耿榕徽　楊宇杰　胡春蘭等

[摘要] 目的 探討建立紫蘇葉中紫蘇醛的提取和含量測定方法。 方法 以紫蘇醛為指標(biāo)，利用氣相色譜法（GC）測定其含量。采用DM-FFAP色譜柱，初始柱溫為120℃，以2℃/min升溫至140℃，然后以15℃/min升溫至220℃，保持5 min。比較索氏提取、加熱回流、超聲提取法的差異，并優(yōu)選最佳提取方法。 結(jié)果 建立了紫蘇醛的含量測定方法，紫蘇醛濃度在19.26～192.63 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為101.68%，RSD=1.97%（n=6）。確定了最佳提取工藝，加入20倍量的無水乙醇溶液，在85℃水浴中回流提取1 h。 結(jié)論 本提取及含量測定方法快速簡便、結(jié)果可靠，可為紫蘇葉質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] 加熱回流；紫蘇葉；紫蘇醛；氣相色譜法

[中圖分類號] R931.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）03（a）-0004-04

紫蘇葉為唇形科植物紫蘇（Perilla frutescens L.Britt.）的干燥葉（或帶嫩枝），具有解表散寒、行氣和胃之功效，用于風(fēng)寒感冒，咳嗽嘔惡，妊娠嘔吐，魚蟹中毒[1]。紫蘇葉揮發(fā)油是紫蘇葉的主要活性成分，在食品工業(yè)、化妝品、醫(yī)藥等行業(yè)均有廣泛應(yīng)用[2]。其中紫蘇醛為紫蘇葉揮發(fā)油的主要成分[3-4]，藥理實驗研究表明，紫蘇醛對大鼠離體主動脈有擴血管作用[5]。紫蘇醛和植物甾醇協(xié)同作用可延長小鼠的睡眠時間而顯示鎮(zhèn)靜作用[6]。紫蘇醛做成肟后，甜味是砂糖的2000倍，口服可以升血糖，且作用強于紫蘇油[7-8]。而紫蘇醛的含量多少決定了紫蘇葉的質(zhì)量，紫蘇醛的含量測定多通過提取揮發(fā)油的方法測定[8-10]。提取揮發(fā)油的過程耗時久，耗材也相對較大，不利于快速測定。本研究通過加熱回流法提取紫蘇醛，并用氣相色譜法（gas chromatography，GC）檢測其中紫蘇醛的含量，耗時短，耗材少，可以更簡便、快捷地控制紫蘇葉的質(zhì)量。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

Agilent 7890A氣相色譜儀，高速萬能粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司），KQ-700DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

紫蘇醛對照品（批號：111806-201202，供含量測定用，中國食品藥品檢定研究院，原中國藥品生物制品檢定所），紫蘇葉藥材（批號：Y444-120801-2、Y417-110101-7，頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供），其余試劑均為分析純。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

色譜柱：DM-FFAP彈性石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；FID檢測器；載氣：N2；流速：1 ml/min；進(jìn)樣口和檢測器溫度：250℃；柱溫：初始溫度120℃，然后以2℃/min的速度升溫至140℃，再以15℃/min的速度升溫至220℃，保持5 min；進(jìn)樣量：1 μl；分流比10∶1。分離度>1.5，理論塔板數(shù)按紫蘇醛峰計算≥633 920。

1.2.2 對照品溶液的制備

取紫蘇醛對照品適量，用無水乙醇稀釋至6.4212 mg/ml，搖勻，備用。

1.2.3 提取條件的建立

1.2.3.1 提取方法的考察 紫蘇葉藥材批號：Y417-110101-7。①超聲法：取3份紫蘇葉粉末（過二號篩）各2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入正己烷50 ml，稱重。冰水浴超聲（280 kW，50 kHz），分別提取20、30、40 min，冷卻并補重，微孔濾膜過濾，進(jìn)樣。②索氏提取法：取紫蘇葉粉末（過二號篩）約4 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加入正己烷100 ml，稱重，于85℃水浴中索氏提取2 h，冷卻并補重，微孔濾膜過濾，進(jìn)樣。③加熱回流法：取紫蘇葉粉末（過二號篩）約2 g，精密稱定，置于錐形瓶中，加入正己烷50 ml，稱重。于85℃水浴中回流2 h，冷卻并補重，微孔濾膜過濾，進(jìn)樣。

1.2.3.2 提取溶劑的考察 取3份紫蘇葉藥材粉末（過二號篩）（批號：Y444-120801-2，以后均為同一批次）約2 g，精密稱定，分別加入石油醚、正己烷、無水乙醇各50 ml，稱重，于85℃水浴中回流2 h，冷卻并補重，微孔濾膜過濾，進(jìn)樣。

1.2.3.3 提取時間的考察 取3份紫蘇葉藥材粉末（過二號篩）約2 g，精密稱定，分別加入無水乙醇50 ml，稱重，于85℃水浴中分別提取1、2、3 h，冷卻并補重，微孔濾膜過濾，進(jìn)樣。

1.2.3.4 提取溫度的考察 取3份紫蘇葉藥材粉末（過二號篩）約2 g，精密稱定，分別加入無水乙醇50 ml，稱重，分別在85、90、95℃的水浴中加熱回流1 h，冷卻并補重，微孔濾膜過濾，進(jìn)樣。

1.2.3.5 溶劑用量的考察 取3份紫蘇葉藥材粉末（過二號篩）約2 g，精密稱定，分別加入無水乙醇40、50、60 ml，稱重，在85℃的水浴中加熱回流1 h，冷卻并補重，微孔濾膜過濾，進(jìn)樣。

1.2.4 含量測定方法的建立

1.2.4.1 供試品溶液的制備 取紫蘇葉藥材粉末（過二號篩）約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入無水乙醇40 ml，稱重，于85℃水浴中加熱回流1 h，冷卻并補重，微孔濾膜過濾，進(jìn)樣。

1.2.4.2 線性范圍 精密量取紫蘇醛對照品溶液0.15、0.25、0.4、0.8、1.2、1.5 ml于5 ml容量瓶中，用無水乙醇定容成6個不同濃度的對照品溶液，按本文色譜條件測定。

1.2.4.3 精密度試驗 取同一對照品溶液，按本文色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄紫蘇醛的峰面積。

1.2.4.4 重復(fù)性試驗 取紫蘇葉藥材粉末6份，按“1.2.4.1”項下操作，按本文色譜條件測定。

1.2.4.5 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液，分別于配制后0、2、4、6、23 h，按本文色譜條件測定。

1.2.4.6 回收率實驗 采用加樣回收法。取紫蘇葉粉末1 g，精密稱定，精密加入對照品溶液各1.3 ml（6.4212 mg/ml），共6份。精密加入無水乙醇40 ml，稱重，于85℃水浴中加熱回流提取1 h，冷卻并補重，微孔濾膜過濾，進(jìn)樣。

1.2.4.7 樣品的測定 購買承德市6家不同藥店的紫蘇葉藥材，按照“1.2.4.1”項下制備供試品溶液，分別進(jìn)樣測定其中紫蘇醛含量。

1.2.4.8 提取方法比較 用上述最佳提取方法和水蒸氣蒸餾法（2010年版中國藥典一部）提取揮發(fā)油，比較兩者中紫蘇醛的含量。

2 結(jié)果

2.1 提取條件的考察結(jié)果

2.1.1 提取方法的考察結(jié)果

超聲法提取20、30、40 min紫蘇醛含量分別為285.10 mg/100 g、320.60 mg/100 g、317.70 mg/100 g，索氏提取2 h紫蘇醛含量為360.60 mg/100 g，加熱回流提取2 h的紫蘇醛含量為389.30 mg/100 g，可見加熱回流法較優(yōu)。

2.1.2 提取溶劑的考察結(jié)果

無水乙醇、石油醚和正己烷的紫蘇醛含量分別為311.60 mg/100 g、242.05 mg/100 g、255.00 mg/100 g，可見無水乙醇的提取效率較高。

2.1.3 提取時間的考察結(jié)果

提取1、2、3 h的紫蘇醛含量分別為292.15 mg/100 g、290.05 mg/100 g、291.60 mg/100 g，三者差異忽略不計，可見提取1 h效率較高。

2.1.4 提取溫度的考察結(jié)果

提取溫度為85、90、95℃的紫蘇醛含量分別為275.00 mg/100 g、277.75 mg/100 g、276.00 mg/100 g，三者差異忽略不計，可見提取溫度為85℃的提取效率較高。

2.1.5 溶劑用量的考察結(jié)果

無水乙醇用量40、50、60 ml提取紫蘇醛的含量分別為188.30 mg/100 g、191.25 mg/100 g、184.05 mg/100 g，三者差異≤1.6%可忽略不計，可見40 ml的提取效率較高。

綜上所述，通過單因素循環(huán)法對提取方法、提取溶劑、提取時間及提取溫度、溶劑用量的考察，確定最佳提取工藝為加20倍的無水乙醇，于85℃水浴中加熱回流1 h。

2.2 含量測定方法的考察結(jié)果

2.2.1 線性考察結(jié)果

以濃度（mg/ml）為橫坐標(biāo)，對照品峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得到回歸方程：Y=0.7882X+0.0012，濃度在19.26～192.63 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9999，n=6）。

2.2.2 精密度考察結(jié)果

連續(xù)進(jìn)樣6次，紫蘇醛峰面積RSD=0.97%，表明儀器精密度良好。

2.2.3 重復(fù)性考察結(jié)果

紫蘇醛的平均含量為259.6 mg/100 g，RSD=1.3%，表明重復(fù)性良好。

2.2.4 穩(wěn)定性考察結(jié)果

紫蘇醛峰面積RSD=0.77%，結(jié)果表明供試品溶液在23 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.5 回收率考察結(jié)果

加樣回收率結(jié)果具體見表1。結(jié)果顯示，平均回收率為101.68%，RSD=1.97%。

2.2.7 提取方法比較結(jié)果

利用本研究最佳提取方法提取出的紫蘇醛含量為262.11 mg/100 g，水蒸氣蒸餾法提取的揮發(fā)油中紫蘇醛含量為297.46 mg/100 g，前者占后者的88.12%，表明該方法的提取效率很高。

3 討論

本研究采用加熱回流法提取紫蘇葉中的紫蘇醛，并用GC檢測其含量。有文獻(xiàn)報道，通過提取紫蘇葉中揮發(fā)油再測定其中紫蘇醛含量。在提取器中加石油醚，加熱時間為4 h，放冷吸取石油醚層，并用石油醚層洗滌提取器上壁3～4次，合并洗滌液，于25℃下減壓蒸干，殘渣加乙酸乙酯轉(zhuǎn)移至容量瓶[10]?，F(xiàn)行2010年版藥典揮發(fā)油的提取時間為2.5 h。另有超臨界CO2萃取揮發(fā)油[11]。本方法加20倍的無水乙醇，于85℃水浴中加熱回流1 h，提取時間更短，操作更簡便，耗材少，更經(jīng)濟。

通過對多家藥店的藥材檢測，發(fā)現(xiàn)其中的紫蘇醛含量各異，可能是藥材質(zhì)量不同，也可能是藥材存放不當(dāng)導(dǎo)致含量損失，有必要為市售紫蘇葉藥材建立一種質(zhì)量監(jiān)控手段。

紫蘇葉廣泛應(yīng)用在藥品、食品中，含有紫蘇葉精油的產(chǎn)品在市場中也層出不窮[12-13]。鑒于紫蘇葉中的多種生物學(xué)功效以及特殊的優(yōu)良性質(zhì)，以其為原料開發(fā)生產(chǎn)出來的產(chǎn)品深受消費者的青睞，具有廣闊的發(fā)展前景[14-16]。因此，對紫蘇葉中的紫蘇醛進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控很有必要。

本方法也可以為同類藥材的提取、含量測定提供借鑒。

紫蘇葉揮發(fā)油中的紫蘇醛含量高于本方法從藥材中提取的紫蘇醛含量，可能是藥材中的紫蘇醛未提取完全，不能體現(xiàn)出紫蘇醛在藥材植物中的確切含量；也可能因為紫蘇醛作為一種活性物質(zhì)，在提取過程中可能會出現(xiàn)轉(zhuǎn)化，從其他物質(zhì)轉(zhuǎn)化為紫蘇醛或者從紫蘇醛轉(zhuǎn)化成其他物質(zhì)，這其中的具體轉(zhuǎn)移過程還需進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：217-218.

[2] 伍永富，秦少容，劉世琪.紫蘇葉油的研究進(jìn)展[J].時珍國醫(yī)國藥，2007，18（8）：2019-2020.