環(huán)節(jié)奶樣310份，按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB 4789.10—2010）分離鑒定金黃色葡萄球菌，并測(cè)定其對(duì)9種常用抗菌藥物的敏感性。結(jié)果表明：生鮮乳中金黃色葡萄球菌污染主要來源于牛乳頭內(nèi)；傳統(tǒng)的“棄前三把奶”工藝對(duì)降低生鮮乳中金黃色葡萄球菌污染的作用不明顯；規(guī)范的乳區(qū)消毒可以有效地降低乳頭外環(huán)境金黃色葡萄球菌對(duì)生鮮乳安全的影響；所調(diào)查奶牛場(chǎng)的金黃色葡萄球菌對(duì)磺胺類、β-內(nèi)酰胺類和四環(huán)素類藥物的耐藥水平較高。

關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌；污染；檢出率；耐藥性；多重耐藥

中圖分類號(hào)：S855.1+ 2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2014.05.023

金黃色葡萄球菌是奶牛乳房炎最主要的傳染性致病菌，也是影響生鮮乳質(zhì)量的重要因素[1]。近年來， 由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒越來越多，而中毒食品以乳和乳制品為主[2]。我國(guó)也常發(fā)生金黃色葡萄球菌食物中毒，是衛(wèi)生防疫部門重點(diǎn)監(jiān)測(cè)項(xiàng)目[3]。我國(guó)最新國(guó)標(biāo)規(guī)定生鮮乳中不得檢出金黃色葡萄球菌。乳源金葡菌耐藥性不僅會(huì)影響牛乳房炎的治療而且也影響乳生產(chǎn)企業(yè)的效益，其耐藥性也會(huì)通過乳傳遞給人，增加人在相關(guān)感染時(shí)治療失敗的風(fēng)險(xiǎn)。從貴陽市周邊5個(gè)大型奶牛場(chǎng)和一個(gè)牛奶加工廠的各生產(chǎn)環(huán)節(jié)采集乳樣，進(jìn)行生鮮乳金黃色葡萄球菌的污染來源及其耐藥性研究，以期為生鮮乳生產(chǎn)質(zhì)量控制和被調(diào)查奶牛場(chǎng)乳房炎治療提供幫助。

1 材料和方法

1.1 材 料

1.1.1 試劑 7.5%氯化鈉肉湯，金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基，貝爾德-帕克氏培養(yǎng)基基礎(chǔ)，亞碲酸鹽卵黃增菌液，60%甘油，16種葡萄菌生化鑒定管，MH肉湯。

1.1.2 藥 物 青霉素、紅霉素、阿莫西林、頭孢噻呋、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、土霉素、氟苯尼考、磺胺二甲嘧啶。

1.1.3 質(zhì)控菌株 金黃色葡萄球菌質(zhì)控菌株ATCC25923，購(gòu)買自中國(guó)菌種資源保藏中心。

1.1.4 主要設(shè)備 超凈工作臺(tái)，高壓滅菌鍋，恒溫培養(yǎng)箱，恒溫干燥箱，電子天平等。

1.2 方 法

1.2.1 樣品的采集 乳區(qū)棉簽拭子采集：牛乳區(qū)溫水洗滌熱敷、按摩，聚維酮碘消毒，滅菌后棉簽擦拭乳頭，置入亞碲酸鹽卵黃增菌液內(nèi)保存；其余為第1把奶、第4把奶、牛場(chǎng)集奶罐、運(yùn)奶車、加工車間貯奶罐、半成品和成品奶樣，共計(jì)385份（表1）。

1.2.2 金黃色葡萄球菌的分離鑒定 參照GB4789.10—2010 ，進(jìn)行分離鑒定。

1.2.3 藥物敏感性試驗(yàn) 采用微量肉湯稀釋法測(cè)定金黃色葡萄球菌對(duì)常用10種抗菌藥物的最小抑菌濃度（MIC），按美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（CLSI）2009版推薦的判定標(biāo)準(zhǔn)及中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行耐藥性統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 金黃色葡萄球菌分離鑒定結(jié)果

在總計(jì)為385份的樣品中，共分離鑒定出金黃色葡萄球菌88株，分離率為22.86%。金黃色葡萄球菌的檢出率高低依次為第1把奶、第4把奶、奶牛場(chǎng)的集奶罐、運(yùn)奶車、加工車間貯奶罐；加工車間的成品和半成品奶均未查到金黃色葡萄球菌，乳區(qū)棉簽拭子的檢出率低于奶樣品。

2.2 生鮮乳中金黃色葡萄球菌耐藥性檢測(cè)結(jié)果

分離到的88株金黃色葡萄球菌對(duì)9種常用抗菌藥物都具有不同程度的耐藥，其耐藥順序?yàn)椋夯前范奏奏?、青霉素、?qiáng)力霉素、土霉素、頭孢噻呋、氟苯尼考、恩諾沙星和環(huán)丙沙星。這表明分離菌對(duì)磺胺類、β-內(nèi)酰胺類和四環(huán)素類藥物的敏感性較低。

2.3 金色葡萄球菌的多重耐藥情況

本次試驗(yàn)中分離的88株金黃色葡萄球菌均表現(xiàn)為多重耐藥，最少的為3重，占總菌株數(shù)的11.36%；最高的為7重，占總菌株數(shù)的4.55%；多重耐藥譜主要集中在4重（39.77%）和5重（34.09%）之間（圖1）。

3 結(jié)論與討論

（1）本試驗(yàn)總計(jì)385份樣品，共分離出金黃色葡萄球菌88株，檢出率為22.86%。該菌在不同國(guó)家及地區(qū)的生鮮乳中檢出率為12%～79%[6-7]。我國(guó)生鮮乳中金葡菌的檢出率主要在15%～38%[8-9]。金黃色葡萄球菌的檢出率高低順序說明：該菌在牛乳腺內(nèi)定植較為普遍，正常狀態(tài)下，約3成牛乳頭內(nèi)有金黃色葡萄球菌的存在。隨著奶量的不斷匯集，牛場(chǎng)集奶罐、運(yùn)奶車、加工廠貯奶罐的檢出率逐漸降低，說明生鮮乳中金黃色葡萄球菌污染主要來源于牛乳頭內(nèi)。

（2）為降低生鮮乳中細(xì)菌污染，傳統(tǒng)工藝為棄前三把奶，然后才收集鮮奶，試驗(yàn)結(jié)果表明：棄前三把奶對(duì)降低生鮮乳中金黃色葡萄球菌污染作用不明顯（10%左右），實(shí)際意義不大，卻增加了棄奶時(shí)人手對(duì)乳頭污染的機(jī)會(huì)，故“棄前三把奶”工藝有待進(jìn)一步研究和評(píng)估。

（3）乳區(qū)棉簽拭子的檢出率明顯低于其他奶樣，說明規(guī)范的乳區(qū)消毒可以有效地降低乳頭外環(huán)境致病菌對(duì)生鮮乳安全的影響。但是，在使用聚維酮碘消毒時(shí)奶牛出現(xiàn)明顯的刺激性疼痛反應(yīng)，此疼痛應(yīng)激反應(yīng)對(duì)奶牛產(chǎn)量的影響和消毒藥在鮮奶中殘留的風(fēng)險(xiǎn)有待進(jìn)一步研究。生鮮乳在經(jīng)過加工車間加工后，無論成品或半成品中均沒有檢出金黃色葡萄球菌，說明該加工廠的奶消毒工藝可靠。

（4）本次調(diào)查結(jié)果中，5種藥物的耐藥率高于85%，其中磺胺二甲嘧啶耐藥率達(dá)到100%，青霉素耐藥率也高達(dá)95.45%，頭孢噻呋、強(qiáng)力霉素和土霉素的耐藥率也均在85%以上，說明所調(diào)查的奶牛場(chǎng)對(duì)磺胺類、β-內(nèi)酰胺類和四環(huán)素類藥物的耐藥水平較高，與王冰等[10]、燕霞等[11]報(bào)道的結(jié)果相似。建議奶牛場(chǎng)建立細(xì)菌藥敏動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù)庫，根據(jù)藥物敏感性，實(shí)時(shí)調(diào)整抗感染藥物的使用方案，以提高療效、降低用藥成本、減少治療性棄奶量和減少乳中藥物殘留的可能。

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