摘要：本文建立了一種使用三重四極桿質(zhì)譜儀測定功能飲料中的維生素B12的方法。前處理采用C18固相萃取法，樣品處理時間短。使用UHPLC二元高壓梯度系統(tǒng)利用C18色譜柱在5min內(nèi)實現(xiàn)快速分離。實驗結(jié)果表明：線性范圍5μg/L ～ 500 μg/L，相關(guān)系數(shù)為0.9997；維生素B12標(biāo)樣的儀器檢出限為0.19 μg/L，儀器定量限為0.6μg/L；5μg/L、50 μg/L和500 μg/L 三個濃度標(biāo)樣6次連續(xù)進(jìn)樣的保留時間和峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在011～ 0.13%和0.85～2.12%之間；5 μg/L功能飲料樣品加標(biāo)回收率為92.8%。

關(guān)鍵詞：B12 UHPLC 功能飲料 固相萃取法

中圖分類號：TS275 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1672-5336（2014）22-0028-02

維生素B12（英文名vitamin B12，B12；CAS：68-19-9）又稱鈷胺素，是一種由含鈷的卟啉類化合物組成的B族維生素，又被稱為造血維生素，具有肌膚再生的優(yōu)越效果，細(xì)胞再生與造血都少不了它，是促進(jìn)人體新陳代謝的重要成分。自然界中的維生素B12都是微生物合成的，高等動植物不能制造維生素B12。維生素B12的主要生理功能是參與制造骨髓紅細(xì)胞，防止惡性貧血；防止大腦神經(jīng)受到破壞。維生素B12攝入過多還可導(dǎo)到葉酸的缺乏。

本文參考《GB/T 5009 217-2008 保健食品中維生素B12的測定》，使用島津三重四極桿質(zhì)譜儀LCMS-8050檢測，建立了一種分析功能飲料中維生素B12的含量快速檢測方法，供相關(guān)檢測人員參考。

1 實驗條件

1.1 儀器

本實驗使用島津高效液相色譜儀LC-30A串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜LCMS-8050。具體配置為LC-30AD輸液泵，DGU-20A5R在線脫氣機，SIL-30AC自動進(jìn)樣器，CTO-30A柱溫箱，CBM-20A系統(tǒng)控制器，LCMS-8050三重四極桿質(zhì)譜，LabSolutions Ver.5.53色譜工作站。

1.2 分析條件

1.2.1 液相色譜條件

色譜柱：Shim-pack XR-ODS III 2.0 mm i.d.×150mm，2.2μm

流動相：A-0.2%甲酸水；B-甲醇

流速：0.4mL/min

進(jìn)樣體積：10μL

柱溫：45℃

洗脫方式：梯度洗脫，B相初始濃度為15%，時間程序見表1。

1.2.2 質(zhì)譜條件

分析儀器：LCMS-8040

離子源：ESI，正離子

離子源接口電壓：4.5 kV

霧化氣：氮氣3.0L/min

干燥氣：氮氣15L/min

碰撞氣：氬氣

脫溶劑管溫度：250℃

加熱模塊溫度：450℃

掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）

駐留時間：180 ms

延遲時間：3 ms

MRM參數(shù)：MRM分組采集

1.3 樣品制備

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：用5%乙腈水溶液配制500mg/L B12標(biāo)準(zhǔn)儲備液。用水將標(biāo)準(zhǔn)儲備液稀釋成5μg/L、10 μg/L、50μg/L、100μg/L、200 μg/L、500μg/L不同濃度的維生素B12校準(zhǔn)曲線工作液。

樣品前處理方法：取150mL功能飲料溶液，超聲脫氣10min后，加入100mL水，超聲15min定容于250mL容量瓶中。C18固相萃取柱活化后，取5mL上述處理過的試樣加到固相萃取柱上。上樣后，用5mL5%乙腈溶液作為洗脫溶劑將干擾物質(zhì)洗脫出來，最后用0.5mL 25%乙腈溶液將維生素B12洗脫，收集洗脫液0.5mL，過0.45μm濾膜后，上機測試。

2 實驗結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜圖

維生素B12的前體離子與產(chǎn)物離子質(zhì)譜圖，5μg/L維生素B12標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜如圖1所示，保留時間為1.882min。

2.2 線性關(guān)系

將7個不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，按1.2中的分析條件進(jìn)行測定，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，外標(biāo)法制作校準(zhǔn)曲線，如圖1所示。線性方程為Y=（619.08）X，線性范圍5～500μg/L，相關(guān)系數(shù)大于0.9997，線性關(guān)系良好。

2.3 檢出限和定量限

5μg/L的維生素B12標(biāo)樣色譜圖如圖1所示，按照ASTM計算信噪比，信噪比為77.95。以3倍信噪比為檢測限，計算得到儀器的檢出限為0.19μg/L，定量限為0.6μg/L。

2.4 重現(xiàn)性實驗

取維生素B12標(biāo)準(zhǔn)工作液中5μg/L、50μg/L和200μg/L 三個濃度，分別平行進(jìn)樣6次，目標(biāo)化合物的保留時間和峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在0.11～0.13%和0.85～2.12%之間，檢測方法重現(xiàn)性良好。

2.5 基質(zhì)加標(biāo)實驗

按照1.3中樣品制備方法，在功能飲料樣品中添加標(biāo)樣，加標(biāo)含量為5μg/L。功能飲料樣品中檢出維生素B12濃度為0.510μg/L，維生素B12加標(biāo)回收率為92.8%。

3 實驗總結(jié)和討論

本方法參考《GB/T 5009 217-2008 保健食品中維生素B12的測定》，采用島津三重四極桿質(zhì)譜LCMS-8050建立了一種測試功能飲料中的維生素B12的方法，在5min內(nèi)完成分析，靈敏度高，可用于功能飲料中維生素B12含量的測定。

參考文獻(xiàn)

[1]郝苗苗，李少英.食品中VB_（12）的檢測方法[J].農(nóng)產(chǎn)品加工（學(xué)刊），2013年19期.

[2]謝麗華.維生素B_（12）的技術(shù)進(jìn)展[J].河北化工，2011年01期.