徐艷艷 丁培志 季麗杭 傅軍霞 楊君燕 何偉珍

甘露醇注射液中結(jié)晶經(jīng)加溫溶解后的質(zhì)量評價

徐艷艷 丁培志 季麗杭 傅軍霞 楊君燕 何偉珍

目的 加溫溶解甘露醇注射液中的結(jié)晶并對其進(jìn)行質(zhì)量評價。方法隨機(jī)抽取含甘露醇結(jié)晶的甘露醇注射液3批，分別將其置于熱水器的頂部，待結(jié)晶完全溶解后取下。通過酸度計測定3批供試品的pH值，顯微計數(shù)法檢查不溶性微粒，燈檢法檢查可見異物，高效液相色譜法（HPLC）測定甘露醇含量等檢查方法對供試品溶液進(jìn)行質(zhì)量評價。結(jié)果3批供試品的pH值分別5．70± 0．21、5．50±0．28和5．50±0．16，符合甘露醇注射液的pH值標(biāo)準(zhǔn)（pH4．5～6．5）。不溶性微粒檢查結(jié)果示供試品溶液的不溶性微粒數(shù)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)?？梢姰愇餀z查示3批供試品溶液中未發(fā)現(xiàn)有異物，僅其中3瓶帶微量白點，可見異物檢查符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。HPLC法測得3批供試品溶液中甘露醇相對于標(biāo)示量的百分含量分別為98．0%、97．9%和99．5%，甘露醇含量符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論加溫是溶解甘露醇結(jié)晶的有效方法，結(jié)晶溶解后的甘露醇注射液符合該藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

甘露醇注射液 甘露醇結(jié)晶 pH值 高效液相色譜法

甘露醇是良好的利尿劑，具有降低顱內(nèi)壓、眼內(nèi)壓、組織脫水等作用，也可用作片劑的賦形劑、固體或液體制劑的稀釋劑[1]，可以提高麻醉效率[2]。20%甘露醇注射液是臨床治療腦水腫、顱內(nèi)壓增高及高眼壓的首選藥物[3]。因為是過飽和溶液，在貯藏，運輸及低溫度環(huán)境下極易析出結(jié)晶，而應(yīng)用含結(jié)晶的甘露醇注射液具有引起靜脈炎或血栓的風(fēng)險[4]。加溫可溶解甘露醇注射液在存放過程中析出的結(jié)晶。目前臨床上常見的利用加溫溶解甘露醇結(jié)晶的方法有：高壓蒸氣鍋消毒時的蒸汽熱溶解甘露醇結(jié)晶、開水器持續(xù)散熱的熱量溶解甘露醇結(jié)晶、可調(diào)式溫控暖墊的熱量溶解甘露醇結(jié)晶[5-7]。此外，還有恒溫箱溶解甘露醇結(jié)晶、太陽能溶解甘露醇結(jié)晶、電磁爐溶解甘露醇結(jié)晶、微波溶解甘露醇結(jié)晶、熱水浴溶解甘露醇結(jié)晶等方法的報道[8]。

在甘露醇注射液市場供應(yīng)短缺而臨床上又確需使用的情況下，護(hù)理人員常采用加溫法溶解甘露醇結(jié)晶。為評價甘露醇結(jié)晶經(jīng)加溫溶解后的質(zhì)量，本文將通過pH值測定、可見異物檢查、不溶性微粒檢查、含量測定等方面對其進(jìn)行質(zhì)量評價，為臨床甘露醇注射液的使用提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實驗試劑 甘露醇注射液3批（批號：12110201、12120304、13012303，規(guī)格：250ml：甘露醇50g）由浙江康樂藥業(yè)股份有限公司提供；甘露醇對照品由中國藥品生物制品檢定所提供；水為重蒸餾水，其他試劑為分析純。

1.1.2 實驗器材 LC-10ATvp型高效液相色譜儀由日本島凈公司提供；強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂（鈣型）（Sugar Pak I 300×6.5mm）色譜柱由美國Waters公司提供；RI-320示差折光檢測器由大連依利特公司提供；KQ-100型超聲波清洗器由昆山市超聲儀器有限公司提供；AL204型電子天平由上海梅特勒-托利多儀器有限公司提供；SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵由河南省鞏義市英峪予華儀器廠提供；YB-Ⅱ型澄明度檢測儀由上海荊和分析儀器有限公司提供；PHS-25酸度計由上海精密科學(xué)儀器有限公司提供；YS100型尼康光學(xué)顯微鏡由南京江南永新光學(xué)有限公司提供；微孔濾膜由江蘇無錫市華潤凈化濾材廠提供；層流凈化臺由蘇州凈化設(shè)備廠提供。

1.2 甘露醇結(jié)晶加溫溶解方法 隨機(jī)抽取3批含有甘露醇結(jié)晶的甘露醇注射液（受試品），參考文獻(xiàn)方法[6]，將其置于熱水器的頂部，一次放置10瓶，待結(jié)晶完全溶解后（一般約3h）取下。析出甘露醇結(jié)晶的甘露醇注射液經(jīng)加溫復(fù)溶后的溶液，定義為供試品。加溫溶解前確認(rèn)受試品含甘露醇結(jié)晶，在有效期范圍內(nèi)，且瓶體無裂縫。

1.3 pH值測定 參照2010版藥典二部附錄ⅥH pH值測定法[9]，隨機(jī)抽取3批受試品，每批各3瓶，待甘露醇結(jié)晶溶解后放冷，使用經(jīng)標(biāo)定過的儀器測定每瓶供試品溶液的pH值。

1.4 不溶性微粒檢查 參照2010版藥典二部附錄ⅨC不溶性微粒檢查法第二法——顯微計數(shù)法[9]，取3批結(jié)晶復(fù)溶后的供試品，用水將容器外壁洗凈，在層流凈化臺上小心翻轉(zhuǎn)20次，使溶液混合均勻，立即小心開啟容器，移取供試品溶液25ml，沿濾器內(nèi)壁緩緩注入經(jīng)預(yù)處理的濾器（濾膜直徑25μm）中。靜置1min，緩緩抽濾至濾膜近干，再用微粒檢查用水25ml，沿濾器內(nèi)壁緩緩注入，洗滌并抽濾至濾膜近干，然后用平頭鑷子將濾膜移置平皿上，放大100倍進(jìn)行顯微測量，分別測定有效濾過面積上最長粒徑＞10μm和25μm的微粒數(shù)，每個樣品連續(xù)測試5次，取平均值。不溶性微粒數(shù)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：“標(biāo)示裝量為100ml或100ml以上的靜脈用注射液，除另有規(guī)定外，每1ml中含10μm以上（≥10μm）的微粒不得超過12粒，含25μm以上（≥25μm）的微粒不得超過2粒，判為符合規(guī)定”。

1.5 可見異物檢查 參照2010版藥典二部附錄ⅨH可見異物檢查法[9]，按注射劑可見異物檢查要求采用燈檢法檢查，取3批供試品，每批各3瓶，擦凈透明塑料容器外壁污痕，集中放置。采用日光燈，光照度為2 000～3 000lx，背景為不反光黑色，人眼距離供試品20～25cm，在避光室內(nèi)或在暗處進(jìn)行目檢，按直、橫、倒三步法旋轉(zhuǎn)檢視。判斷標(biāo)準(zhǔn)：除特殊規(guī)定品種外，未發(fā)現(xiàn)有異物或僅帶微量白點者作合格論。

1.6 含量測定 參照2010版藥典二部附錄V D高效液相色譜法（HPLC）測定含量[9]。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂（鈣型）（Sugar Pak I 300×6.5mm）為色譜柱，以LC-10ATvp型高效液相色譜儀，水為流動相，流速為0.5ml/min，柱溫：（85±1）℃；RI-320示差折光檢測器為檢測器，檢測溫度為55℃。另取甘露醇與山梨醇各0.5g，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，甘露醇與山梨醇色譜峰之間的分離度應(yīng)＞2。同時對測定方法進(jìn)行方法學(xué)考察（線性關(guān)系、精密度和回收率試驗）。（1）線性關(guān)系采用精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的甘露醇對照品適量，加水溶解并定量制成1ml中含5mg的溶液，分別精密量取相應(yīng)的量，注入液相色譜儀分析測定。（2）精密量取甘露醇對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次20μl，按上述色譜條件測定，記錄峰面積。（3）回收率試驗。取甘露醇對照品適量，分別配制含甘露醇為處方比例的80%、100%、120%3種不同濃度的溶液各3份（標(biāo)號A、B、C），照上述含量測定法，分別精密量取各20μl注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并計算回收率。

2 結(jié)果

2.1 pH值測定及不溶性微粒檢查結(jié)果 通過酸度計測得3批供試品溶液的pH值，顯微計數(shù)法測得3批供試品中不溶性微粒粒徑＞10μm和25μm的微粒數(shù)，結(jié)果見表1。

表1 3批甘露醇結(jié)晶復(fù)溶后的供試品pH值及不溶性微粒數(shù)

由表1可見，所有供試品溶液的pH值均符合甘露醇注射液的pH值標(biāo)準(zhǔn)（pH4.5～6.5）。3批供試品溶液的不溶性微粒數(shù)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 可見異物檢查結(jié)果 3批供試品溶液未發(fā)現(xiàn)有明顯異物，僅其中3瓶帶微量白點，結(jié)果表明甘露醇注射液結(jié)晶經(jīng)加溫復(fù)溶后的可見異物檢查是合格的。

2.3 含量測定 精密量取供試品溶液適量（約相當(dāng)于甘露醇5g），加水溶解并定量稀釋制成每1ml中含5mg的溶液，精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖（見圖1）；另取甘露醇對照品，同法測定，按外標(biāo)法以峰面積計算。

圖1 空白輔料（含EDTA鈣鈉）（A）、對照品（B）、供試品（C）HPLC色譜圖

2.3.1 線性關(guān)系測定 以甘露醇對照品的進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，峰面積值（Y）為縱坐標(biāo)，作圖，R2=0.9991，回歸方程：Y=81.022X+11.725（n=5），結(jié)果表明在0.25～5mg/ ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.2 精密度試驗 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD值）為0.55%，說明儀器的精密度良好。

2.3.3 回收率試驗 結(jié)果如表2。

表2 回收率試驗結(jié)果

2.3.4 重復(fù)性試驗 取供試品（批號：12110201）5瓶，照上述含量測定方法分別測定每瓶供試品的含量，測得甘露醇平均含量97.8%，RSD為0.76%。

2.3.5 樣品的甘露醇含量測定 取3批供試品及對照品溶液，照上述含量測定法分別測定甘露醇的含量，結(jié)果批號為12110201的供試品甘露醇含量為標(biāo)示量的98.0%，批號12120304供試品甘露醇含量為標(biāo)示量的97.9%，批號13012303供試品甘露醇含量為標(biāo)示量的99.5%，對照品中甘露醇含量為98.5%。

3 討論

20%甘露醇高滲溶液是臨床上用于利尿、腦水腫、顱內(nèi)高壓和青光眼治療的輸液制劑[10]。因為是過飽和溶液，在貯藏、運輸過程中極易析出結(jié)晶，常給臨床應(yīng)用帶來許多困難。據(jù)不完全統(tǒng)計，三級醫(yī)院的藥房1年會積存幾百瓶有結(jié)晶的甘露醇。根據(jù)甘露醇的熔點高、性質(zhì)穩(wěn)定的特點，護(hù)理人員在甘露醇注射液緊缺，而臨床上又急需使用時，常采用加溫方法使甘露醇結(jié)晶復(fù)溶后再用。至目前為止，各式的加溫溶解方法已報道許多，但通過加溫方法使甘露醇結(jié)晶復(fù)溶后的注射液質(zhì)量評價卻未見報道。本文通過對3批供試品的pH值測定、可見異物檢查、不溶性微粒檢查、含量測定等檢測指標(biāo)對甘露醇結(jié)晶經(jīng)加溫復(fù)溶后的注射液質(zhì)量進(jìn)行初步評價，結(jié)果表明結(jié)晶復(fù)溶后的甘露醇注射液符合該藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。3批供試品的pH值符合甘露醇注射液的pH值標(biāo)準(zhǔn)（pH4.5～6.5）?？梢姰愇餀z查結(jié)果示3批供試品溶液中未發(fā)現(xiàn)有異物，僅其中3瓶帶微量白點，甘露醇注射液的可見異物檢查符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。3批供試品溶液的不溶性微粒數(shù)檢查結(jié)果符合“標(biāo)示裝量為100ml或100ml以上的靜脈用注射液，每1ml中含10μm以上（≥10μm）的微粒不得超過12粒，含25μm以上（≥25μm）的微粒不得超過2粒”的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

采用HPLC法進(jìn)行甘露醇含量測定，用強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂（鈣型）（Sugar Pak I 300×6.5mm）為色譜柱，根據(jù)強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂（鈣型）的使用要求，在蒸餾水中加少量EDTA鈣鈉（一般濃度為50mg/L）以避免樹脂中鈣離子的流失。由圖1可知，各圖中的負(fù)峰應(yīng)為EDTA鈣鈉的峰。同時，在應(yīng)用HPLC法進(jìn)行甘露醇含量測定時，因為柱溫、池溫的溫差大[柱溫（85±1）℃，檢測池溫度40℃]直接影響樣品的分析，所以系統(tǒng)安裝時，需要盡可能地將柱、檢測池間的連線放置在柱箱內(nèi)，避免連續(xù)流出的樣品經(jīng)過檢測池時因溫差大影響分析結(jié)果。本次實驗建立的HPLC方法用于甘露醇溶液的含量測定具有操作簡便、線性關(guān)系良好、重現(xiàn)性好、精密度高、回收率高等優(yōu)點，含量測定結(jié)果顯示3批供試品的甘露醇含量均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

綜上所述，通過隨機(jī)抽取3批含結(jié)晶的甘露醇注射液經(jīng)加溫溶解后進(jìn)行初步的質(zhì)量評價，結(jié)果表明加溫溶解后的甘露醇注射液符合該藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，通過加溫溶解甘露醇結(jié)晶的方法是有效的。但若是結(jié)晶經(jīng)加溫溶解結(jié)果不理想的，即可見異物檢查結(jié)果不佳或是肉眼可見懸浮物、不溶性微粒的應(yīng)避免使用。同時在甘露醇注射液臨床供應(yīng)緊缺，需應(yīng)用加熱方法溶解甘露醇結(jié)晶時，建議一次性處理3瓶以上有結(jié)晶的甘露醇注射液，以免藥品質(zhì)量問題貽誤臨床治療。

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Quality evaluation of mannitol injection after crystallization dissolved by heating

ObjectiveTo evaluate the quality of mannitol injection after the crystallization was dissolved by heating．MethodsThree batches of crystallized mannitol injection were selected randomly．The samples of selected batches were heated on the top of the water heater to completely dissolve the crystal．pH value was measured by acidity meter,insoluble particles were check by microscopic counting method,visible foreign matters were check by lamp test,and content of mannitol was determination by high performance liquid chromatography(HPLC)．ResultsThe pH value of three batches was 5．70±0．21,5．50±0．28 and 5．50±0．16,respectively,which met the pH standard of mannitol injection(4．5～6．5)．Insoluble particles met quality standards by examination．Visible foreign matter was not found in 3 batches of test samples,and there was only little white dots in 3 bottles．The amount of mannitol measured by HPLC was 98．0%was 97．9%and 99．5%of the labeled value in 3 batches test samples，respectively,which met the quality standards of mannitol injection．ConclusionHeating is the effective method to dissolve the mannitol crystallization．The mannitol injection after crystallization dissolved by heating can meet the drug quality standard．

Mannitol Injection Mannitol crystalpH value High performance liquid chromatography

2013-06-06）

（本文編輯：楊麗）

浙江省醫(yī)學(xué)會臨床科研基金項目（2012ZYC-A109）

323000 麗水市中心醫(yī)院藥學(xué)部

何偉珍，E-mail：lsheweizhen@126.com