周平 童卉琦 白金 趙明明 金向群

（吉林大學(xué)藥學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130012）

RP-H PLC測(cè)定鹽酸二甲雙胍腸溶片的含量

周平 童卉琦 白金 趙明明 金向群

（吉林大學(xué)藥學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130012）

目的：依《中國(guó)藥典》所述鹽酸二甲雙胍腸溶膠囊含量測(cè)定的方法，對(duì)鹽酸二甲雙胍腸溶片含量測(cè)定方法進(jìn)行研究。方法：采用 C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱，流動(dòng)相為0.05%庚烷磺酸鈉溶液（用10%的磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0）-乙腈（84∶16），柱溫：30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)232 nm。結(jié)果：鹽酸二甲雙胍在2.335～37.36 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.999 9，平均回收率為100.34%（n=9）。結(jié)論：藥典所述腸溶膠囊的含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，靈敏度高，專屬性好，不僅能夠用于腸溶膠囊的測(cè)定，同時(shí)也能夠用于鹽酸二甲雙胍腸溶片的質(zhì)量控制。

鹽酸二甲雙胍；反向高效液相色譜法；含量測(cè)定

雙胍類降糖藥物被廣泛用于治療2型糖尿病患者，其療效確切，為 2型糖尿病患者的首選藥物，鹽酸二甲雙胍腸溶片為雙胍類腸溶制劑，不但有降血糖的作用，還有減輕體質(zhì)量和高胰島素血癥的效果?！吨袊?guó)藥典》（2010年版）中雖未收載鹽酸二甲雙胍腸溶片及其含量的測(cè)定方法[1]，但已收載鹽酸二甲雙胍腸溶膠囊的測(cè)定方法，本文擬依據(jù)《中國(guó)藥典》（2010年版）對(duì)鹽酸二甲雙胍腸溶膠囊的含量測(cè)定方法，對(duì)腸溶片劑進(jìn)行測(cè)定，以確定其適應(yīng)性。

1 儀器與試藥

島津LC-10AT型高效液相色譜儀，SPD-10A型紫外檢測(cè)器，AT-330柱溫控制儀，浙江大學(xué)2010色譜工作站，JA1003型電子天平；所用甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純；鹽酸二甲雙胍標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)：100664-200602，原中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）；鹽酸二甲雙胍腸溶片（批號(hào)：20130121，20120205，20130612，實(shí)驗(yàn)室自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.05%庚烷磺酸鈉溶液（用10%的磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0）-乙腈（84∶16）；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：233 nm。

2.2 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

精密稱取鹽酸二甲雙胍對(duì)照品適量，用流動(dòng)相稀釋成每1 mL約含20 μg的溶液作為對(duì)照品溶液。進(jìn)樣測(cè)定，鹽酸二甲雙胍峰的保留時(shí)間約為6.2 min，理論板數(shù)為2 000以上。稱取處方比例混合輔料約25 mg，置于100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相適量，溶解后定容，依法測(cè)定，結(jié)果表明，空白輔料色譜圖無(wú)明顯雜質(zhì)峰，輔料和外加試劑不干擾鹽酸二甲雙胍的測(cè)定。色譜圖見(jiàn)圖1～ 3。

2.3 溶液的制備

圖1 空白輔料RP-HPLC圖

圖2 鹽酸二甲雙胍對(duì)照品RP-HPLC圖

圖3 鹽酸二甲雙胍腸溶片RP-HPLC圖

2.3.1 對(duì)照品溶液的配置精密稱取鹽酸二甲雙胍對(duì)照品，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1 mL約含40 μg的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液；精密量取上述儲(chǔ)備液適量，加流動(dòng)相制成每 1 mL含鹽酸二甲雙胍20 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3.2 供試品溶液的配置精密稱取供試品適量（約相當(dāng)于鹽酸二甲雙胍50 mg），置于200 mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密取續(xù)濾液8 mL，置于100 mL的容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，作為供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液用流動(dòng)相稀釋制成不同濃度的系列溶液。分別精密吸取上述溶液20 μL，注入高效液相色譜儀，照含量測(cè)定方法測(cè)定。記錄峰面積，以峰面積對(duì)濃度回歸得標(biāo)準(zhǔn)曲線，鹽酸二甲雙胍的回歸方程為：

r=0.999 9。結(jié)果表明鹽酸二甲雙胍2.335～37.36 μg/mL濃度范圍內(nèi)，濃度與峰面積線性關(guān)系良好。

2.5 檢測(cè)限

配制不同濃度的鹽酸二甲雙胍對(duì)照品溶液照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，以信噪比大于3為判斷標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，確定鹽酸二甲雙胍的檢測(cè)限約為50 ng/mL。

2.6 定量限

配制不同濃度的鹽酸二甲雙胍對(duì)照品溶液，照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，以信噪比大于10為判斷標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，確定鹽酸二甲雙胍的定量限約為0.5 μg/mL。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取“2.3.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，精密吸取20 μL，進(jìn)樣，連續(xù)測(cè)定6次，記錄色譜圖，計(jì)算得峰面積的RSD值為0.76%，表明該方法重復(fù)性較好。

2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn)

照含量測(cè)定方法，配制含量測(cè)定樣品溶液（批號(hào)：20130322），共6份，依次測(cè)定，記錄峰面積，結(jié)果鹽酸二甲雙胍含量的RSD值為0.61%，表明該方法重現(xiàn)性較好。

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.3.2”項(xiàng)下供試品溶液，分別在 0，2，4，6，8小時(shí)精密吸取 20 μL，進(jìn)樣，記錄峰面積，并經(jīng)計(jì)算得RSD值為0.42%。結(jié)果表明，樣品溶液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 回收率試驗(yàn)

精密稱定約40，50，60 mg的鹽酸二甲雙胍原料藥各3份，分別加入相應(yīng)量的空白輔料，照含量測(cè)定項(xiàng)下方法制備供試品溶液并測(cè)定。由測(cè)得量和加入量計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 鹽酸二甲雙胍回收率試驗(yàn)結(jié)果

表1結(jié)果表明該方法高、中、低三個(gè)濃度的回收率均合格。平均回收率為100.34%，總RSD為0.68%。

2.11 含量測(cè)定

取實(shí)驗(yàn)室自制鹽酸二甲雙胍腸溶片共 3批，按擬定的方法和條件制備對(duì)照品溶液與供試品溶處液，取上述兩種溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，結(jié)果3個(gè)批號(hào)20130129，20130322，20140425的鹽酸二甲雙胍含量分別為99.8%，99.4%和98.9%，RSD分別為0.23%，0.23%和0.24%。

3 討論

3.1檢測(cè)波長(zhǎng)的確定：用配置好的供試品溶液和空白輔料溶液在200～ 800 nm范圍內(nèi)掃描，供試品溶液在233 nm處有最大吸收，而輔料和溶劑無(wú)干擾，故將檢測(cè)波長(zhǎng)定在233 nm。

3.2流動(dòng)相的選擇：鹽酸二甲雙胍在水和甲醇溶液中保留時(shí)間較短，容易與溶劑峰混淆，通過(guò)對(duì)多重試劑的比較和選擇，最終確定用 0.05%庚烷磺酸鈉溶液（用10%的磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0）-乙腈（84∶16）作為本研究的流動(dòng)相[2-3]。

3.3本實(shí)驗(yàn)依《中國(guó)藥典》所述鹽酸二甲雙胍腸溶膠囊的方法對(duì)鹽酸二甲雙胍腸溶片劑進(jìn)行了含量測(cè)定，并對(duì)該測(cè)定法進(jìn)行了方法學(xué)考察，考察結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確靈敏，重復(fù)性好，不僅能夠用于腸溶膠囊的測(cè)定，同時(shí)也能夠用于鹽酸二甲雙胍腸溶片的質(zhì)量控制。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：625-626.

[2] 楊青.高效液相色譜法測(cè)定鹽酸二甲雙胍片的含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2008，17（19）：35.

[3] 戚燕，尤聰超，吳松.離子對(duì)-HPLC法測(cè)定鹽酸二甲雙胍含量及有關(guān)物質(zhì)[J].藥物分析雜志，2002，22（4）：285-287.

Determination of Metformin Hydrochloride Enteric-coated Tablets by RP-HPLC

Zhou Ping，Tong Huiqi，Bai Jin，Zhao Mingming，Jin Xiangqun（School of Pharmaceutical Sciences of Jilin University，Jilin Changchun 130012，China）

Objective：To study the method of determinating the content of metformin hydrochloride enteric-coated tablets by RP-HPLC according to the method set forth in the Chinese Pharmacopoeia for metformin hydrochloride enteric-coated capsules.Methods：Chromatographic column of Hypersil ODS C18（4.6 mm× 250 mm,5 μm）was used with the mobile phase of 0.05%heptane solution of sodium （10%phosphoric acid solution adjusted to pH 4.0）-acetonitrile （84∶16）.The detection wavelength was at 232 nm and the column temperature was at 30℃.Results：There was a good linear relationship when the sample size was within the range of 2.335～37.36 μg/mL（r=0.999 9）. The average recovery was 100.34% （n=9）.Conclusion：The content determination method for the capsules is convenient,fast and reproducible,it can also be used for the content determination of metformin hydrochloride enteric-coated tablets.

Metformin Hydrochloride；RP-HPLC；Content Determination

10.3969/j.issn.1672-5433.2014.12.008

2014-09-08）

周平，女，碩士。研究方向：藥物新劑型及新型藥物。E-mail：june0z@163.com

金向群，男，博士生導(dǎo)師。研究方向：藥物新劑型及新型藥物。通訊作者E-mail：jinxq@jlu.edu.cn