周 元 蔣紅鋼 陸伯豪 陳治橫 陸 寧 李 進(jìn)

（嘉興市第一醫(yī)院，浙江嘉興 314000）

Ki67、CK19、Galectin－3和HBME－1在甲狀腺微小乳頭狀癌中的表達(dá)及臨床意義

周 元 蔣紅鋼 陸伯豪 陳治橫 陸 寧 李 進(jìn)

（嘉興市第一醫(yī)院，浙江嘉興 314000）

目的探討甲狀腺微小乳頭狀癌中Ki67、CK19、Galectin－3和HBME－1的表達(dá)及臨床意義。方法采用免疫組化法檢測80例甲狀腺微小乳頭狀癌及40例甲狀腺良性病變伴乳頭狀增生中Ki67、CK19、Galectin－3和HBME－1的表達(dá)情況。結(jié)果甲狀腺微小乳頭狀癌中Ki67、CK19、Galectin－3和HBME－1表達(dá)陽性率分別為42.5%、98.8%、95%、71.3%；甲狀腺良性病變伴乳頭狀增生中Ki67、CK19、Galectin－3和HBME－1表達(dá)陽性率分別為15%、37.5%、25%、15%。兩組間表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論Ki67、CK19、Galectin－3和HBME－1在甲狀腺微小乳頭狀癌中的表達(dá)顯著高于良性病變，是診斷甲狀腺微小乳頭狀癌的重要標(biāo)志物，其檢測可提高甲狀腺微小乳頭狀癌診斷的準(zhǔn)確性。

甲狀腺腫瘤；Ki67；CK19；Galectin－3；HBME－1

甲狀腺乳頭狀癌是最常見的甲狀腺惡性腫瘤，其中腫瘤長徑小于1cm的為甲狀腺微小乳頭狀癌。近年來甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)病率顯著上升，尤以微小乳頭狀癌上升明顯［1］。診斷甲狀腺乳頭狀癌一般情況下不難，但一些腫塊較小的甲狀腺良性病變伴乳頭狀增生時(shí)與乳頭狀癌，特別是微小乳頭狀癌鑒別困難，容易發(fā)生誤診或漏診。本文采用免疫組化方法檢測甲狀腺微小乳頭狀癌及甲狀腺良性病變伴乳頭狀增生中Ki67、CK19、Galectin－3和HBME－1的表達(dá)情況，以探討其在診斷中的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院2011年10月～2013年6月甲狀腺微小乳頭狀癌手術(shù)標(biāo)本共80例，其中男13例，女67例，年齡26～76歲，平均（47.6±11.9）歲，所有病例均行患側(cè)甲狀腺腺葉切除加Ⅵ區(qū)淋巴結(jié)清掃術(shù)。同時(shí)收集甲狀腺良性病變伴乳頭狀增生手術(shù)標(biāo)本40例用于對照，其中結(jié)節(jié)性甲狀腺腫21例，甲狀腺腺瘤10例，橋本氏甲狀腺炎9例，其中男8例，女32例，年齡19～78歲，平均（51.3± 11.8）歲。所有標(biāo)本均經(jīng)過組織病理學(xué)檢查確診，按WHO腫瘤分類中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，依據(jù)典型的甲狀腺微小乳頭狀癌病理診斷［2］：（1）不同程度的間質(zhì)纖維化，瘤體內(nèi)或瘤體旁間質(zhì)明顯纖維化；（2）突向?yàn)V泡腔及囊腔的乳頭狀突起，乳頭中心為纖維血管束，可見同心圓結(jié)構(gòu)的砂粒體；（3）腫瘤細(xì)胞核增大，輪廓不規(guī)則，出現(xiàn)毛玻璃核、核溝及核內(nèi)包涵體。

1.2 方法 標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林溶液固定，常規(guī)組織處理，石蠟包埋連續(xù)切片，HE染色，切片厚度4μm。采用免疫組化EnVision法，按試劑盒說明書進(jìn)行操作：石蠟切片脫蠟、水化后用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，每次3分鐘；滴加3%過氧化氫，室溫下放置10分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化氫酶活性；再用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，每次3分鐘；加入一抗，室溫下放置60分鐘，再用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，每次3分鐘；然后滴加檢測試劑，室溫下放置30分鐘；再用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，每次3分鐘；然后滴加二氨基聯(lián)苯胺，顯色10分鐘；最后蘇木精復(fù)染，常規(guī)脫水，透明，封固。用已知的陽性片作陽性對照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作陰性對照。結(jié)果判定：Ki67以細(xì)胞核呈現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，CK19、Galectin－3和HBME－1以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)和（或）細(xì)胞膜上出現(xiàn)棕黃色顆粒并且染色強(qiáng)度明顯高于背景的非特異性著色者為陽性。根據(jù)Beesley分級方法，按陽性細(xì)胞所占百分比并參考著色強(qiáng)度分級如下，無陽性細(xì)胞或淺黃色為陰性“－”；陽性細(xì)胞數(shù)＜25%，顆粒棕黃色，為弱陽性“＋”；≥25%且＜50%，顆粒棕黃色，為中度陽性“＋＋”；≥50%，顆粒深棕色，為強(qiáng)陽性“＋＋＋”。所有切片染色結(jié)果均采用雙人雙盲法進(jìn)行病理證實(shí)、組織分型及計(jì)數(shù)，兩人分值不同取平均值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行有關(guān)分析。

2 結(jié) 果

Ki67在甲狀腺微小乳頭狀癌和甲狀腺良性病變伴乳頭狀增生中陽性率分別為42.5%和15%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝9.075，P＝0.003）。CK19在甲狀腺微小乳頭狀癌和甲狀腺良性病變伴乳頭狀增生中陽性率分別為98.8%和37.5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝58.944，P＝0.000）。Galectin－3在甲狀腺微小乳頭狀癌和甲狀腺良性病變伴乳頭狀增生中陽性率分別為95%、25%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝64.350，P＝0.000）。HBME－1在甲狀腺微小乳頭狀癌和甲狀腺良性病變伴乳頭狀增生中陽性率分別為71.3%、15%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝33.835，P＝0.000）。見表1，見第457頁彩圖1～2。

表1 兩組Ki67、CK19、Galectin－3和HBME－1的表達(dá)情況比較

3 討 論

甲狀腺微小乳頭狀癌是乳頭狀癌的亞型，有年輕化的發(fā)展趨勢。男女發(fā)病比例報(bào)道不一，大多在1∶3左右，有的高達(dá)1∶9，本組男女之比約為1∶5，與多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道一致。好發(fā)年齡一般在40～50歲，本組平均年齡（47.6±11.9）歲。腫瘤體積一般較小，本組最小的腫瘤長徑僅0.1cm。因?yàn)轶w積小，容易漏診，通常是由于其他原因切除甲狀腺或尸檢中的偶然發(fā)現(xiàn)。這提示對于在看似良性甲狀腺病變的標(biāo)本，特別是年輕女性的標(biāo)本，取材中要仔細(xì)檢查，常規(guī)行書頁狀切開，多處取材，尤其應(yīng)注意鈣化結(jié)節(jié)，以免漏診。盡管甲狀腺微小乳頭狀癌可以出現(xiàn)乳頭狀癌的特征，如毛玻璃狀核、核內(nèi)假包涵體和核溝等，但具備這些特征的典型甲狀腺微小乳頭狀癌并不多見。而在一些甲狀腺良性病變伴乳頭狀增生病變中，雖然沒有上述乳頭狀癌的典型特征，但當(dāng)出現(xiàn)細(xì)胞核增大、淡染等不典型性改變，或乳頭狀結(jié)構(gòu)不明顯，細(xì)胞核呈空泡狀、出現(xiàn)核溝等情況下，就難與乳頭狀癌鑒別。因此需要一些輔助方法來進(jìn)一步明確診斷，免疫組化法對甲狀腺微小乳頭狀癌的鑒別診斷有很大幫助。作者采用免疫組化方法檢測Ki67、CK19、Galectin－3和HBME－1的表達(dá)情況，探討其對診斷的臨床價(jià)值。

Ki67即細(xì)胞核相關(guān)抗原，是一種與細(xì)胞增殖周期有關(guān)，參與DNA合成的蛋白質(zhì)。在細(xì)胞周期的G1開始出現(xiàn)，在S期和G2期逐漸升高，M期達(dá)到高峰，在細(xì)胞分裂晚期很快消失。在G0期中無表達(dá)，目前，Ki67已成為檢測腫瘤細(xì)胞增殖活性最可靠的指標(biāo)，其陽性表達(dá)者預(yù)示預(yù)后較差［3］。本文中Ki67在甲狀腺微小乳頭狀癌中的陽性率為42.5%，在甲狀腺良性病變中的陽性率為15%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與Aiad等［4］的結(jié)論基本一致。

CK19存在于各種上皮和正常上皮來源的腫瘤中，是一種低分子量的細(xì)胞角蛋白。研究表明［5］CK19在甲狀腺乳頭狀癌中呈陽性表達(dá)，正常甲狀腺不表達(dá)或局灶弱陽性表達(dá)，在良性乳頭狀增生性病變中部分病例有局部弱至中度陽性表達(dá)。Laco等［6］研究提示，22例甲狀腺微小乳頭狀癌中有13例CK19陽性，陽性率為59%。本文中CK19在甲狀腺微小乳頭狀癌中的陽性率為98.8%，在良性病變中的陽性率為37.5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因而，CK19是診斷甲狀腺微小乳頭狀癌的一個(gè)非常有用的標(biāo)志物。

Calectin－3是凝集素蛋白家族的一員，是一種與β－半乳糖苷具有高度親和力的糖類結(jié)合蛋白，具有抗凋亡的性質(zhì)。Galectin－3具有多種生物學(xué)特性，包括細(xì)胞生長調(diào)控、細(xì)胞黏附、炎性介質(zhì)反應(yīng)、細(xì)胞凋亡等。被認(rèn)為是區(qū)分甲狀腺良惡性腫瘤最有價(jià)值的分子標(biāo)志物之一。Calectin－3在甲狀腺乳頭狀癌中高度表達(dá)，而在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和腺瘤中不表達(dá)或較弱表達(dá)。Laco等［6］研究顯示，22例甲狀腺微小乳頭狀癌中19例Galectin－3陽性。本文結(jié)果顯示，80例甲狀腺微小乳頭狀癌中76例呈陽性表達(dá)。兩組研究結(jié)果基本一致。提示Galectin－3在鑒別甲狀腺良、惡性病變中具有較好的參考價(jià)值。

HBME－1是間皮細(xì)胞微絨毛表面特異性標(biāo)志物，是間皮瘤相關(guān)抗體，在腫瘤血管的形成、生長及轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮重要作用。早期學(xué)者發(fā)現(xiàn)它也在濾泡起源的甲狀腺癌中表達(dá)，尤其是甲狀腺乳頭狀癌。Paunovic等［7］發(fā)現(xiàn)HBME－1在乳頭狀癌中呈高表達(dá)，而在良性病變中為陰性或部分表達(dá)。本文中HBME－1在甲狀腺微小乳頭狀癌中的陽性率為71.3%，而在良性病變中為15%，在區(qū)別良惡性病變時(shí)有一定價(jià)值。

綜上所述，當(dāng)單憑形態(tài)學(xué)診斷甲狀腺微小乳頭狀癌有一定困難時(shí)，應(yīng)用Ki67、CK19、Galectin－3及HBME－1檢測對鑒別甲狀腺良惡性病變具有較高價(jià)值，可以在實(shí)踐中采用，提高甲狀腺微小乳頭狀癌診斷的正確性。

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