作者簡(jiǎn)介：馬璇，女，新疆焉耆人，1986年4月生，黨員，生藥學(xué)碩士，新疆維吾爾藥業(yè)有限責(zé)任公司研發(fā)人員，從事維吾爾藥研發(fā)。

摘要：柴胡為常用中藥材，具有解表和里、舒肝解郁、升舉陽(yáng)氣等功效，柴胡所含的化學(xué)成分較復(fù)雜，其主要的藥效成分為柴胡皂苷和揮發(fā)油類，其中柴胡皂苷類成分的含量較高，許多研究者對(duì)其含量測(cè)定方法進(jìn)行研究，本文就對(duì)國(guó)內(nèi)外研究者進(jìn)行的含量測(cè)定方法進(jìn)行簡(jiǎn)單概述。

關(guān)鍵詞：柴胡；皂苷；含量測(cè)定；進(jìn)展

【中圖分類號(hào)】

R453 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1002-3763（2014）06-0038-02

柴胡皂苷類成分是柴胡中的標(biāo)示性成分，經(jīng)過(guò)多年研究后其組成成分類型較為明確，也是最為公認(rèn)的活性成分，其在柴胡藥材中含量較大。要充分實(shí)現(xiàn)柴胡的藥用價(jià)值，就需要控制柴胡制劑的內(nèi)在質(zhì)量，選擇合理的含量測(cè)定方法。

1 柴胡皂苷類成分的的含量測(cè)定

1.1 柴胡總皂苷的測(cè)定

1.1.1 紫外-分光光度法測(cè)定總皂苷：

分光光度法不僅能測(cè)定有色物質(zhì)，還能測(cè)定有共軛結(jié)構(gòu)的無(wú)色物質(zhì)，操作簡(jiǎn)單、靈敏、適用面廣，常用于三萜皂苷的分析測(cè)定。由于柴胡皂苷無(wú)色，可以加入適當(dāng)?shù)脑噭╋@色后測(cè)定，此方法常用兩種顯色體系：對(duì)二甲氨基苯甲醛-硫酸體系[1] 和香草醛-冰醋酸體系[2]。

有研究將柴胡樣品經(jīng)酸處理后用紫外分光光度法測(cè)定柴胡總皂苷[3]，柴胡中主要皂苷 a，d 分子結(jié)構(gòu)中有 13，28 位醚鍵，對(duì)酸不穩(wěn)定，酸性條件下醚鍵斷裂形成有共軛體系的二烯體柴胡皂苷 b1，b2，在紫外光區(qū)產(chǎn)生明顯吸收峰，從而可以在 252 nm最大吸收處測(cè)定，見(jiàn)Fig.1.1。由于柴胡中皂苷以 a，c，d 為主，而且均有不穩(wěn)定的醚鍵結(jié)構(gòu)，所以將這些皂苷在經(jīng)酸水解后轉(zhuǎn)化為二烯體皂苷進(jìn)行紫外測(cè)定的方法，基本可以反映總皂苷的含量。

Fig.1.1 The transformation of saikoponins

1.1.2 高效液相測(cè)定柴胡總皂苷：

Hideyou Suzuki等[4]使用 HPLC 測(cè)定柴胡總皂苷，并對(duì)分析條件進(jìn)行優(yōu)化。在柴胡提取物中加入稀釋的氫氧化鈉使乙?；窈碥毡辉砘?，再經(jīng)酸中和后，使用十八烷基硅烷（ODS）柱進(jìn)行處理，以柴胡皂苷a和柴胡皂苷d為對(duì)照，在 206 nm 處測(cè)定峰面積，計(jì)算總皂苷含量。這種方法省時(shí)方便，復(fù)雜樣品可同時(shí)處理。

2 柴胡皂苷單體的測(cè)定

2.1 薄層色譜法：

該方法是用特定波長(zhǎng)的光照射在薄層板上，對(duì)薄層板上吸收紫外光或可見(jiàn)光的斑點(diǎn)或經(jīng)照射能激發(fā)產(chǎn)生熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于藥品分析，是常用的中藥含量測(cè)定方法。劉偉等[5]用定量毛細(xì)管吸取樣品和對(duì)照品溶液，按薄層條件進(jìn)行展開(kāi)，進(jìn)行反射法鋸齒掃描測(cè)定，以斑點(diǎn)的面積來(lái)比較柴胡皂苷的含量。

2.2 高效液相法：

高效液相色譜法分離效率高、分析速度快、檢測(cè)靈敏度高，可廣泛應(yīng)用于成分測(cè)定中。2010 版《中華人民共和國(guó)藥典》和日本藥局方第 15 版[6]均使HPLC進(jìn)行測(cè)定。

HPLC 法測(cè)定柴胡皂苷通常接不同檢測(cè)器，常用的有HPLC-ELSD[7] HPLC-DAD[8] 等，Yuanwu Bao [9]等使用 LC-MS/MS 同時(shí)測(cè)定柴胡藥材和小柴胡湯中 15 種柴胡皂苷及其衍生物，并對(duì)電離條件進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果顯示負(fù)離子模式能達(dá)到最佳的分析物電離靈敏度并獲得最多的碎片信息，可以準(zhǔn)確快速地測(cè)定柴胡皂苷的含量。

Xiu-Qin LI 等[10]在樣品中加入溫和的酸使柴胡皂苷 a，d 分別完全轉(zhuǎn)化為柴胡皂苷 b1，b2，使用 HPLC-PDA 在 250nm 處測(cè)定二者含量。

2.3 毛細(xì)管電泳： 毛細(xì)管電泳（high performance capillary electrophoresis，HPCE）是近幾十年發(fā)展起來(lái)的一種分離分析技術(shù)，它以彈性石英毛細(xì)管為分離通道，以高電壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，依據(jù)供試品中各組分的淌度 （單位電場(chǎng)強(qiáng)度下的遷移速度） 和 （或） 分配行為的差異而實(shí)現(xiàn)各組分分離的一種分析方法。

You-Zung Hsieh 等[11]使用毛細(xì)管電泳來(lái)測(cè)定柴胡皂苷含量，并比較了不同陰離子表面活性劑，膽汁鹽和十二烷基硫酸鈉（SDS）的分離效果，在 SDS 中加入 r-環(huán)糊精則能得到良好的分離效果。

2.4 膜免疫測(cè)定：

Osamu Morinaga等[12]以聚醚砜薄膜（PES）為固相膜，乙腈：水（4：1）用于溶解柴胡皂苷標(biāo)準(zhǔn)品、柴胡提取物，用柴胡皂苷 a 的單克隆抗體進(jìn)行印跡測(cè)定，柴胡皂苷在 PES 上形成的有色斑點(diǎn)可以用 NIH 圖像軟件處理，從而計(jì)算出皂苷含量。

2.5 酶聯(lián)免疫法：

酶聯(lián)免疫法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是以固相載體吸附抗原/抗體為基礎(chǔ)的分析方法。Tae Kwon Shono等[13]以柴胡皂苷 a 為單克隆抗體進(jìn)行 ELISA 分析。與 HPLC 同時(shí)測(cè)定柴胡皂苷，結(jié)果顯示 ELISA 的靈敏度更高。

2.6 液滴逆流層析（DCCC）：

液滴逆流層析是將固定相充滿一組彼此相連的細(xì)管，流動(dòng)相以微滴的形式穿過(guò)固定相，利用物質(zhì)在互不混溶的兩相液滴中的分配系數(shù)不同而達(dá)到分離目的。有學(xué)者就利用 DCCC 測(cè)定柴胡皂苷含量[14]。

參考文獻(xiàn)

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