劉立新，柳兵（吳都醫(yī)藥牛尾巴大藥房，湖北 鄂州 436054）

談發(fā)明（宜昌市中醫(yī)院藥劑科，湖北 宜昌 443003）

淡竹葉為禾本科植物淡竹葉Lophatherum gracile Brongn的干燥莖葉，所含的化學(xué)成分主要是酚酸和黃酮類成分［1－2］，具有優(yōu)良的抗活性自由基、抗氧化、抗衰老、抗疲勞、增強(qiáng)免疫力、阻斷亞硝化反應(yīng)、抗菌、抑菌等生物學(xué)功能［3］。故本文以總黃酮的含量為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法對其水提影響因素進(jìn)行考察，優(yōu)化水提工藝條件，為淡竹葉的研究與開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與儀器

藥材淡竹葉購自鄂州市吳都醫(yī)藥有限公司，經(jīng)湖北中醫(yī)藥大學(xué)鑒定教研室鑒定為合格藥材；對照品蘆丁，中國藥品生物檢定所，批號：0080-9705；T1900紫外可見分光光度計(jì)，北京普析儀器設(shè)備有限公司 ；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；SZ-97自動三重純水蒸餾器，上海亞榮生化儀器廠；AT-201電子分析天平（d＝0.01mg，瑞士），硝酸鋁、亞硝酸鈉、無水乙醇、氫氧化鈉等均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 吸水率考察

取淡竹葉10g，剪碎，加20倍量水浸泡，每隔30min觀察1次浸泡透心情況，直至藥材全部浸透，濾出全部未被吸收的水液，計(jì)算吸水率為545%～557%，約為5.5倍。

2.2 淡竹葉水提正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

淡竹葉水提正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)參照文獻(xiàn) ［4］，選用L9（34）正交表安排試驗(yàn)方案，所選因素水平及正交試驗(yàn)方案見表1。

表1 水提工藝正交試驗(yàn)因素水平表

2.3 竹葉總黃酮的含量測定

2.3.1 溶液的配制 對照品溶液的制備：取蘆丁對照品適量，精密稱定，用30%乙醇制成濃度為0.5mg/ml的溶液，即得。

供試品溶液的制備：稱取淡竹葉10g，剪碎，按L9（34）正交表設(shè)定方案［5］進(jìn)行煎煮（第1次加水時(shí)，全部按藥材吸水率5.5倍，補(bǔ)足吸水量），過濾，合并濾液，濃縮至一定體積，置50ml容量瓶中，加乙醇至刻度，振搖均勻，即得。

2.3.2 最大吸收波長的確定 精密量取2.00ml對照品溶液，于25ml比色管中，加入5%NaNO2溶液1ml，充分振蕩6min，再加入5%的Al（NO3）3溶液1.00ml，振蕩6min，最后加入10%的NaOH溶液10ml，用蒸餾水定容至25.00ml，搖勻。以無水乙醇為空白，在200～600nm范圍進(jìn)行掃描測定。結(jié)果508nm時(shí)吸收最大，故選擇508nm作為測定波長。

2.3.3 線性關(guān)系考察 分別精密量取蘆丁對照品溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml于25ml的比色管中，在每個(gè)比色管中分別加入5%的NaNO21ml，充分振蕩6min，加入5%的Al（NO3）31ml，振蕩6min，再加入10%的NaOH溶液10ml，用純水定容到刻度線，搖勻。以試劑作為空白，于508nm處分別測定吸光度。以濃度C為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，蘆丁在0.02～0.10mg/ml范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（r＝0.9997），回歸方程為Y＝17.825X＋0.0095。

2.3.4 樣品含量測定 分別從各組不同實(shí)驗(yàn)條件所得的定容樣品溶液中移取1.00ml竹葉提取液至25ml比色管中，搖勻；加入5%的NaNO2溶液1ml，充分振蕩6min，再加入5%的Al（NO3）3溶液1.00ml，振蕩6min，最后加入10%的NaOH溶液10ml，用蒸餾水定容至25.00ml，搖勻。以試劑為空白，于508nm處測定吸光度。

2.4 淡竹葉水提最佳工藝的確定

淡竹葉水提正交試驗(yàn)結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。結(jié)果表明，以總黃酮含量為評價(jià)指標(biāo)，各因素對提取效果的影響大小順序?yàn)镈＞C＞A＞B，其中D（提取次數(shù)）對提取效果有顯著性影響，其次是C（提取時(shí)間）。結(jié)合表中數(shù)據(jù)，選擇A2B1C1D3作為淡竹葉的最佳水提工藝，即第一次補(bǔ)足吸水量后加10倍量水浸泡2h，其余每次加10倍量水，提取3次，每次提取1h。

表2 水提工藝正交試驗(yàn)表與結(jié)果

表3 竹葉總黃酮的含量方差分析表

2.5 最佳工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

按優(yōu)選的最佳工藝條件提取三批樣品進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，測得總黃酮平均含量為5.771mg/ml。結(jié)果見表4。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果與正交試驗(yàn)結(jié)果基本一致，說明提取工藝條件穩(wěn)定、可行。

表4 水提工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

淡竹葉為禾本科植物淡竹葉Lophatherum gracile Brongn的干燥莖葉，其化學(xué)成分主要是酚酸和黃酮類成分，具有優(yōu)良的抗活性自由基、抗氧化、抗衰老、抗疲勞、增強(qiáng)免疫力、阻斷亞硝化反應(yīng)、抗菌、抑菌等生物學(xué)功能。淡竹葉總黃酮常用的提取方法有水提取法、乙醇回流法和超聲波提取法，經(jīng)提取工藝考察后，發(fā)現(xiàn)乙醇回流法總黃酮提取率最高，水提取法與乙醇回流法相差不太大，出于工業(yè)生產(chǎn)考慮，故本研究選擇水提取法提取淡竹葉中總黃酮。以竹葉總黃酮含量為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法對水提工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，合理可行。

［1］李紅玉，孫靜蕓，戴詩文.竹葉化學(xué)成分研究 ［J］.中藥材，2003，26（8）：562-563.

［2］周惠燕，李士敏.竹葉化學(xué)成分研究 ［J］.中國藥學(xué)雜志，2006，41（9）：662-663.

［3］夏玉紅，董晉文，鐘耕.竹葉提取物的研究開發(fā)現(xiàn)狀 ［J］.中國食品添加劑，2009（2）：77-81，148.

［4］曾衛(wèi)陽，周本杰，黃曉芬.正交試驗(yàn)法優(yōu)選四君子湯的水提工藝 ［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2001，12（11）：988-989.

［5］蘇亦用，郭巧玲，田素英，等.金櫻根質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 ［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（15）：109-111.

［編輯］ 一凡