王群 吳志鴻

目前常用的抗菌性滴眼液多為抗生素類西藥，僅魚腥草滴眼液為中藥制劑。魚腥草性辛微寒，入肺經(jīng)，有清熱解毒之功效［1-2］。《本草綱目》中首次應(yīng)用魚腥草之名，言其葉子有腥氣，故稱之為魚腥草，其味辛，可“散熱毒癰腫”。已有大量實驗和臨床研究證實，魚腥草具有明顯的抗菌和抗病毒作用，對多種微生物有抑制作用，可用于治療流行性結(jié)膜炎、流行性角結(jié)膜炎和病毒性角膜炎等疾病，并取得良好的療效［3-6］。用于眼科治療的魚腥草制劑，多通過滴眼、結(jié)膜下注射、霧化熏蒸和靜脈點滴等方式發(fā)揮作用，其中滴眼液最為常見。魚腥草滴眼液的有效性已多有報道，但是安全性研究卻較少。本研究通過給予大鼠魚腥草滴眼液局部點眼來觀察評價魚腥草眼角膜局部應(yīng)用的安全性。

1 材料和方法

1.1 動物與分組

清潔型健康7～8 周雄性SD 大鼠，重120～220 g，由武警總醫(yī)院實驗動物中心提供。實驗動物及實驗所使用的條件均符合國家科學(xué)技術(shù)委員會的《實驗動物管理條例》。20 只大鼠術(shù)前經(jīng)裂隙燈顯微鏡檢查無眼部異常，按照隨機數(shù)字表法分為兩組，每組各10 只，左眼為實驗眼。對照組滴生理鹽水(0.9% NaCl)，實驗組滴魚腥草滴眼液(四川升和制藥有限公司生產(chǎn)，批號:20010110)，4 次/日(8∶30，12∶30，16∶30，20∶30)，每次1 滴，點眼后使大鼠眼瞼閉合10 秒，共觀察14 天。

1.2 大鼠行為學(xué)變化觀察

每天在給予滴眼液點眼后觀察大鼠有無抓撓眼部、甩頭或頻繁眨眼等行為學(xué)變化。

1.3 角膜形態(tài)變化觀察

每天通過裂隙燈顯微鏡下檢查大鼠的結(jié)膜、角膜和前節(jié)組織的情況，并進行眼前節(jié)照相。根據(jù)Draize 等的兔眼刺激性實驗評分系統(tǒng)并進行改良后，對眼部相應(yīng)組織受累的程度和面積，變化和反應(yīng)進行評分。角膜評分:對角膜受累的強度和面積分別進行評分，各為0～4 分，將所得的分值相加后，乘以加權(quán)系數(shù)得到加權(quán)角膜積分。虹膜評分:根據(jù)虹膜充血、腫脹、角膜周圍充血、出血，虹膜對光刺激反應(yīng)情況等進行總體打分，為0～3 分，然后乘以加權(quán)系數(shù)得到加權(quán)虹膜積分。結(jié)膜評分:對結(jié)膜發(fā)紅、水腫和分泌物分別打分，分別為0～3 分，將所得分值相加后乘以加權(quán)系數(shù)得到獲得加權(quán)結(jié)膜積分。同時記錄其他的損傷，如血管翳(角膜新生血管化)和眼球破裂等［7-8］。具體評分標(biāo)準(zhǔn)見表1。

1.4 結(jié)膜和角膜病理標(biāo)本觀察

滴眼后14 天，大鼠腹腔注射10% 水合氯醛(3.5 ml/kg)，麻醉充分后，在眼科手術(shù)顯微鏡下分離結(jié)膜組織和角膜組織，4%多聚甲醛固定后，常規(guī)制作石蠟切片并進行HE 染色，顯微鏡觀察并進行照相。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

使用IBM SPSS 20.0(IBM SPSS，芝加哥，IL)軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。統(tǒng)計學(xué)方法為χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 行為學(xué)觀察

實驗組給予魚腥草滴眼液后大鼠即有抓撓眼部的行為，半小時后行為消失。對照組大鼠也出現(xiàn)類似癥狀。

2.2 角膜形態(tài)變化觀察

滴眼后第14 天，與實驗開始前的前節(jié)照相比較，未見明顯瞬目、流淚等癥狀，耐受性好。兩組大鼠滴眼后行為學(xué)無明顯差異，所有鼠眼接受藥物點眼后用裂隙燈顯微鏡觀察，未發(fā)現(xiàn)結(jié)膜充血、壞死及角膜混濁。觀察期內(nèi)各組實驗鼠結(jié)膜和鞏膜未見充血、水腫及壞死，角膜均保持透明，無水腫及內(nèi)皮皺褶。虹膜表面無滲出、出血及壞死，瞳孔對光反射靈敏。晶狀體透明，表面無滲出物。直接檢眼鏡觀察玻璃體未見混濁，視網(wǎng)膜血管未見縮窄，視網(wǎng)膜平伏，未見滲出及出血(見圖1)。兩組角膜熒光素鈉染色未見明顯點染，角膜上皮完整(見圖2)。兩組大鼠結(jié)膜、角膜和虹膜Draize 評分采用χ2檢驗統(tǒng)計分析后提示差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 Draize 眼刺激性試驗評分標(biāo)準(zhǔn)

圖1 裂隙燈前節(jié)照相

圖2 角膜熒光素鈉染色后裂隙燈前節(jié)照相

2.3 HE 染色光鏡觀察

HE 染色光鏡觀察發(fā)現(xiàn)兩組大鼠結(jié)膜組織完整，未見明顯炎性細胞浸潤(見圖3)。兩組大鼠角膜上皮層完整，基質(zhì)纖維排列規(guī)則，未見明顯炎性細胞浸潤(見圖4)。

3 討論

圖3 大鼠結(jié)膜HE 染色結(jié)果(HE 染色，×400)

圖4 大鼠角膜HE 染色結(jié)果(HE 染色，×400)

藥物在眼內(nèi)產(chǎn)生毒副作用通常是由功能性改變到亞微觀形態(tài)學(xué)改變，再到微觀形態(tài)學(xué)改變，最后到肉眼可見的改變。角膜是眼科藥物吸收的主要途徑，尤其是滴眼液劑型藥物的直接作用部位，也必然是藥物毒性損傷的主要組織。眼科藥物對角膜的毒性研究主要通過動物實驗和臨床觀察來完成。本實驗為了驗證魚腥草滴眼液眼局部應(yīng)用的安全性，利用SD 大鼠進行在體實驗，觀察魚腥草滴眼液點眼后的刺激性。刺激性是指在通過非口服給藥方式給藥后，藥物對給藥部位產(chǎn)生的不可逆的炎性反應(yīng)，如果給藥部位發(fā)生不可逆的損傷則稱該藥物對給藥部分具有腐蝕性。本實驗中對滴眼后大鼠結(jié)膜、角膜和虹膜組織的形態(tài)學(xué)進行了觀察，并通過Draize 評分系統(tǒng)評估魚腥草滴眼液的局部刺激性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)魚腥草滴眼液組和生理鹽水組的差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義，即魚腥草滴眼液局部應(yīng)用無明顯刺激性。

大鼠在接受魚腥草滴眼液點眼后，結(jié)膜、角膜和眼內(nèi)組織形態(tài)學(xué)上都未觀察到異常變化，病理切片組織結(jié)構(gòu)正常，結(jié)膜上皮完整，角膜上皮完整，基質(zhì)膠原排列整齊，未見炎性細胞浸潤。魚腥草滴眼液給藥后，角膜熒光素鈉染色結(jié)果陰性，角膜上皮完整。綜上所述魚腥草滴眼液局部應(yīng)用比較安全。本研究初步分析了魚腥草滴眼液的眼部用藥安全性，后繼需要進行一系列的研究，系統(tǒng)探討魚腥草滴眼液安全性，如檢測不同濃度魚腥草滴眼液對結(jié)膜上皮細胞和角膜上皮細胞的毒性作用，確定安全用藥濃度區(qū)間;對魚腥草滴眼液結(jié)膜下注射后的大鼠進行電生理檢查，了解魚腥草滴眼液是否對視網(wǎng)膜視神經(jīng)功能產(chǎn)生影響;對魚腥草滴眼液結(jié)膜下注射后的眼內(nèi)組織進行病理學(xué)檢查，了解魚腥草滴眼液是否引起眼底組織的形態(tài)變化等。

［1］孫思邈.銀海精微［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1955:17-18.

［2］楊磊.魚腥草滴眼液的制備及臨床應(yīng)用［J］.中國藥業(yè)，2006，15(11):47.

［3］王本祥.現(xiàn)代中藥藥理學(xué)［M］.天津:科技技術(shù)出版社，1997:252-257.

［4］李翔，王明芳，肖放，等.魚腥草滴眼液治療流行性角膜結(jié)膜炎［J］.中國中醫(yī)眼科雜志，2000，10(4):211-214.

［5］李翔，王明芳，謝學(xué)軍，等.魚腥草滴眼液治療急性卡他性結(jié)膜炎［J］.眼科新進展，2001，21(6):417-419.

［6］趙海濱，彭清華，吳權(quán)龍，等.魚腥草滴眼液治療單純皰疹性角膜炎的實驗研究［J］.中國中醫(yī)眼科雜志，2002，12(3):129-131.

［7］NAS committee for the revision of NAS Publication.Principles and Procedures for Evaluating the Toxitity of House-hold Substances［M］.Washington.D.C.，National Academy of sciences，1977:41-54.

［8］石磊.靶向Bcl-2 小分子化合物納米懸混液對堿燒傷誘導(dǎo)的大鼠角膜新生血管的抑制作用及其作用機制研究［D］.北京:解放軍醫(yī)學(xué)院，2013:17-20.