呂 科，蔣志芳，封浩得

（四川省安岳縣人民醫(yī)院藥劑科，四川 資陽 642350）

胃消合劑由白術(shù)、枳實、黃連、厚樸、陳皮、吳茱萸、合歡皮、茯苓、玄胡索等組方，為我院治療慢性胃炎的院內(nèi)制劑，具有健脾和胃、疏肝解郁、行氣止痛的功效，用于治療慢性胃炎、功能性消化不良。為了控制和提高藥品質(zhì)量，筆者通過薄層色譜（TLC）法對白術(shù)、玄胡索進行定性鑒別，采用高效液相色譜（HPLC）法對黃連中主要成分鹽酸小檗堿進行含量測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

LC－4A型高效液相色譜儀（日本島津公司）；SPD－10AVP型檢測器（日本島津公司）。鹽酸小檗堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為110713－200609）；胃消合劑（四川省安岳縣人民醫(yī)院制劑室，川藥準字 SZBZ20070581，批號分別為090307，100311，110317）；水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 TLC法鑒別試驗

白術(shù)[1]：取3個批號本品各15 g，剪細，加硅藻土 15 g，研勻，加環(huán)己烷40 mL，回流提取15 min，濾過，濾液置旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)儀上濃縮至0．5 mL，作為供試品溶液；另取白術(shù)對照藥材 0．5 g，同法制成對照藥材溶液；稱取白術(shù)陰性樣品，同供試品溶液制備方法制成缺白術(shù)的陰性對照品溶液。照文獻[1]中TLC法試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯（50∶1）為展開劑，展開，取出晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。結(jié)果，供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點，并顯一桃紅色主斑點，陰性對照品溶液則無此斑點。見圖1 A。

玄胡索[2]：取3個批號本品各15 g，研細，加甲醇 20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加水10 mL使溶解，加濃氨試液調(diào)至堿性，用乙醚充分振搖提取2次，每次15 mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液；另取玄胡索對照品藥材0．1 g，同法制成對照品溶液;稱取玄胡索陰性樣品，同法制成陰性對照品溶液。照文獻[2]中TLC法試驗。吸取上述3種溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－丙酮(9∶2)為展開劑，展開，取出晾干，置碘缸中約3 min后取出檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與對照藥材溶液色譜和對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照品溶液無干擾。見圖1 B。

圖1 薄層色譜圖

2．2 含量測定

2．2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Agilent Zorbax SB － C18柱 （250 mm ×4．6 mm，5 μm)；流動相：乙腈 － 0．03 mol／L 磷酸二氫鉀（45 ∶55）；流速 1．0 mL ／min；柱溫：30℃；檢測波長:265 nm。在上述條件下，鹽酸小檗堿色譜峰與其他組分色譜峰分離完全，陰性樣品溶液無干擾，色譜圖見圖2。

2．2．2 溶液制備

精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇稀釋成每1 mL含60 μg的溶液，即得對照品溶液。精密量取本品 50 mL，用 80%甲醇萃取3次，合并萃液減壓蒸餾至浸膏狀，用流動相稀釋至100 mL，濾過，即得供試品溶液。取不含鹽酸小檗堿的陰性樣品適量，同法制得陰性對照品溶液。

圖2 高效液相色譜圖

2．2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取對照品溶液 1．0，2．0，3．0，5．0，10 μL注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件測定鹽酸小檗堿峰面積。以鹽酸小檗堿峰面積積分值（Y）為縱坐標、進樣量（X）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程 Y＝4×106X－38 649(r＝0．999 9)。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿進樣量在 0．062～1．804 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗：取同一對照品溶液，在擬訂色譜條件下連續(xù)進樣 6次，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為 0．7%(n＝6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液（批號為090311）1份，分別在 0，2，4，8，12，24 h 時按擬訂色譜條件進樣測定。結(jié)果的 RSD 為0．87%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：精密量取樣品（批號為090311）50 mL，依法平行制備供試品溶液6份，測定鹽酸小檗堿含量。結(jié)果鹽酸小檗堿平均含量為 1．36 g／L，RSD 為 0．30% （n＝6）。表明該方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品0．9 mL，置10 mL容量瓶中，平行操作6次，加入適量鹽酸小檗堿對照品溶液，按供試品含量測定方法進樣測定，計算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 鹽酸小檗堿加樣回收試驗結(jié)果（n＝6)

2．2．4 樣品含量測定

取樣品3批，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測定含量。結(jié)果批號為090307，100311，110317的樣品中鹽酸小檗堿含量分別為 1．32，1．41，1．33 g ／L。

3 討論

在鑒別白術(shù)時，由于蒼術(shù)酮成分不穩(wěn)定，放置時間稍長，其檢出靈敏度大為降低，所以試驗時點樣溶液必須新制備。

在考察鹽酸小檗堿含量測定的樣品提取方法時，曾對比30，35，40℃的柱溫條件，結(jié)果鹽酸小檗堿色譜峰拖尾因子隨柱溫增加而增大，表明應(yīng)使用較低柱溫或室溫下進行樣品測定，故最終確定柱溫為30℃。

參考文獻：

[1]王淑紅，宋瀟瀟，熊 英.參術(shù)健脾丸的質(zhì)量控制方法[J].中國藥師，2008，11（9）：1 017．

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄 31，41，205．