摘要：目的：建立一種快速、靈敏的正向高效液相色譜法測(cè)定角鯊烯膠囊中角鯊烯的含量。方法：角鯊烯膠囊內(nèi)容物經(jīng)異辛烷溶解稀釋后，采用SunFire TM Prep Silica色譜柱、0.5%甲醇-0.5%正辛醇-異辛烷流動(dòng)相進(jìn)行分離，紫外檢測(cè)器210nm處進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：10～1000g/mL濃度范圍內(nèi)角鯊烯呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.999，最低定量限為10g/mL。低、中、高3個(gè)濃度水平的加標(biāo)回收率均值為102.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.0%。采用所建方法對(duì)市售3批角鯊烯膠囊進(jìn)行含量測(cè)定，角鯊烯標(biāo)示含量均符合規(guī)定。結(jié)論：所建方法適合角鯊烯膠囊中角鯊烯的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：正相高效液相色譜法 角鯊烯 含量測(cè)定

中圖分類號(hào)：R927.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-5336（2014）14-0016-02

Abstract：Objective：To establish a rapid and sensitive method for determination of squalene in squalene capsules by normal-phase high performance liquid chromatography. Methods：Squalene was extracted and was dissolved and diluted by isooctane， using a mobile phase of isooctane with 0.5% methanol and 0.5% n-octyl alcohol on SunFire TM Prep silica column by UV-detector at 210 nm. Results：The calibration curves showed good linear relationship in the range of 10～1000mg/mL for squalene with the correlation coefficient of 0.999.The limit of quantification （LQD） of squalene was10mg/mL. The average recovery of squalene was 102.1% and the relative standard deviations was 1.0 %. Three batches of squalene capsules were measured by our method， which showed that the content of squalene in all tested samples met the specified requirements. Conclusion：The method was proved to be suitable for determination of squalene in squalene capsules.

Key Words：Normal-phase high performance liquid chromatography Squalene Determination of content

角鯊烯，化學(xué)名稱為2，6，10，15，19，23-六甲基-2，6，10，14，18，22-二十四碳六烯，屬開(kāi)鏈三萜，又稱魚(yú)肝油萜[1]。由于角鯊烯具有增強(qiáng)機(jī)體免疫能力、抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤等廣泛的生理功能，目前被廣泛應(yīng)用于各種保健食品中[2]。角鯊烯的含量測(cè)定方法主要包括氣相色譜法[3-5]、液相色譜法[6-8]、質(zhì)譜法[9]等。氣相色譜法測(cè)定角鯊烯需經(jīng)衍生化，樣品預(yù)處理繁瑣，而反相高效液相色潽法及質(zhì)譜法測(cè)定角鯊烯同樣存在色譜條件復(fù)雜，樣品前處理過(guò)程繁瑣等缺點(diǎn)。本文基于正向高效液相色譜法，建立了角鯊烯膠囊中角鯊烯的含量測(cè)定方法，并用于市售角鯊烯膠囊的含量測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 儀器

梅特勒-托利多XS205DU型電子天平；Waters1525 HPLC（美國(guó)Waters公司）；紫外檢測(cè)器；Empower2數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（Waters）；Thermo低溫離心機(jī)。

1.2 樣品與試劑

角鯊烯對(duì)照品（批號(hào)140721-200601，含量99.5%）購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所；異辛烷購(gòu)于Fisher

Scientific，HPLC級(jí)（LOT：067362），正辛醇購(gòu)于aladdiin，HPLC級(jí)（LOT：E1216020）；甲醇購(gòu)于Honeywell，LC-MS級(jí)（LOT：10315431）。實(shí)驗(yàn)所用樣品均為市售角鯊烯膠囊。

1.3 色譜條件

色譜柱：SunFireTM Prep Silica（5m4.6×250mm）；流動(dòng)相：異辛烷，含0.5%正辛醇、0.5%甲醇；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：5L。檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm。

1.4 對(duì)照品儲(chǔ)備液的配制

取角鯊烯對(duì)照品約50mg，精密稱定，置50mL量瓶中，用異辛烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，得每1mL約含1mg角鯊烯的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

1.5 供試品溶液制備

取角鯊烯膠囊內(nèi)容物約10mg，精密稱定，置20mL量瓶中，加異辛烷稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 色譜條件的優(yōu)化

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，角鯊烯最大紫外吸收波長(zhǎng)為210nm。本實(shí)驗(yàn)中分別考察流動(dòng)相異辛烷中含0.1%正辛醇、 0.1%甲醇，含0.5%正辛醇、0.5%甲醇；及含1%正辛醇，1%甲醇等不同比例的分析結(jié)果，采用0.5%甲醇-0.5%正辛醇-異辛烷流動(dòng)相，角鯊烯色譜峰峰形較好，分離度、對(duì)稱因子、拖尾因子等考察結(jié)果最佳。分別考察 0.5mL/min，1.0mL/min，1.5mL/min3種流速，結(jié)果表明不同流速只影響角鯊烯的保留時(shí)間，對(duì)角鯊烯色譜峰參數(shù)無(wú)影響。本實(shí)驗(yàn)采用1.0mL/min的流速，流動(dòng)相比例為0.5%甲醇-0.5%正辛醇-異辛烷，上述色譜條件下，角鯊烯對(duì)照品典型色譜圖如圖1所示，保留時(shí)間為4.5min。

2.2 線性范圍及最低定量限

分別精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液，用異辛烷稀釋至濃度分別為10，50，100，200，400，600，800，1000g/mL的對(duì)照品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，濃度X為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，角鯊烯線性方程為：Y=10486X+263556（r=0.999），結(jié)果表明，角鯊烯在10～1000g/mL范圍內(nèi)線性良好，最低定量限為10g/mL（信噪比S/N=40）。如圖2。

2.3 精密度

日內(nèi)精密度：上述色譜條件下，取對(duì)照品溶液（500 g/mL）重復(fù)進(jìn)樣6次，以角鯊烯色譜峰計(jì)，6次進(jìn)樣色譜峰面積RSD為0.3%。日間精密度：取500mg/mL對(duì)照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣3天，角鯊烯峰面積的RSD為0.5%，表明該方法的精密度良好。

2.4 加標(biāo)回收率

取角鯊烯膠囊內(nèi)容物約5mg，精密稱定，置20mL量瓶中，分別加入4mL，5mL，6mL對(duì)照品儲(chǔ)備液，每個(gè)加標(biāo)濃度重復(fù)3次，加異辛烷稀釋至刻度，搖勻，供液相色譜進(jìn)樣分析。加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果如表1所示，不同加標(biāo)濃度的平均回收率為102.1%，RSD為1.0%。

2.5 樣品測(cè)定結(jié)果

取市售不同生產(chǎn)廠家的三批角鯊烯膠囊，按所建方法進(jìn)行樣品處理并檢測(cè)角鯊烯含量，結(jié)果如表2所示，3批樣品中角鯊烯含量的實(shí)測(cè)值均在“80%標(biāo)示值～120%標(biāo)示值”范圍內(nèi)，符合我國(guó)《食品營(yíng)養(yǎng)成分標(biāo)示準(zhǔn)則》的相關(guān)規(guī)定。

3 討論

目前，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局批準(zhǔn)上市的角鯊烯類保健食品多達(dá)17種[10]。食品中角鯊烯的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法為前衛(wèi)生部于2003年頒布的《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》[11]，該方法采用氣相色譜法測(cè)定，前處理方法復(fù)雜，分析時(shí)間長(zhǎng)。本文參考《保健食品功效成分檢測(cè)方法》，結(jié)合角鯊烯膠囊的劑型特點(diǎn)，基于正相色譜法建立角鯊烯軟膠囊中角鯊烯的含量測(cè)定方法，樣品只需用異辛烷溶解稀釋，方法簡(jiǎn)便，快速，靈敏度高，適合保健食品角鯊烯膠囊中角鯊烯的含量測(cè)定。

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