摘 要：阻抑（Quelling）與減數(shù)分裂沉默（Meiotic silencing by unpaired DNA， MSUD）等真菌RNA沉默（RNA silencing）現(xiàn)象的研究拓展了我們當前對基因表達調(diào)控的認知。隨著測序信息量的爆炸性增長與功能研究的不斷深入，真菌RNA沉默展示出的復雜與多樣為真核生物研究提供了全新的視角。本文就當前真菌RNA沉默及相關(guān)小分子RNA（Small RNA， sRNA）的研究現(xiàn)狀做一簡要概述。

關(guān)鍵詞：真菌；RNA沉默；小分子RNA；進展

中圖分類號：R519 文獻標識碼：A DOI編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2014.05.002

近年來，以MicroRNA（miRNA）、Small interference RNA（siRNA）以及PIWI interaction RNA（piRNA）為代表的小分子RNA（Small RNA， sRNA）研究引發(fā)了生命科學界的廣泛關(guān)注，作為真核生物中普遍存在的、內(nèi)源保守的基因表達調(diào)控機制，其不僅為基因功能研究提供了強有力的工具，而且在分子診斷與治療方面具備巨大潛力。目前，動植物中的sRNA研究比較深入，其生源途徑與調(diào)控機制相對透徹，而真菌sRNA相對動植物更加復雜與多樣，筆者就真菌sRNA及其相關(guān)調(diào)控機制的研究進展做一簡要概述。

1 RNA沉默發(fā)現(xiàn)歷程

最早的RNA沉默現(xiàn)象是1990年由Napoli等[1]在牽?；ㄞD(zhuǎn)基因研究中發(fā)現(xiàn)的共抑制（Co-suppression），后被稱為轉(zhuǎn)錄后基因沉默（Post-transcriptional gene silencing， PTGS）。1992年，真菌中也發(fā)現(xiàn)了類似的現(xiàn)象，Romano等[2]向粗糙脈孢霉（Neurospora crassa）野生型菌株中轉(zhuǎn)化一種類胡蘿卜素合成基因albino，結(jié)果使內(nèi)源固有的albino基因表達受到抑制，其mRNA水平明顯降低并產(chǎn)生一些失色表型的轉(zhuǎn)化子，此現(xiàn)象被稱為阻抑（Quelling）。隨后線蟲中也出現(xiàn)相關(guān)報道[3]。直到1998年，F(xiàn)ire等[4]通過深入細致的試驗證明，雙鏈RNA（double strand RNA， dsRNA）相對正負單鏈RNA是更加高效觸發(fā)特異性基因沉默的關(guān)鍵因子，并稱之為RNA干擾（RNA interfering， RNAi）。這些現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)都是由于外源轉(zhuǎn)入基因與內(nèi)源固有基因存在序列同源性，從而誘發(fā)的特異性基因沉默現(xiàn)象。后續(xù)的研究證明它們都是由sRNA介導的，發(fā)生在轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后層面上的基因表達調(diào)控事件，這些類似的基因沉默現(xiàn)象可統(tǒng)稱為RNA沉默（RNA Silencing）[5]。

2 RNA沉默典型機制

基于廣泛的研究結(jié)果[6-7]，RNA沉默典型機制可概括為：由多種途徑產(chǎn)生的dsRNA，被具有RNaseⅢ結(jié)構(gòu)域的Dicer酶剪切加工，生成雙鏈互補的小分子RNA二聚體（Duplex），隨后duplex與AGO蛋白結(jié)合形成RNA沉默復合體（RNA-induced silencing complex， RISC），在去除非功能鏈（Star strand）之后RISC被激活，由功能鏈基于序列互補識別靶標基因轉(zhuǎn)錄本，并指引RISC沉默靶標基因表達（圖1）。其中，dsRNA可由多種方式產(chǎn)生，例如基因組編碼的miRNA單鏈前體形成的發(fā)卡環(huán)結(jié)構(gòu)的頸部可被識別為dsRNA，也可由不同轉(zhuǎn)錄本部分互補產(chǎn)生，或由某些單鏈RNA被特異識別并擴增產(chǎn)生。最新的研究發(fā)現(xiàn)，小鼠與真菌中均存在著不依賴Dicer酶的sRNA生成途徑[8-9]，充分說明sRNA生成機制比當前了解的更加多元。

3 真菌阻抑現(xiàn)象研究

粗糙脈孢霉中發(fā)現(xiàn)的阻抑現(xiàn)象是真菌中首次、真核生物第二例RNA沉默現(xiàn)象。阻抑作為自發(fā)可逆過程，其效率和穩(wěn)定性與外源插入基因的數(shù)量呈正比，對應同源序列長度一般不低于130 nt并與啟動子區(qū)無關(guān)[10-11]。目前，與阻抑研究相關(guān)的主要基因包括：qde-1、qde-2、qde-3、dcl-1、dcl-2、rpa-1和qip。

Cogoni等[12]基于穩(wěn)定的阻抑菌株，利用紫外誘變篩選法從10萬個轉(zhuǎn)化子中篩出15個阻抑缺陷型突變株（Quelling Deficient， QDE），歸屬三類遺傳互補群：qde-1，qde-2和qde-3。后續(xù)的基因克隆與功能鑒定研究發(fā)現(xiàn)，qde-1編碼一個RNA依賴的RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase， RdRP），其催化核心的晶體結(jié)構(gòu)與真核生物的DNA依賴的RNA聚合酶（DNA-dependent RNA polymerase， DdRP）相似，但與病毒編碼的明顯不同[13-15]。RdRP廣泛存在于植物與真菌中，并在擬南芥與線蟲中是RNA沉默發(fā)生的必需元件[16-17]。在粗糙脈孢霉中過表達QDE-1能顯著提高阻抑效率[18-19]，并且外源基因插入位點處發(fā)現(xiàn)存在QDE-1富集[20-21]，均說明其在阻抑前期發(fā)揮的重要功能，但QDE-1與二級sRNA的產(chǎn)生與擴增無關(guān)[22]。qde-2編碼AGO蛋白，其突變能抑制單鏈sRNA生成并破壞阻抑進程。線蟲中qde-2的同源基因rde-1是dsRNA介導基因沉默的必需元件[23]。AGO蛋白作為RISC的重要組成成分，充分說明阻抑與RNAi、PTGS是從同一個古老機制進化而來的、有著密切關(guān)聯(lián)的RNA沉默現(xiàn)象[24-25]。qde-3編碼一個RecQ DNA解螺旋酶（DNA helicase），與人類的Werner/Bloom綜合癥蛋白同源[26]。DNA解螺旋酶是DNA修復過程中的重要元件，水稻中的qde-3同源基因OsRecQ1與DNA損傷修復密切關(guān)聯(lián)[27]，并參與反向重復序列觸發(fā)的RNA沉默過程。小鼠中的rRecQ-1同源基因與piRNA結(jié)合復合物相關(guān)[28]。但目前qde-3在阻抑中的具體功能尚不清楚，也未發(fā)現(xiàn)阻抑與DNA復制之間的關(guān)聯(lián)[29-30]。

粗糙脈孢霉中存在兩個Dicer酶基因，它們均可以ATP依賴的模式將dsRNA加工成25 nt大小的sRNA。dcl-1與dcl-2雙突變株能夠阻止dsRNA轉(zhuǎn)變sRNA并徹底切斷阻抑進程，而dcl單突變株只能產(chǎn)生一定比例的阻抑效果，說明dcl-1與dcl-2功能上存在疊加。比較而言，dcl-2突變株中sRNA減少顯著，可視為dsRNA加工的主效酶[31]。rpa-1編碼一種與QDE-1互作的單鏈DNA結(jié)合蛋白，與復制蛋白A（Replication Protein A）的最大亞基同源。因其看家基因?qū)傩允沟媚壳吧袩o法進行功能研究，但已知復制蛋白A在DNA復制、修復和重組過程中發(fā)揮重要功能[21]。qip編碼一個與QDE-2互作的核酸外切酶，其功能與非功能鏈的去除有關(guān)，破壞qip能夠?qū)е耫uplex聚集和并顯著降低阻抑效率[32]。果蠅中也存在類似功能的酶（C3PO）[33]。

在阻抑發(fā)生機制的研究中發(fā)現(xiàn)，完全阻抑的菌株中能夠檢測到外源插入基因的轉(zhuǎn)錄本，但在阻抑恢復株中卻未發(fā)現(xiàn)，說明插入外源基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物（aberrant RNA， aRNA）應是觸發(fā)阻抑的起始物。在粗糙脈孢霉中由aRNA產(chǎn)生dsRNA的過程已被證實需要QDE-1和QDE-3的參與，而過表達一個反向重復序列可以繞開QDE1與QDE3，但需要QDE-2與DCL產(chǎn)生高效基因沉默[18]，說明dsRNA是阻抑必要的中間產(chǎn)物，QDE-1和QDE-3在dsRNA形成之前發(fā)揮功能。此外，有證據(jù)表明阻抑過程中能夠特異生成一類25 nt大小的sRNA，也需要QDE1與QDE3[34]。RPA1可能幫助QDE-1與QDE-3識別轉(zhuǎn)基因插入位點并與單鏈DNA結(jié)合，QIP已被證實在剔除非功能鏈過程中發(fā)揮作用。綜上所述，阻抑過程大體可概括為：轉(zhuǎn)基因插入位點被特異識別后，QDE-1與QDE-3在RPA1的幫助下共同作用產(chǎn)生aRNA與dsRNA，Dicer酶將dsRNA加工生成duplex后與QDE-2形成RISC，QIP與QDE-2剪切并移除非功能鏈后RISC被激活，最終由功能鏈指引RISC調(diào)控同源基因轉(zhuǎn)錄本（圖2）。

4 真菌減數(shù)分裂沉默

非配對DNA介導的減數(shù)分裂沉默（Meiotic silencing by unpaired DNA， MSUD）是粗糙脈孢霉中發(fā)現(xiàn)的與阻抑類似的另一種基因沉默現(xiàn)象，其發(fā)生在第一次減數(shù)分裂前期的同源染色體配對階段，一段未配對的DNA能夠引發(fā)所有同源序列沉默，包括配對和非配對的同源基因[35]。類似的現(xiàn)象在動物細胞的生殖階段也有被發(fā)現(xiàn)[36]。MSUD最早是在研究asm-1基因與減數(shù)分裂反式感應現(xiàn)象（Meiotic trans-sensing）時發(fā)現(xiàn)的，asm-1編碼一種與雌性器官發(fā)育和囊孢子成熟有關(guān)的高豐度核蛋白[37]。目前已知的與MSUD相關(guān)的重要基因有：sad-1、sad-2、sms-2和sms-3。

sad-1（Suppressor of ascus dominance-1）是通過紫外突變篩選發(fā)現(xiàn)的一個qde-1同源基因，其編碼蛋白與胞內(nèi)RdRP高度一致，多種方式破壞sad-1均能抑制MSUD的發(fā)生[38]。sad-2是與sad-1互作的另一個關(guān)鍵元件[39]，其突變也能導致MSUD失效[40]。sms-2（Suppressor of meiotic silencing-2）與sms-3是通過反向遺傳學研究發(fā)現(xiàn)的，并已被試驗證實是MSUD發(fā)生必需的元件[41]。sms-2編碼AGO蛋白，sms-3既是dcl-1，需要指出的是，MSUD只需要dcl-1而不需要dcl-2[42-43]。SAD-1、SAD-2、SMS-2和SMS-3被證明共同定位于核周區(qū)，由此說明MSUD核心機制發(fā)生的位置。

與阻抑類似，MSUD也被證實是發(fā)生在轉(zhuǎn)錄之后，并且其效率與未配對區(qū)域的大小和同源性成正比[44]。MSUD的大致模型可概括為：在減數(shù)分裂期間一段未配對的DNA被識別并轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生aRNA，SAD-2輔助SAD-1將其加工成dsRNA，再由SMS-3加工形成duplex后與SMS-2形成RISC，終使同源基因沉默（圖2）。MSUD與阻抑都需要相似或相同的元件，說明粗糙脈孢霉中存在兩套關(guān)聯(lián)的RNA沉默通路。

5 真菌RNA沉默的潛在功能

目前已知RNA沉默在動植物發(fā)育調(diào)控、染色體隔離以及阻止病毒或轉(zhuǎn)座子嵌入基因組等方面發(fā)揮重要作用[45-48]。真菌RNA沉默的功能很可能也與抑制轉(zhuǎn)座子的表達與擴張有關(guān)。一方面，阻抑能夠識別并抑制外源插入基因表達；另一方面，轉(zhuǎn)座子的復制會產(chǎn)生未配對的DNA從而激發(fā)MSUD；此外，LINE1-like轉(zhuǎn)座子TAD的轉(zhuǎn)錄水平和拷貝數(shù)在qde-2突變體中顯著提高，其轉(zhuǎn)錄本在dcl雙突中也發(fā)現(xiàn)上調(diào)等證據(jù)也支持此觀點[49]。

RNA沉默在動植物和裂殖酵母中與異染色質(zhì)形成與DNA甲基化相關(guān)[50-51]，但目前粗糙脈孢霉中尚未發(fā)現(xiàn)關(guān)聯(lián)，說明真菌RNA沉默可能并不在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控靶基因[52]。雖然阻抑產(chǎn)生sRNA的過程與組蛋白甲基化無關(guān)，但突變組蛋白甲基化酶基因dim-5會使外源插入基因的拷貝易于丟失，從而降低阻抑效率并提高阻抑恢復的頻率[53]。

脊椎動物中，dsRNA能夠觸發(fā)一種保守的宿主防御機制：抗病毒干擾素響應（Antiviral Interferon Response），粗糙脈孢霉與栗色枯萎菌中也存在類似現(xiàn)象[54-55]。粗糙脈孢霉全基因組芯片分析顯示，dsRNA大約能激活60個基因的表達，包括qde-2和dcl-2等RNA沉默元件以及抗病毒干擾素響應基因的同源物[56]。但粗糙脈孢霉并不編碼已知哺乳動物dsRNA感受器基因，說明其激活途徑應有別于哺乳動物。

6 DNA損傷誘導qiRNA表達

粗糙脈孢霉中DNA損傷試劑處理能夠誘發(fā)一類常態(tài)低豐度的21 nt大小sRNA高效表達，稱為qiRNA（QDE-2 interaction small RNA）。qiRNA具有較強的5’端尿嘧啶與3’端腺嘌呤偏好，其產(chǎn)生并不依賴QDE-2，但需要QDE-1，QDE-3和Dicer酶。qiRNA匹配高度重復的rDNA位點，包括正負鏈的轉(zhuǎn)錄與非轉(zhuǎn)錄區(qū)，并非rRNA的非特異降解產(chǎn)物[22]。最新的研究結(jié)果顯示，水稻DNA損傷也能誘導qiRNA的產(chǎn)生[57]。

DNA損傷試劑能夠顯著提高qde-2的mRNA和蛋白水平，在DNA修復能力喪失的突變株中，不需要損傷試劑也能提高QDE-2表達。鑒于dsRNA能夠誘導QDE-2和dcl-2表達，推測DNA損傷很可能是通過誘發(fā)內(nèi)源dsRNA的產(chǎn)生從而提高QDE-2表達。早有報道指出，DNA損傷能夠誘導幾百到2 kb的aRNA表達，在dcl雙突中發(fā)現(xiàn)較長的qiRNA前體聚集，說明qiRNA應來源于aRNA。QDE-1最近被證明同時兼?zhèn)銻dRP與DdRP的功能，并且RNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型的有效抑制子（Thiolutin）并不能阻止aRNA的產(chǎn)生，均說明DNA損傷誘導的aRNA與dsRNA是由QDE-1產(chǎn)生。

阻抑產(chǎn)生特異sRNA與DNA損傷誘導qiRNA表達過程都依賴一些相同元件（QDE-1、QDE-2、QDE-3和Dicer酶）產(chǎn)生aRNA、dsRNA以及特異sRNA；其次，它們的生源位置都與重復位點有關(guān)：誘發(fā)阻抑的外源插入基因會產(chǎn)生重復位點，并存在高頻重組和重排；qiRNA來源的rDNA區(qū)域正是野生型粗糙脈孢霉中唯一的高度串聯(lián)重復位點。qde-1、qde-2和qde-3突變株中rDNA基因拷貝數(shù)均有減少，說明阻抑可能在維護rDNA位點完整性和穩(wěn)定性上發(fā)揮功能；而qiRNA正來源于rDNA區(qū)域，其生成途徑被破壞的突變株均提高了DNA損傷的敏感性。這些共有特征與相關(guān)之處說明，阻抑與DNA損傷修復在機制通路上應是密切偶聯(lián)的。

7 milRNA與disiRNA

動物、植物、病毒和綠藻中普遍存在的miRNA一直被認定不存在于真菌中[58-60]，最近的研究表明粗糙脈孢霉中存在miRNA的類似物milRNA（miRNA-like RNA）及多種生成途徑[9]。這些milRNA與動植物miRNA存在很多相似之處：5’端尿嘧啶偏好、高度特異的發(fā)卡環(huán)前體、多數(shù)依賴Dicer酶生成、像動物miRNA一樣通過不完美互補沉默內(nèi)源基因、發(fā)卡環(huán)前體的雙臂匹配不均衡等。

milRNA現(xiàn)已被試驗證實的至少存在4條生成途徑，但與qiRNA和阻抑sRNA不同，milRNA的產(chǎn)生并不需要QDE-1和QDE-3。第一條途徑徹底依賴Dicer酶加工前體轉(zhuǎn)錄本（pri-miRNA）產(chǎn)生前體雙鏈（pre-miRNA），其成熟過程需要QDE-2和QIP參與，但不需要QDE-2的催化活性。第二條途徑徹底不需要Dicer酶，QDE-2的催化活性取代了Dicer酶加工pre-miRNA并去除非功能鏈，但需要未知的核酸酶進一步剪切和熟化。小鼠的miR451最近也被證實是不需要Dicer而依賴AGO生成的[61-62]。此途徑暗示某些缺乏Dicer但編碼AGO類似蛋白的真細菌和古細菌中也可能存在miRNA。第三條途徑與植物類似，只需要Dicer酶來完成milRNA加工與成熟[60]。第四條途徑部分依賴Dicer，還需要未知的核酸酶參與。粗糙脈孢霉編碼的酵母線粒體核糖體蛋白（Mitochondrial Ribosomal Protein L3， MRPL3）同源基因可能是milRNA生源途徑中的關(guān)鍵酶。其包含RNAseⅢ型結(jié)構(gòu)域和dsRNA識別區(qū)，雖然序列相似性與動植物Dicer或Drosha不高，但功能敲除試驗導致第一和第四條途徑產(chǎn)生的milRNA顯著減少，并且體外剪切活性降低。

報告基因試驗顯示，milRNA能像動物miRNA一樣主要通過抑制翻譯調(diào)節(jié)內(nèi)源基因表達[9]。milRNA預測的靶標轉(zhuǎn)錄本在dcl和qde-2突變株中上調(diào)，并與QDE-2存在特異結(jié)合。但與動植物中不同，粗糙脈孢霉中milRNA在續(xù)保生長發(fā)育過程中并非致命角色，破壞其關(guān)鍵元件并不致死。

對粗糙脈孢霉QDE-2關(guān)聯(lián)sRNA的研究中發(fā)現(xiàn)，一類長度約22 nt、功能未知、由全新途徑產(chǎn)生的sRNA被稱為disiRNA（Dicer-independent small interfering RNA）[9]。disiRNA的生成不依賴QDE-1、QDE-2和QDE-3，表達水平在dcl雙突中無明顯變化，也不受AGO或其他RNA沉默元件突變的影響，有別于動物中的piRNA。目前粗糙脈孢霉中發(fā)現(xiàn)的disiRNA大約來自于50個非重復位點，包括基因編碼區(qū)和基因間區(qū)，位點之間無明顯共有基序。disiRNA的5’端偏好尿嘧啶、平均匹配正負鏈DNA，約80%的disiRNA發(fā)生位點同時存在正義和反義EST數(shù)據(jù)覆蓋，暗示其可能是由天然轉(zhuǎn)錄本互補形成的dsRNA產(chǎn)生。

8 RNA沉默與病毒防御

RNA沉默在動植物中作為抗病毒防御機制早被發(fā)現(xiàn)[46， 63]，最近在真菌中也被認定同樣保守存在。板栗疫病菌（Cryphonectria paracitica）與構(gòu)巢曲霉菌（Aspergillus nidulans）具備良好的低毒力病毒侵染系統(tǒng)，是真菌抗病毒防御機制方面研究較為深入的模式絲狀真菌。

板栗疫病菌編碼的4個AGO類似蛋白（Argonaute-like proteins， AGL）中，只有AGL2與病毒防御響應相關(guān)[64]。板栗疫病菌dcl基因與粗糙脈孢霉同源，dcl-1或dcl-2單突變與野生型無明顯表型差異，但dcl-2單突與dcl雙突對病毒侵染十分敏感[65]。病毒侵染或過表達發(fā)卡環(huán)RNA均能顯著提高dcl-2與agl-2的表達，Dicer已被證實在真菌抗病毒防御機制中發(fā)揮重要功能，但dcl2無法在agl2突變株中誘導表達，暗示AGL2在激活RNA沉默途徑中發(fā)揮重要功能。

RNA沉默既能抑制病毒復制又可以促進病毒重組，從而產(chǎn)生病毒RNA基因組來源的特異RNA，稱為vsRNA（Virus-derived Small Interfering RNAs）或DI-RNA（Defective Interfering RNA）[55， 64]。vsRNA發(fā)現(xiàn)存在于野生型板栗疫病菌中，但在dcl2和agl2變體中缺失。盡管具體機制尚不清楚，但RNA沉默在真菌中的確能夠抑制病毒RNA的聚集，并導致異源病毒RNA載體的不穩(wěn)定與刪除。另一方面，病毒編碼的RNA沉默抑制子能夠有效抑制RNA沉默組分。低毒力病毒CHV1（Cryphonectria hypovirus 1）編碼的P29蛋白酶，與馬鈴薯Y病毒編碼的RNA沉默抑制子HC-pro同源，其能夠抑制發(fā)卡環(huán)、病毒和農(nóng)桿菌誘導的RNA沉默，也能抑制煙草中GFP報告基因沉默的系統(tǒng)性擴散[66-68]。

構(gòu)巢曲霉編碼一個Dicer、一個AGO和兩個RdRP基因，轉(zhuǎn)入反向重復序列能引起強烈的RNA沉默，但dsRNA觸發(fā)RNA沉默的過程并不需要RdRP[69-70]。目前已發(fā)現(xiàn)曲霉病毒1816能夠抑制反向重復序列觸發(fā)的RNA沉默。另外，曲霉病毒341來源的sRNA在一個AGO突變的構(gòu)巢曲霉中高水平富集，再次驗證RNA沉默機制扮演的病毒防御角色。

9 其他真菌RNA沉默研究

卷枝毛霉（Mucor circinelloides）屬分支結(jié)合菌，與粗糙脈孢霉親緣關(guān)系較遠，其編碼兩個Dicer酶與兩個RdRP，轉(zhuǎn)化自復制質(zhì)粒和表達反向重復序列均引發(fā)RNA沉默。與粗糙脈孢霉不同，卷枝毛霉中RNA沉默能產(chǎn)生21 nt和25 nt兩類sRNA，同時存在二級sRNA與反義RNA，說明存在sRNA復制步驟[71-72]。DCL-2是轉(zhuǎn)基因沉默和sRNA產(chǎn)生的關(guān)鍵因素，RdRP1對轉(zhuǎn)基因誘導的基因沉默至關(guān)重要[73]?；趕RNA高通量測序，卷枝毛霉中發(fā)現(xiàn)來源于外顯子區(qū)域的四類sRNA，被稱為ex-siRNA（exonic-siRNAs），其調(diào)控許多蛋白編碼基因的mRNA水平。最大類的ex-siRNA需要DCL2和RdRP1產(chǎn)生；第二類依賴DCL2和RdRP2；第三類同時需要RdRP1與RdRP2；第四類同時需要DCL1與DCL2，其中DCL1為主效酶。除ex-siRNA之外，卷枝毛霉中還存在一些Dicer依賴的內(nèi)源sRNA，匹配轉(zhuǎn)座子和重復序列，但未發(fā)現(xiàn)milRNA[73]。卷枝毛霉中的sRNA深度分析進一步說明了絲狀真菌sRNA產(chǎn)生途徑的多元性。

真菌中RdRP、AGO以及DCL等RNA沉默元件的整體統(tǒng)計分析顯示，關(guān)鍵基因的數(shù)量豐缺差異顯著，例如黑粉菌（Ustilago maydis）中缺失全部元件，而根霉（Rhizopus oryzae）存在5個RdRP[74-75]。雖然真菌種群間變異程度較大，但目前RNA沉默機制已被證實廣泛存在于子囊（Ascomycota）、擔子（Basidiomycota）和結(jié)合菌（Zygomycota）中，包括：裂褶菌（Schizophyllum commune）[76-77]、葉霉菌（Cladosporium fulvum）[78]、新型隱球菌（Cryptococcus neoformans）[79]、稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）[80-81]、煙曲霉（Aspergillus fumigatus）[82-83]、黃曲霉（Aspergillus flavus）[84]、禾谷鐮刀菌（Fusarium graminearum）[84]、蘋果黑星病菌（Venturia inaequalis）[85]、黃瓜炭疽病菌（Colletotrichum lagenarium）[86]、灰蓋鬼傘（Coprinus cinereus）[87-88]、長喙殼菌（Ophiostoma）[89]、米曲霉（Aspergillus oryzae）[90]、稻平臍蠕孢（Bipolaris oryzae）[91]、灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）[92]、頂頭孢霉（Acremonium chrysogenum）[93]、產(chǎn)黃青霉（Penicillium chrysogenum）[94]、可可叢枝病菌（Moniliophthora perniciosa）[95]和輪枝鐮刀菌（Fusarium verticillioides）[96]等。

10 展 望

粗糙脈孢霉中阻抑與MSUD現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)開啟了真菌RNA沉默機制研究的大門，目前發(fā)現(xiàn)的qiRNA、milRNA、disiRNA、vsRNA等多種sRNA生源途徑以及相關(guān)通路元件，充分展示了真菌世界中RNA沉默的復雜與多樣。作為生命科學領(lǐng)域的研究熱點，真菌為真核生物RNA沉默研究提供了高效平臺與優(yōu)良的模式系統(tǒng)，有助于探究其進化起源與功能機制。雖然目前還有很多具體環(huán)節(jié)尚不清楚，如：轉(zhuǎn)入的外源基因如何被識別、內(nèi)源dsRNA的形成過程、dsRNA應答信號傳導途徑、促進病毒重組的機制等，但我們有理由相信，隨著相關(guān)通路研究的不斷深入與基因組信息的爆炸性增長，真菌RNA沉默研究將不斷拓展并全面更新我們當前對真核生物RNA調(diào)控的理解與認知。

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