摘要：目的：通過比較兩種方法對嘔吐毒素的檢測結(jié)果，驗證嘔吐毒素ELISA試劑盒快速檢測法的準確性。方法：大麥樣品經(jīng)過不同的前處理提取后分別進行ELISA和HPLC檢測，并進行加標回收試驗。結(jié)果：試驗在0～800μg/kg加標濃度范圍內(nèi)，ELISA試劑盒法和HPLC法檢測結(jié)果接近，平均回收率分別為91.9%和83.7%，變異系數(shù)（RSD）均低于10%。結(jié)論：相對于HPLC法，嘔吐毒素ELISA試劑盒法操作簡單快捷、檢測時間短，靈敏度高、穩(wěn)定性好，適用于大批量大麥樣品中嘔吐毒素含量的定量快速篩選。

關(guān)鍵詞：大麥 嘔吐毒素 ELISA HPLC

中圖分類號：TS210文獻標識碼：A 文章編號：1672-5336（2014）14-0029-02

目前糧谷類食品中嘔吐毒素的分析方法主要有薄層色譜法（TLC）、高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）和免疫法等，其中免疫法有酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、放射免疫等。ELISA是一種準確、靈敏、特異性強的快速檢測技術(shù)，在有害物質(zhì)的快速檢測中占有重要的地位。筆者對ELISA試劑盒法和HPLC法檢測大麥中嘔吐毒素的結(jié)果進行了比較，從而驗證了試劑盒法的準確性。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Waters高效液相色譜儀，Waters公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，瑞士Buchi公司；恒溫振蕩器，上海一恒科學儀器有限公司；MK3型酶標儀，美國Thermo公司；電子精密天平，德國Sartorius公司；大麥粉碎機，上海微型電機廠；床式振蕩器，廣州富城儀器廠；微量移液器，德國Eppendorf公司；嘔吐毒素ELISA試劑盒，美國Beacon公司；嘔吐毒素標準品，純度≥99%，美國sigma公司；甲醇為色譜純；水為超純水；0.45μm微孔濾膜。

1.2 ELISA法

大麥樣品經(jīng)粉碎后，準確稱取10.00g到120ml有蓋PP瓶中，加入100mL蒸餾水，置于床式振蕩器劇烈震蕩3min，定性快速濾紙進行過濾，濾液待用。

實驗前提前取出嘔吐毒素試劑盒回溫，確保標準液、試劑、清洗液恢復至室溫20～28℃，取適當數(shù)量的微孔固定在微孔板架上。

加入50μl的DON標準液（0、8、20、40、100μg/l）及樣品提取液到相應的微孔中，然后加入50μl酶標記物溶液到各個微孔中，再加入50μl抗體溶液到各個微孔中，輕微震蕩微孔板，于室溫下準確孵育10min。

孵育完畢倒掉微孔中的溶液，用清洗液重復洗板五次，充分拍干。每孔加入100μl底物溶液，室溫下準確孵育5min。每孔加入100μl停止液，用酶標儀讀取450nm波長下各孔的吸光值。

1.3 HPLC法

（1）樣品預處理。準確稱取粉碎后的大麥樣品 10.00g到250mL具塞三角瓶中，加入100ml10%甲醇-水溶液，250rpm振蕩提取30min，定性快速濾紙過濾后取20mL濾液，于50℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干，用2mL20%甲醇-水溶液洗脫定容，過0.45μm濾膜后待用。（2）液相色譜工作條件。色譜柱采用Waters Nova-pakC18（3.9×150 mm，4μm），流動相為甲醇-水溶液（20：80，v/v），柱溫30℃，流速1.0ml/min，檢測波長220nm，進樣量為10μl。 （3）嘔吐毒素標準曲線。用10%甲醇-水溶液將嘔吐毒素標準貯備液配制成100、200、500、1000、2000μg/l的系列標準工作液，進行分析后繪制標準曲線。其回歸方程為：Y=25.293X-242.45，線性相關(guān)系數(shù)R2=0.9991，嘔吐毒素在100～2000μg/l的濃度范圍內(nèi)和峰面積具有較好的線性關(guān)系。

2 結(jié)果與分析

往大麥樣品中添加一定濃度的嘔吐毒素標準品進行加標回收試驗，每個水平濃度重復3次，樣品經(jīng)不同預處理后分別通過ELISA法和HPLC法進行分析，從而驗證方法的準確性。結(jié)果見表1。

對ELISA法和HPLC法的檢測結(jié)果進行線性比較，結(jié)果見圖1。

由表1可知，大麥樣品經(jīng)HPLC法檢測加標回收率在79.5%～88.2%之間，RSD在10%以內(nèi)；經(jīng)ELISA法檢測加標回收率在84.7%～101.5%之間，RSD低于10%。由圖1可知，兩種方法檢測結(jié)果的一致性較高，線性相關(guān)系數(shù)R2=0.9892，表明嘔吐毒素ELISA試劑盒法具有較高的準確性，可以保證檢測結(jié)果的可靠性。

3 討論

ELISA試劑盒法基于抗原抗體的特異性反應，特異性強、靈敏度高，與HPLC法相比，樣品前處理方法得到了簡化，操作快速、簡單，可以較少接觸有毒有害物質(zhì)從而增加實驗安全性。目前國標中規(guī)定大麥中嘔吐毒素含量為<1000μg/kg，而本文所采用的ELISA試劑盒法對大麥樣品的最低檢出濃度為80μg/kg，滿足國標的檢測要求，故適用于日常大批量大麥樣品的快速定量篩選。

參考文獻

[1]劉紹偉，羅仕歡.淺談霉菌嘔吐毒素[J].湖南飼料，2006（2）：26-27.

[2]王曉云.玉米中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的氣相色譜分析[J].長治學院學報，2006，23（5）：7-10.