蔣曉蘭，張 濤，馬 哲，李 彥，馬力軍，鄭國(guó)棟，王朋恩

(1.石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司，河北 石家莊 050000;2.奧星制藥設(shè)備(石家莊)有限公司，河北 石家莊 050000;3.輝瑞投資有限公司，河北 石家莊 050000;4.神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 石家莊 051430)

?

人工牛黃甲硝唑膠囊微生物限度檢查方法驗(yàn)證

蔣曉蘭1，張 濤2，馬 哲1，李 彥3，馬力軍4，鄭國(guó)棟1，王朋恩1

(1.石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司，河北 石家莊 050000;2.奧星制藥設(shè)備(石家莊)有限公司，河北 石家莊 050000;3.輝瑞投資有限公司，河北 石家莊 050000;4.神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 石家莊 051430)

目的：確認(rèn)所采用的檢驗(yàn)方法適合于人工牛黃甲硝唑膠囊的微生物限度檢查計(jì)數(shù)檢驗(yàn)。方法：采用加入乳化劑的方法制備該藥供試液，制成1∶20的供試液，細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法為平皿法。結(jié)果：各組實(shí)驗(yàn)回收率均大于70%。結(jié)論：人工牛黃甲硝唑膠囊的微生物限度檢查計(jì)數(shù)方法可采用平皿法。

人工牛黃甲硝唑膠囊；微生物限度檢查；平皿法；回收率

人工牛黃甲硝唑膠囊為復(fù)方制劑，用于治療急性智齒冠周炎、局部牙槽膿腫、牙髓炎、根尖周炎等癥狀[1]。本文旨在驗(yàn)證《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄XI J中微生物檢驗(yàn)方法是否適用于人工牛黃甲硝唑膠囊的微生物測(cè)定。此法為通用方法，未必適用于每個(gè)藥品。通過(guò)該檢驗(yàn)方法對(duì)人工牛黃甲硝唑膠囊中枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌進(jìn)行回收率試驗(yàn)。

1 材料

1.1 儀器設(shè)備

MG0.6型壓力蒸汽滅菌柜(河北省邢臺(tái)醫(yī)療器械廠)；LRH-150B型生化培養(yǎng)箱(廣東省醫(yī)療器械廠)；101-2A電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海滬南科學(xué)儀器聯(lián)營(yíng)廠)；SHJ-SZP超凈工作臺(tái)(蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司)。

1.2 培養(yǎng)基及試劑

改良馬丁培養(yǎng)基、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基、4-甲基傘形酮葡糖苷酸培養(yǎng)基。培養(yǎng)基均為本公司自制。人工牛黃甲硝唑膠囊(石藥集團(tuán)有限公司)，批號(hào)1205051、1207061、1209071，規(guī)格：甲硝唑0.2g，人工牛黃5mg。

1.3 驗(yàn)證菌種

金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、大腸埃希菌[CMCC(B)44102]、枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]、黑曲霉菌[CMCC(F)98003]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

2 菌液制備

將金黃色葡萄球、枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌、白色念珠菌和黑曲霉菌按《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄XI J 細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)項(xiàng)下的菌液制備方法制成濃度約為50～100cfu/mL的菌懸液，備用。[2]

3 供試液制備

用非水溶性藥品處理方法試驗(yàn)，取5g司盤80、3g單硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80于燒杯中溶化混勻,加入供試品5g，用無(wú)菌玻棒攪拌成團(tuán)后，緩慢加入45℃左右的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100mL，邊加邊攪拌使之溶化，即為供試液。

4 回收率實(shí)驗(yàn)

4.1 結(jié)果判定：回收率應(yīng)不低于70%

稀釋劑對(duì)照組的菌回收率(%)=稀釋劑對(duì)照組的平均菌落數(shù)/菌液組的平均菌落數(shù)×100%

試驗(yàn)組的菌回收率(%)=(試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)-供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù))/菌液組的平均菌落數(shù)×100%

4.2 供試品對(duì)照組

分別取上述供試液1mL，用平皿法制板，制成2個(gè)營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板、2個(gè)玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板。細(xì)菌在33℃下培養(yǎng)72h，霉菌或酵母菌置25℃下培養(yǎng)120h，計(jì)數(shù)。

4.3 試驗(yàn)組

取上述供試液1mL和5種菌液各1mL，同法制成營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板各2份，并依法培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。

4.4 菌液組

取5種相同的菌液各1mL，同法制成營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板各2份，并依法培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表1-3。

4.5 稀釋劑對(duì)照組

取供試品制備所用稀釋劑1mL和上述5種菌液各1mL，制成營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板各2份。細(xì)菌置33℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h，霉菌(酵母菌)置25℃培養(yǎng)120h計(jì)數(shù)[3]。結(jié)果見(jiàn)表4。

5 討論

本研究結(jié)果表明：各組試驗(yàn)回收率均大于70.0%，符合法定要求，本法所用稀釋劑對(duì)結(jié)果無(wú)影響；采用平皿法檢驗(yàn)供試品，采用加入對(duì)照法試驗(yàn)，各組試驗(yàn)的回收率均高于70.0%，無(wú)明顯抑菌作用。所以人工牛黃甲硝唑膠囊在進(jìn)行微生物限度檢查檢驗(yàn)金黃色葡萄球、枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌、白色念珠菌和黑曲霉菌時(shí)可以采用非水溶性藥品處理方法和平皿法進(jìn)行檢驗(yàn)。

表1 各菌株菌數(shù)及回收率 (批號(hào)：1205051)

表2 各菌株菌數(shù)及回收率 (批號(hào)：1207061)

表3 各菌株菌數(shù)及回收率 (批號(hào)：1209071)

表4 各菌株菌數(shù)及回收率

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì). 國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)·化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) (第三冊(cè))[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2008.

[2] 潘有文. 現(xiàn)代醫(yī)藥工業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理與驗(yàn)證技術(shù)[M].北京：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2004:179-185.

[3] 馬緒榮，蘇德模. 藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)手冊(cè)[M].北京：科學(xué)出版社，2006:67.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

Validation of Test for Specified Micro-organism of Galcus Bovis and Metronidazole Capsules

Jiang Xiaolan1，Zhang Tao2，Ma Zhe1，Li Yan3，Ma Lijun4，Zheng Guodong1，Wang Peng’en1

(1. CSPC Ouyi Pharmaceutical CO,Ltd, Shijiazhuang 050000, China;2. Austar Pharmaceutical Equipment(Shijiazhuang)Ltd., Shijiazhuang 050000，China;3. Pfizer Investment Co.Ltd., Shijiazhuang 050000, China;4.Shineway Pharmaceutical Co.Ltd., Shijiazhuang 051430, China)

Objective:A test for specified micro-organisms of Galcus Bovis and Metronidazole Capsules was established.Methods:To make a one in twenty dilution of original product with suitable sterile surface-active agent .The plate-count method is reserved for bacteria , fungi and microzyme.Results:The ratio of recovery is more than 70 percent.Conclusion:The plate-count method is suit for test for specified micro-organisms of Galcus Bovis and Metronidazole Capsules.

Galcus Bovis and Metronidazole Capsules；Plate-count Method；Ratio of Recovery

2014-05-19

蔣曉蘭(1982-)，女，石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司助理工程師，研究方向?yàn)樗幬锓治觥?/p>

R284

A

1673-2197(2014)17-0031-02