基金項(xiàng)目：黑龍江省衛(wèi)生廳課題（No.2007-492）

通訊作者：馬萍，女，副教授，研究方向：神經(jīng)康復(fù)

摘要：

目的：探討NT-3與糖尿病性陰莖勃起功能障礙（DED）的關(guān)系，電針治療對(duì)其表達(dá)變化的影響及改善勃起功能的可能機(jī)制。方法：取糖尿病大鼠20只，8周后注射APO 30min內(nèi)未有勃起的隨機(jī)均分為電針組（EA）及模型組（DM），EA電針足三里、百會(huì)、會(huì)陰穴4周，另取正常大鼠10只做正常對(duì)照組（CN），通過(guò)免疫組化觀察各組脊髓腰骶段NT-3陽(yáng)性神經(jīng)元表達(dá)的變化。結(jié)果：EA及DM與CN相比、EA與DM相比，大鼠陰莖勃起次數(shù)及脊髓腰骶段NT-3陽(yáng)性神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)均有顯著性差異（P<0.05；P<0.01）。結(jié)論：電針治療可明顯提高DED大鼠陰莖勃起次數(shù)，這可能與提高腰骶段脊髓NT-3陽(yáng)性神經(jīng)元表達(dá)有關(guān)。

關(guān)鍵詞：電針；糖尿?。簧窠?jīng)生長(zhǎng)因子-3；勃起功能障礙

【中圖分類號(hào)】

R587.1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1002-3763（2014）06-0071-01

陰莖勃起功能障礙（ED）是糖尿?。―M）的常見(jiàn)并發(fā)癥，占男性勃起障礙發(fā)病率的35%～75%左右，嚴(yán)重危害男性生活質(zhì)量，但其發(fā)病的分子機(jī)制仍未完全闡明。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)應(yīng)用免疫組化技術(shù)對(duì)DED大鼠模型腰骶段脊髓NT-3表達(dá)的變化進(jìn)行觀察，以探討NT-3與DED的關(guān)系和發(fā)生機(jī)制，并通過(guò)電針治療觀察其對(duì)DED的改善和對(duì)NT-3表達(dá)變化的影響，進(jìn)一步完善電針治療DED的可能分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：

選用Wistar雄性大鼠30只，體重200-250g，購(gòu)自本校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：黑動(dòng)字第P00102009號(hào)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 模型制作：

隨機(jī)抽取10只為正常對(duì)照組，其余20只用于糖尿病造模，在禁食24 h后按60 mg/kg腹腔注射2%鏈脲佐菌素溶液。1周后測(cè)定血糖，凡血糖值≥16.7 mmol/L者為糖尿病大鼠。

電針取穴參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[1]，每次電針15min，隔日1次，連續(xù)4周。

1.2.2 APO試驗(yàn)：

于8周2個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行ED實(shí)驗(yàn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)為10只。參照Heaton方法，注射阿撲嗎啡（APO）（100μg/100g）后觀察30 min，記錄陰莖勃起次數(shù)。龜頭充血及末端陰莖露出為勃起1次。30 min內(nèi)未出現(xiàn)勃起的為模型組。

1.2.2 標(biāo)本制備：

取腰骶段脊髓放入4%多聚甲醛固定2 h，再入20%蔗糖至下沉；用低溫冰凍切片機(jī)對(duì)脊髓作連續(xù)橫切片，片厚30μm。切片進(jìn)行NT-3的ABC免疫組織化學(xué)染色。

1.2.3 圖像分析及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：

數(shù)據(jù)用表示， 用Tiger920圖像分析系統(tǒng)及Tanon GIS-1000凝膠成像處理系統(tǒng)測(cè)定大鼠腰骶段脊髓NT-3蛋白的相對(duì)含量。顯著性檢驗(yàn)采用SPSS11.0軟件，組間差異用方差分析作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2 實(shí)驗(yàn)分析及結(jié)果

2.1 陰莖勃起功能實(shí)驗(yàn)及NT-3免疫組化染色結(jié)果： 與CN比較，EA及DM陰莖勃起次數(shù)和勃起率明顯降低（P<0. 05），尤其是DM（P<0. 01）；EA與DM比較， 陰莖勃起次數(shù)和勃起率明顯增強(qiáng)（P<0. 05）。

腰骶段脊髓存在大量NT-3陽(yáng)性神經(jīng)細(xì)胞，EA、DM與CN相比，NT-3陽(yáng)性神經(jīng)細(xì)胞的數(shù)量及灰度差異均有顯著性（P<0. 05；P<0. 01） ；EA與DM相比，NT-3陽(yáng)性神經(jīng)細(xì)胞的數(shù)量及灰度差異有顯著性（P<0. 05） 。

表1 各組大鼠陰莖勃起次數(shù)及腰骶段脊髓NT-3陽(yáng)性神經(jīng)纖維灰度比較（X±s）

與CN比較，*P<0. 05，**P<0. 01 EA與DM比較， ▲ P<0. 05

3 討論

神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子是一類在靶組織內(nèi)合成，并逆行運(yùn)輸至效應(yīng)神經(jīng)元的能對(duì)中樞和周圍神經(jīng)發(fā)揮營(yíng)養(yǎng)作用的小分子肽類物質(zhì)和蛋白質(zhì)。NT-3是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族中重要成員，它與NGF有50%同源性，對(duì)中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)均有廣泛作用。

神經(jīng)因素在陰莖勃起的發(fā)生及調(diào)控中起重要作用，糖尿病引起的神經(jīng)病變是DED發(fā)病的重要原因。自主神經(jīng)病變可以引起陰莖靜脈漏的形成， 而周圍神經(jīng)病變可以使神經(jīng)反射傳導(dǎo)障礙，支配陰莖的舒血管腸肽能、膽堿能、腎上腺素能神經(jīng)損壞，導(dǎo)致與陰莖勃起有關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)濃度改變，最終導(dǎo)致ED。

李劍波等[2]通過(guò)定量分析大鼠坐骨神經(jīng)的結(jié)構(gòu)，觀察DM狀態(tài)對(duì)外周神經(jīng)的損害，發(fā)現(xiàn)DM狀態(tài)可致大鼠坐骨神經(jīng)髓鞘及軸突的改變，包括：軸索萎縮、脫髓鞘、有髓纖維密度減少即神經(jīng)再生障礙。對(duì)勃起功能起不同的作用。

芬蘭學(xué)者Hiltunen等報(bào)道，在正常大鼠脊髓S1段背根神經(jīng)節(jié)，NT-3、NGF、BDNF 3種NT的受體均有表達(dá)。該研究結(jié)果推測(cè)，NT-3可能為勃起過(guò)程中更為重要的NT。

褚氏認(rèn)為[3]，會(huì)陰穴治療陽(yáng)瘺，能夠改善局部血管、神經(jīng)機(jī)能，可能與“陰部神經(jīng)-脊神經(jīng)節(jié)段反射弧”作用的調(diào)整及其對(duì)勃起的影響有關(guān)。

脊髓勃起中樞位于T12-L1.節(jié)段，反射性勃起中樞位于S2-S4節(jié)段，我們通過(guò)對(duì)大鼠的腰骶段脊髓NT-3的研究，發(fā)現(xiàn)在正常大鼠腰骶段脊髓有NT-3陽(yáng)性神經(jīng)細(xì)胞的表達(dá)，DM大鼠腰骶段脊髓NT-3陽(yáng)性神經(jīng)細(xì)胞明顯減少（P<0. 01），將直接影響中樞系統(tǒng)腰骶段脊髓的功能。 男性生殖器官都接受交感神經(jīng)支配，前列腺的交感神經(jīng)來(lái)自腰1- 3交感干神經(jīng)節(jié)，陰莖的交感神經(jīng)形成陰莖海綿體大、小神經(jīng)，分布于尿道海綿體部、陰莖海綿體部及其勃起組織，是調(diào)節(jié)陰莖勃起主要神經(jīng)。NT-3在大鼠腰骶段脊髓中表達(dá)下降，將直接影響陰莖及前列腺內(nèi)神經(jīng)的病變，將引起陰莖勃起障礙及主要附屬性腺對(duì)性功能的維護(hù)作用，引起ED。通過(guò)電針足三里、關(guān)元、會(huì)陰穴，明顯提高ED大鼠腰骶段脊髓內(nèi)NT-3的表達(dá)，明顯改善了勃起功能，這可能為電針治療糖尿病勃起功能障礙提供新的理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1] 鄧春雷，殷克敬.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社， 1998， 7： 147.

[2] 李劍波，陳家偉，馮振卿，等. 糖尿病對(duì)外周神經(jīng)形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響[J]. 南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，19（3）： 200-202.

[3] 褚自宏. 會(huì)陰配關(guān)元治療陽(yáng)瘺癥31例[J]. 針灸臨床雜志，1993，9（1）：15.