袁曉雷 田華 朱旭明 黃斌 孫麗君 張偉軍 王震宇 李鋒 陳力

CD97-CD55蛋白復(fù)合體在乳腺惡性腫瘤組織中的表達(dá)及臨床意義

袁曉雷 田華 朱旭明 黃斌 孫麗君 張偉軍 王震宇 李鋒 陳力

目的 探討CD97-CD55蛋白復(fù)合體在乳腺惡性腫瘤組織中的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系和評(píng)判預(yù)后的價(jià)值。 方法 收集212例乳腺惡性腫瘤及358例乳腺良性腫瘤組織石蠟標(biāo)本制備組織芯片，采用免疫組化SP法檢測CD97抗原表位CD97EGF、CD97Stalk和CD55的表達(dá)，結(jié)合臨床資料分析其與臨床病理因素聯(lián)系。設(shè)計(jì)CD97和CD55寡核苷酸探針，應(yīng)用顯色原位雜交技術(shù)檢測CD97mRNA和CD55mRNA在乳腺良、惡性腫瘤組織中的表達(dá)。采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析影響乳腺惡性腫瘤預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)因素，Kaplan-Meier曲線法進(jìn)行生存分析。 結(jié)果 CD97EGF和CD97Stalk在乳腺惡性腫瘤組織中表達(dá)率分別為53．3%（113/212）和65．1%（138/212）。CD55在乳腺良、惡性腫瘤組織中均有表達(dá)。顯色原位雜交顯示CD97mRNA和CD55mRNA在乳腺良、惡性腫瘤組織中染色強(qiáng)度差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0．01）。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析顯示腫瘤大小、陽性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目、TNM分期、CD97EGF陽性表達(dá)是影響乳腺惡性腫瘤預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。 結(jié)論 乳腺惡性腫瘤組織可檢測到CD97-CD55蛋白復(fù)合體表達(dá)，CD97Stalk和CD97EGF兩個(gè)不同抗原表位可能在CD97參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展機(jī)制中存在著一定的差異。乳腺惡性腫瘤組織CD97EGF陽性表達(dá)可作為預(yù)后判斷指標(biāo)之一。

腫瘤 乳腺 CD97 CD55 蛋白復(fù)合體 組織芯片 免疫組織化學(xué) 顯色原位雜交

CD97是血管內(nèi)皮生長因子7次跨膜蛋白（epidermal growth factor-seven-span-transmembrane，EGF-TM7）家族Ⅱ類受體成員之一，分子量約75～90kDa。EGFTM7受體包括一個(gè)信號(hào)肽，N-末端不同數(shù)目的EGF作用功能域，一段具有保守切割位點(diǎn)的莖桿樣結(jié)構(gòu)，7次跨膜形成黏液素樣莖環(huán)結(jié)構(gòu)和C端一個(gè)短小的胞內(nèi)段，目前已證實(shí)在胃腸道及甲狀腺等多種上皮性腫瘤中有所表達(dá)[1]。CD55屬于膜結(jié)合型補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白（membrane-bound complement regulatory proteins，mCRPs），CD97可與細(xì)胞間分布較為廣泛的CD55相互作用形成蛋白復(fù)合體發(fā)揮作用[2]。由于N-末端糖基化作用，CD97可形成CD97EGF和CD97Stalk等不同抗原表位，兩者的表達(dá)特點(diǎn)和分布范圍在腫瘤組織和細(xì)胞中具有一定的差異性[3]。本研究應(yīng)用組織芯片技術(shù)對(duì)CD97EGF、CD97Stalk和CD55在乳腺惡性腫瘤組織中的表達(dá)進(jìn)行檢測，結(jié)合臨床病理資料，探討其在乳腺惡性腫瘤患者預(yù)后判斷中的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 收集2007-08—2010-08杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院收治的乳腺惡性腫瘤患者212例，其中男1例，女211例，年齡31～81（50.3±4.2）歲。術(shù)前患者均未行新輔助化療及局部放射治療。絕經(jīng)前151例，絕經(jīng)后60例，其中單側(cè)單發(fā)207例，單側(cè)多發(fā)2例，雙側(cè)3例；腫瘤位于右側(cè)102例，左側(cè)107例，雙側(cè)3例；腫瘤直徑＜1.0cm 15例，1.0～2.0cm 74例，2.0～5.0cm 111例，＞5.0cm 12例。根據(jù)2001年中國乳腺腫瘤病理分類[4]，非浸潤性癌16例，包括小葉原位癌2例，導(dǎo)管內(nèi)癌11例，派杰病1例，導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀瘤局部癌變2例；浸潤性非特殊癌180例，包括浸潤性癌23例，浸潤性導(dǎo)管癌152例，浸潤性小葉癌5例；浸潤性特殊癌13例，包括黏液腺癌8例，髓樣癌3例，鱗癌2例。乳腺間葉組織來源惡性腫瘤3例，包括葉狀肉瘤1例，低度纖維母細(xì)胞肉瘤2例。TNM分期0期16例，Ⅰ期15例，Ⅱ期106例，Ⅲ期59例，Ⅳ期16例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移182例，共398枚，平均淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目1.87枚/例。收集同期乳腺良性腫瘤358例，均為乳腺單發(fā)病灶，其中男3例，女355例，年齡17～75（38.5±2.7）歲。病灶直徑＜1.0cm 72例，1.0～2.0cm 177例，2.0～5.0cm 99例，＞5.0cm 10例。病理類型包括乳腺纖維瘤206例，導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀瘤12例，單發(fā)乳腺囊性增生癥41例，乳腺增生癥伴瘤樣增生65例，乳腺積乳囊腫10例，乳腺導(dǎo)管擴(kuò)張癥伴囊腫形成15例，乳腺脂肪瘤7例（其中男性3例），乳腺良性分葉狀腫瘤2例。

1.2 主要試劑和儀器 Anti-CD97EGF單克隆抗體（VIM-3b）及Anti-CD97Stalk單克隆抗體（MEM-180）均購自美國BD PharMingen公司，Anti-CD55鼠單克隆抗體（BRIC 216）購自美國Abcam生物公司，顯色原位雜交試劑盒購自德國Zytovision公司，組織芯片制備儀購自北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司，CD97、CD55探針由武漢Stargene公司依據(jù)CD97蛋白基因序列（Gene Bank NM_001025160）及CD55蛋白基因序列（Gene Bank NM_001114752）應(yīng)用TaqMan技術(shù)進(jìn)行設(shè)計(jì)合成制備。

1.3 乳腺良、惡性腫瘤組織石蠟標(biāo)本組織芯片制備采用低密度組織芯片共上樣45個(gè)點(diǎn)（橫軸9個(gè)點(diǎn)×縱軸5個(gè)點(diǎn)），分別制作乳腺良、惡性腫瘤組織芯片進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。制備石蠟標(biāo)本固定保存，編號(hào)備案。組織芯片儀進(jìn)行打孔，柱狀石蠟組織條取樣置入受體蠟塊孔。制作完成的組織芯片蠟塊置于37℃烤箱中15min，-20℃冰箱低溫保存2h，修塊、切片，撈片后65℃烘烤10min，與載玻片緊密粘連后進(jìn)行HE、免疫組織化學(xué)染色及顯色原位雜交實(shí)驗(yàn)。

1.4 CD97EGF、CD97Stalk及CD55在乳腺良、惡性腫瘤組織中的表達(dá) 采用SP法進(jìn)行組織芯片免疫組織化學(xué)染色，乳腺良、惡性腫瘤組織芯片實(shí)驗(yàn)應(yīng)用抗體滴度分別為：anti-CD97Stalk1∶400、anti-CD97EGF1∶400、anti-CD55 1∶200。主要實(shí)驗(yàn)步驟：組織芯片切片，常規(guī)脫蠟水化，微波修復(fù)抗原15min，3%雙氧水滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性30min，滴加正常血清孵育，依次加入上述目標(biāo)抗體4℃過夜，生物素標(biāo)記37℃30min，辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素30min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，脫水封片。染色結(jié)果采用半定量計(jì)數(shù)方法[5]，由2位高級(jí)職稱病理醫(yī)師在光鏡下進(jìn)行結(jié)果判定，計(jì)數(shù)方法：IRS=SI×PP（SI為陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度，PP為陽性細(xì)胞百分率），SI分為4個(gè)等級(jí)：0為陰性，1為弱陽性，2為中度陽性，3為強(qiáng)陽性；PP＜10%為1,10%～50%為2,51%～80%為3，＞80%為4。IRS乘積最高值為12，≤3分為陰性，＞3分即為陽性，4～8分為中度陽性，＞8分為強(qiáng)陽性；以中度陽性和強(qiáng)度陽性計(jì)算陽性率。

1.5 CD97mRNA和CD55mRNA在乳腺良、惡性腫瘤組織中的表達(dá) 采用顯色原位雜交檢測。依據(jù)Gene BankCD97及CD55基因序列信息選擇目標(biāo)序列應(yīng)用Taqman技術(shù)合成CD97及CD55的寡核苷酸探針引物。CD97引物探針序列：GTCTGGCTGA/421/CTCTGCCGGGAGCTGAAACCAGGACTCCAGGGGCTGTGCCCGGTGGTGCCCTCAGAACT/482/CCTCGTGTGTGTCAATGCCA-CCGCCTGTCGCT GCAATCCAGG GTTCAGCTCT TTTTCTGAGA；CD55引物探針序列：CD55上游引物：GTGCCGTCCAGGTTACAGAA；CD55下游引物：TCTCCCGGATTAGGGCATGA。引物合成后經(jīng)檢測合格后予以應(yīng)用。CISH法檢測CD97及CD55基因擴(kuò)增參照顯色原位雜交試劑盒說明書略加改進(jìn)后進(jìn)行。主要實(shí)驗(yàn)步驟：脫蠟，蛋白酶37℃孵育消化10min，乙醇逐級(jí)脫水，適量體積的雜交緩沖液42℃預(yù)熱雜交30min，68℃新鮮變性10min，含有地高辛標(biāo)記探針雜交液42℃濕盒過夜，洗滌65℃預(yù)熱10min，加地高辛抗體雜交后洗滌3min，100μl封阻液孵育30min，檢測緩沖液平衡5min，加入底物顯色液15～30min（100μl/張切片），顯微鏡下掌握染色程度用無菌雙蒸水終止染色。染色強(qiáng)度（顆粒數(shù)）檢測結(jié)果參照乳腺癌HER2基因檢測指南進(jìn)行染色結(jié)果判斷[6]。

1.6 惡性腫瘤的隨訪 采用電話及門診復(fù)查方式進(jìn)行隨訪，隨訪時(shí)間24～60個(gè)月，平均38.3個(gè)月；212例患者中失訪9例，隨訪率為95.75%。術(shù)后2年內(nèi)每3個(gè)月檢查1次，以后每半年檢查1次，檢查內(nèi)容包括健側(cè)乳房、胸部CT、肝臟B超及頭顱CT等，自手術(shù)始至首次復(fù)發(fā)間隔為無病生存時(shí)間（disease-free survival，DFS），隨訪DFS并作為預(yù)后判斷指標(biāo)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料的比較及分析采用χ2檢驗(yàn)；乳腺惡性腫瘤中CD97和CD55陽性表達(dá)的關(guān)系采用Spearman相關(guān)性分析；乳腺良、惡性腫瘤組織中CD97和CD55表達(dá)強(qiáng)度的比較采用t檢驗(yàn)。采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析影響預(yù)后的風(fēng)險(xiǎn)因素，Kaplan-Meier曲線法進(jìn)行無病復(fù)發(fā)生存分析，log-rank檢驗(yàn)比較CD97Stalk、CD97EGF兩組累積生存率。

2 結(jié)果

2.1 CD97和CD55在乳腺良、惡性腫瘤組織中的表達(dá)CD97Stalk陽性染色呈棕黃色染色顆粒表達(dá)于乳腺惡性腫瘤細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜，且分布呈一定的極性改變，多位于靠近腫瘤纖維基質(zhì)（圖1，見插頁），在乳腺惡性腫瘤組織中的陽性率為65.1%（138/212），在乳腺良性腫瘤組織中陽性率為25.9%(93/358)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。CD97EGF陽性染色呈棕黃色染色顆粒表達(dá)于乳腺惡性腫瘤細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜（圖2，見插頁），在乳腺惡性腫瘤組織中陽性率為53.3%（113/212），在乳腺良性腫瘤組織中陽性率為12.0%（43/358），兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。CD55在良、惡性腫瘤組織中均有表達(dá)，呈棕黃色染色于癌細(xì)胞質(zhì)，圍繞腺管上皮細(xì)胞周圍，部分腺管管腔內(nèi)著色（圖3，見插頁），在乳腺惡性腫瘤組織組中陽性率為65.1%（138/212），在乳腺良性腫瘤組織中陽性率為87.9%（315/358），兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 CD97mRNA和CD55mRNA在乳腺良、惡性腫瘤組織中的表達(dá) CD55mRNA原位雜交顯色多分布于腫瘤細(xì)胞質(zhì)和基質(zhì)中，在乳腺惡性腫瘤組織細(xì)胞中可見較多擴(kuò)增表達(dá)，蘇木精染色胞核呈深紫染色（圖4，見插頁）。乳腺良、惡性腫瘤組織均有不同程度的CD97mRNA原位雜交顯色信號(hào)，良性組織中分布于細(xì)胞質(zhì)，蘇木精染色胞核呈淡紫染色（圖5，見插頁），惡性組織中分布于腫瘤細(xì)胞質(zhì)，蘇木精染色胞核呈深紫染色，多發(fā)生在成簇腫瘤細(xì)胞，可見較多擴(kuò)增表達(dá)（圖6，見插頁）。顯色原位雜交信號(hào)強(qiáng)度（顆粒數(shù)）比較結(jié)果顯示，CD97mRNA在乳腺良性腫瘤組織中為2.45±0.30，惡性腫瘤組織中為3.75±0.15，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.476，P＜0.01）；CD55mRNA在乳腺良性腫瘤組織中為2.60±0.75，惡性腫瘤組織中為3.10±0.80，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.973，P＞0.05）。

2.3 乳腺惡性腫瘤組織CD97和CD55陽性表達(dá)的相關(guān)性分析 CD97EGF和CD55兩者在乳腺惡性腫瘤組織表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.318，P＜0.05），CD97Stalk和CD55兩者在乳腺惡性腫瘤組織中表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.305，P＜0.05）。

2.4 CD97、CD55表達(dá)與乳腺惡性腫瘤臨床病理特征比較 乳腺惡性腫瘤組織中CD97EGF、CD97Stalk以及CD55的表達(dá)和臨床病理特征單因素分析結(jié)果詳見表1。結(jié)果顯示：（1）CD97EGF在乳腺惡性腫瘤組織中的表達(dá)與腫瘤大小、病理類型、病理分期、組織學(xué)分級(jí)等各因素的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；（2）CD97Stalk在乳腺惡性腫瘤組織中的表達(dá)與病理類型、病理分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)等各因素的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或0.01）；（3）CD55在乳腺惡性腫瘤組織中的表達(dá)與病理類型、組織學(xué)分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。根據(jù)結(jié)合乳腺惡性腫瘤改良根治術(shù)后隨訪患者生存資料進(jìn)行的Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果，進(jìn)一步提示腫瘤大?。℉R=1.206，P＜0.05）、陽性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目（HR=1.332，P＜0.05）、TNM分期（HR=2.015，P＜0.05）、CD97EGF陽性表達(dá)（HR=10.481，P＜0.05）是影響乳腺癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因子，詳見表2。

2.5 CD97EGF陽性表達(dá)與乳腺惡性腫瘤患者預(yù)后關(guān)系CD97EGF陰性組60個(gè)月隨訪時(shí)間段內(nèi)的總體無病生存率為86.86%（86/99），CD97EGF陽性組為62.8%（71/113），結(jié)合隨訪無病生存資料應(yīng)用Kaplan-Meier法進(jìn)行分析比較顯示，CD97EGF陰性組無病生存率優(yōu)于陽性組，log-rank檢驗(yàn)結(jié)果顯示有明顯差異（P＜0.05），隨著CD97EGF表達(dá)的增強(qiáng)，總體生存曲線有下降的趨勢（圖7），CD97Stalk表達(dá)組間無病生存率比較差異性不明顯。

表1 乳腺惡性腫瘤組織CD97Stalk、CD97EGF表達(dá)和臨床病理特征比較（例）

表2 乳腺惡性腫瘤患者多元回歸Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型預(yù)后分析

圖7 乳腺惡性腫瘤組織CD97EGF表達(dá)生存分析曲線

3 討論

1997年德國哈勒大學(xué)Hoang-Vu等[7-8]研究證實(shí)甲狀腺惡性腫瘤組織中CD97的表達(dá)強(qiáng)弱與腫瘤細(xì)胞的侵襲性和淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)移程度有關(guān)，是甲狀腺癌去分化程度的腫瘤標(biāo)記物，從此開啟了CD97在上皮性惡性腫瘤中研究。在大腸癌研究中發(fā)現(xiàn)，大腸惡性腫瘤邊緣組織癌細(xì)胞CD97陽性表達(dá)水平強(qiáng)弱與腫瘤細(xì)胞淋巴管浸潤和臨床腫瘤分期呈顯著正相關(guān)[9]；在食管癌、胰腺癌、口腔黏膜鱗狀上皮癌等上皮組織來源的惡性腫瘤中如CD97表達(dá)水平與腫瘤患者的臨床病理學(xué)特征之間存在相關(guān)性[10-11]，證實(shí)CD97陽性表達(dá)與惡性腫瘤的分化、浸潤、轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)，是腫瘤治療和預(yù)后的重要靶分子。在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)研究結(jié)果顯示，CD55廣泛分布于胃腸道上皮來源惡性腫瘤，在腺管管腔上皮細(xì)胞中呈極性化分布，在腫瘤基質(zhì)和周圍正常結(jié)締組織中過表達(dá)，提示CD55在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中具有細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)作用，并參與腫瘤微環(huán)境的形成。CD55通過影響C3/C5轉(zhuǎn)換酶的形成，抑制同源補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)和下游效應(yīng)子的激活，可非特異性抑制自然殺傷細(xì)胞的作用使腫瘤細(xì)胞逃避人體自身免疫系統(tǒng)的免疫攻擊[12]。CD97和CD55以受體-配體的形式相互作用參與甲狀腺、胃腸道、前列腺等多種上皮性來源惡性腫瘤細(xì)胞在腫瘤的分化、遷移、浸潤以及轉(zhuǎn)移機(jī)制中扮演了重要角色[3，10]。由于N-末端糖基化作用等因素影響，CD97形成CD97EGF和CD97Stalk等兩類不同免疫表位，對(duì)首個(gè)EGF區(qū)域結(jié)合的CD97EGF單克隆抗體染色比莖環(huán)區(qū)域結(jié)合的CD97Stalk單克隆抗體具有更嚴(yán)格的限制性，兩者的表達(dá)特點(diǎn)和分布范圍具有差異性。

上皮生長因子EGF受體在多種實(shí)體腫瘤細(xì)胞中表達(dá)異?；虺矢弑磉_(dá)，與腫瘤血管生成、腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及抑制凋亡等機(jī)制相關(guān)，EGF受體與配體相互作用促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的異常增殖，提示預(yù)后不良[13]。本研究結(jié)果顯示，CD97EGF和CD97Stalk均呈棕黃色染色陽性表達(dá)于乳腺惡性腫瘤細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，CD97Stalk染色陽性細(xì)胞分布呈一定的極性改變，多分布于靠近腫瘤纖維基質(zhì)；CD55陽性表達(dá)于癌細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色染色，圍繞腺管上皮細(xì)胞周圍分布。原位雜交顯色實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CD97mRNA分布于腫瘤細(xì)胞質(zhì)，多發(fā)生在成簇腫瘤細(xì)胞，在乳腺惡性腫瘤組織細(xì)胞中可見較多擴(kuò)增表達(dá)，HE染色胞核呈深紫染色，顯色原位雜交信號(hào)強(qiáng)度（顆粒數(shù)）比較結(jié)果顯示在乳腺良、惡性腫瘤組織存在擴(kuò)增表達(dá)，與乳腺良性腫瘤組織中的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。結(jié)合乳腺惡性腫瘤改良根治術(shù)后患者隨訪無病生存時(shí)間資料進(jìn)行的Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析，結(jié)果表明腫瘤大小、陽性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目、TNM分期、CD97EGF陽性表達(dá)是影響乳腺癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。Kaplan-Meier曲線法生存分析顯示CD97EGF表達(dá)陽性在乳腺癌患者中無病生存預(yù)后相對(duì)較差。

研究顯示，CD97EGF在胃癌腫瘤組織、癌旁組織及正常胃黏膜組織中的表達(dá)特點(diǎn)和文獻(xiàn)報(bào)道的CD97Stalk在大腸腫瘤中表達(dá)特點(diǎn)有顯著不同，CD97EGF在癌旁組織和正常組織的表達(dá)水平可作為判定胃癌組織潛在分子切緣，而CD97Stalk強(qiáng)陽性染色于腫瘤浸潤前沿散在分布的單個(gè)瘤細(xì)胞和小的腫瘤細(xì)胞群[11，14]。本研究采用制備乳腺良、惡性腫瘤組織芯片作為實(shí)驗(yàn)平臺(tái)對(duì)CD97-CD55蛋白復(fù)合體在乳腺惡性腫瘤組織中的表達(dá)進(jìn)行測定，選擇CD97EGF和CD97Stalk兩類不同免疫表位單克隆抗體進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)，在乳腺惡性腫瘤組織中均可檢測到CD97EGF、CD97Stalk和CD55的表達(dá)，CD97和CD55在乳腺惡性腫瘤組織中的表達(dá)存在明顯的相關(guān)性，研究結(jié)果進(jìn)一步擴(kuò)充了CD97在上皮來源惡性腫瘤中的表達(dá)譜，提示以配體和受體相互作用形式存在的CD97-CD55蛋白復(fù)合體在惡性腫瘤組織中的表達(dá)具有一定的普遍性。CD97Stalk和CD97EGF免疫組織化學(xué)染色分布特點(diǎn)提示兩個(gè)CD97不同免疫表位參與乳腺惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展機(jī)制中可能存在差異。CD55屬于膜結(jié)合型補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白，可保護(hù)宿主細(xì)胞免遭補(bǔ)體的攻擊，CD55通過影響C3/C5轉(zhuǎn)換酶的形成，加速C3/ C5轉(zhuǎn)換酶的消亡，可非特異性抑制自然殺傷細(xì)胞的作用而腫瘤細(xì)胞逃避人體的自身免疫系統(tǒng)的免疫攻擊[15]。CD97和CD55相互作用可進(jìn)一步避免惡性腫瘤細(xì)胞被自然殺傷細(xì)胞的攻擊，在惡性腫瘤的微環(huán)境條件下為逃避補(bǔ)體對(duì)乳腺惡性腫瘤免疫摧毀和為潛在轉(zhuǎn)移擴(kuò)散創(chuàng)造一定的條件[2，16-17]，進(jìn)一步的潛在機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

[1]Safaee M,Clark A J,Ivan M E,et al．CD97 is a multifunctional leukocyte receptor with distinct roles in human cancers(Review)[J]．Int J Oncol,2013,43(5)：1343-1350．

[2]Abbott R J M,Spendlove I,Roversi P,et al．Structural and Functional Characterization of a Novel T Cell Receptor Co-regulatory Protein Complex,CD97-CD55[J]．The Journal of Biological Chemistry,2007,282(30)：22023-22032．

[3]WobusM,Vogel B,Schmücking E,et al．N-Glycosylation of CD97 within the EGF domains is crucial for epitope accessibility in normal and malignant cells as well as CD55 ligand binding[J]．Int J Cancer,2004,112：815-822．

[4]李樹玲．乳腺腫瘤學(xué)[M]．2版．北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社,2007：131．

[5]Chen Wu,Xiaodan Guo,Weina Wang,et al．N-Acetylgalactosaminyltransferase-14 as a potential biomarker for breast cancer by immunohistochemistry[J]．BMCCancer,2010,10：123．

[6]Hanna W M,Rüschoff J,Bilous M,et al．HER2 in situ hybridization in breast cancer：clinical implications of polysomy 17 and genetic heterogeneity[J]．Mod Pathol,2014,27(1)：4-18．

[7]Hoang-Vu C,BullK,Schwarz I,et al．Regulation of CD97 Protein in Thyroid Carcinoma[J]．The Journal of Clinical Endocrinology& Metabolism,1999,84(3)：1104-1109．

[8] Aust G,Eichler W,Hoang-Vu C,et al．CD97：a dedifferentiation marker in human thyroid carcinomas[J]．Cancer Res,1997,57(9)：1798-1806．

[9]Steinert M,Wobus M,Boltze C,et al．Expression and regulation of CD97 in colorectal carcinoma cell lines and tumor tissues[J]．Am J Pathol,2002,161(5)：1657-1667．

[10]Aust G,Steinert M,Schlitz A,et al．CD97,but not its closely related EGF-TM7 family member EMR2,is expressed on gastric,pancreatic,and esophageal carcinomas[J]．Am J Clin Pathol,2002, 118(1)：699-707．

[11]Mustafa T,Eckert A,Klonisch T,et al．Expression of the Epidermal Growth Factor Seven-Transmembrane Member CD97 Correlates with Grading and Staging in Human Oral Squamous Cell Carcinomas[J]．Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2005,14(1)：108-119．

[12]Yan J,Allendorf D J,Li B,et al．The role of membrane complement regulatory proteins in cancer immunotherapy[J]．Adv Exp Med Biol,2008,632：159-174．

[13]Kho D H,Zhang T,Balan V,et al．Autocrine motility factor modulates EGF-mediated invasion signaling[J]．Cancer Res,2014,74 (8)：2229-2237．

[14]Liu Y,Chen L,Peng shu-you,et al．Role of CD97Stalkand CD55 as molecular markerfor prognosis and therapyof gastric carcinoma patients[J]．Journal of Zhejiang university SCIENCE B,2005, 6B(9)：913-918．

[15]Liu D,Trojanowicz B,Ye L,et al．The Invasion and Metastasis Promotion Role of CD97 SmallIsoformin Gastric Carcinoma[J]．PLoSONE,2012,7(6)：e39989．

[16]Li L,Spendlove I,Morgan J,et al．CD55 is over-expressed in the tumourenvironment[J]．BritishJournalofCancer,2001,84(1)：80-86．

[17]Park S J,Lee K P,Kang S,et al．Lysophosphatidylethanolamine utilizes LPA(1)and CD97 in MDA-MB-231 breast cancer cells [J]．Cell Signal,2013,25(11)：2147-2154．

（本文編輯：嚴(yán)瑋雯）

《浙江醫(yī)學(xué)》對(duì)計(jì)量單位的要求

本刊執(zhí)行GB 3100～3102-1993《量和單位》中有關(guān)量、單位和符號(hào)的規(guī)定及其書寫規(guī)則，具體執(zhí)行可參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)雜志社編寫的《法定計(jì)量單位在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用》。注意單位名稱與單位符號(hào)不可混用。組合單位符號(hào)中表示相除的斜線多于1條時(shí)應(yīng)采用負(fù)數(shù)冪的形式表示，組合單位中斜線和負(fù)數(shù)冪亦不可混用，如ng/kg/min應(yīng)采用ng·kg-1·min-1的形式，不宜采用ng/kg-1·min-1的形式。在敘述中應(yīng)先列出法定計(jì)量單位數(shù)值，括號(hào)內(nèi)寫舊制單位數(shù)值；如果同一計(jì)量單位反復(fù)出現(xiàn)，可在首次出現(xiàn)時(shí)注出法定與舊制單位換算系數(shù)，然后只列法定計(jì)量單位數(shù)值。量的符號(hào)一律用斜體字，如吸光度（舊稱光密度）的符號(hào)“”。血壓仍以mmHg表示。

本刊編輯部

Expression of CD97-CD55 protein complex in patients with breast malignant tumors and its clinicopathological significance

ObjectiveTo detect the expression of CD97-CD55 protein complex in breast malignant tumors and to assess its clinicopathological significance．Methods CD97-CD55 protein complex was detected in 212 paraffin specimens of breast malignant tumor tissue and 358 specimens of breast benign tumor tissue immunohistochemially by tissue micro-array chip method．The diversity of CD97 and CD55mRNA expression in benign and malignant breast tumor tissues was also detected by CD97 and CD55 oligonucleotide probe with chromogenic in situ hybridization method．The risk factors were analyzed by Cox proportional risk model and multiple regression analysis method,and Kaplan-Meier curve was adopted for survival analysis．Results CD97EGFand CD97Stalkexpressions were detected in 53．3%（113/212）and 65．1%（138/212）of breast malignant tissue,respectively．CD55 expression was detected both in benign and malignant tumor tissue．CD97 and CD55mRNA in breast malignant tumor tissue shown a visual amplification by chromogenic in situ hybridization method,and there was a significant difference compared to that in benign breast tumor tissue(P＜0．01)．Cox proportional risk model and multiple regression analysis showed that tumor size,positive axillary lymph node numbers,TNM classification and positive-CD97EGFexpression were independent risk factors for prognosis of patients with breast malignant tumor．Conclusion CD97-CD55 protein complex are expressed in breast malignant tumor tissue．CD97Stalkand CD97EGFmay play a different role in tumorogenesis and progression of breast malignant tumor．CD97EGFpositive expression in breast malignant tumor tissue can be used as an indicator for prognosis estimation．

Neoplasma Mammary gland CD97 CD55 Protein complex Tissue micro-arrary Immunochemistry Chromogenic in situ hybridation

2013-11-18）

杭州市醫(yī)藥衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目（2008102147）

311200 杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院普外科（袁曉雷、田華、朱旭明、黃斌、孫麗君、張偉軍、王震宇、李鋒）；浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院外科（陳力）

陳力，E-mail：chenli@mail.hz.zj.cn