孫保木，羅 明

·綜述與講座·

CIK細胞治療原發(fā)性肝癌的研究進展

孫保木，羅 明

細胞因子誘導的殺傷細胞;肝癌

原發(fā)性肝細胞癌(簡稱肝癌)是世界上第五大常見腫瘤，在癌癥相關死亡原因中排名第三，每年死于肝癌的患者超過50萬人［1］。目前肝癌的治療主要有手術切除、肝臟移植、局部射頻消融、動脈栓塞治療、生物治療及分子靶向治療等。由于其發(fā)病隱匿，大多數(shù)患者一經發(fā)現(xiàn)即為中、晚期，難以進行手術根治。生物技術、分子生物學的發(fā)展則導致腫瘤生物免疫、基因治療以及分子靶向治療取得顯著進步，已成為肝癌治療的重要組成部分。

腫瘤的免疫治療包括細胞過繼性免疫治療、細胞因子和免疫基因治療等。細胞過繼性免疫治療包括:LAK細胞、CIK細胞、TIL細胞等。TIL細胞、LAK均具有一定殺瘤活性，但存在體外增殖速度不夠，療效可重復性差，毒副作用大等缺點［2］。CIK細胞作為免疫效應細胞的一種，具有強大的殺傷活性，1991年由Stanford大學骨髓移植中心的Schmidt-Wolf等發(fā)現(xiàn)，并命名為細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokine in-duced killer，CIK)［3］。CIK細胞是人外周血或人臍帶血單個核細胞在體外用多種細胞因子如IL-2、IFN-γ和CD3單克隆抗體等誘導而獲得的具有較強殺傷活性的淋巴細胞。CIK細胞主要分布在肝臟中，其次為外周血。其主要效應細胞為CD3、CD56雙陽性T細胞。目前研究較多，已應用于臨床的CIK細胞則兼具T細胞的強大的抗瘤活性和NK細胞的非組織相容性復合體(MHC)限制性殺瘤特點，是一種高效、具廣譜殺瘤活性的免疫活性細胞。其增殖能力較TIL、LAK細胞更強，而相關毒副作用較少，在腫瘤免疫治療中具有重大的應用價值［4］。

1 CIK細胞的抗肝癌作用機制

1.1 CIK直接殺傷腫瘤細胞 CIK細胞對腫瘤細胞的殺傷具有非MHC限制性，具有較大的溶解活性，受到外源性抗CD3單克隆抗體或者敏感靶細胞刺激時，通過MHC分子和CD3-T細胞受體復合物相互作用，可釋放有毒性的胞漿顆粒到膜外空間，從而殺傷多種不同組織的腫瘤細胞。CIK是一群增值率高并具有抗腫瘤活性的異質細胞，通過穿孔素/顆粒酶殺傷腫瘤細胞［5］。另外淋巴細胞功能相關抗原-1(LFA-1)有關識別結果以及與CD3受體結合可激活CIK細胞，導致胞漿毒性顆粒釋放而殺傷腫瘤細胞。

1.2 CIK細胞分泌細胞因子促進殺傷腫瘤細胞及細胞凋亡

CIK細胞經培養(yǎng)后可分泌大量的Thl類細胞因子，如IL-2、IFN-γ以及IL-12，可調節(jié)體內其他細胞因子的分泌以促進腫瘤細胞對CIK細胞殺傷作用的敏感性。CIK細胞可產生大量炎性細胞因子、活化腫瘤細胞凋亡基因，使得FLIP、BCL-2、BCL-xL、DAD1和survivin基因表達上調。CIK細胞還可增強T細胞功能，促進其對腫瘤細胞殺傷作用［6］。

2 CIK細胞的臨床應用

由于目前CIK細胞制備、擴增技術日益完善成熟，且伴隨生物技術的不斷發(fā)展，CIK細胞被更多應用于治療肝癌，其治療的核心是增加CIK細胞的數(shù)量及殺傷活性。為了增加其數(shù)量及殺傷活性，增強其特異性殺傷作用。目前有較多CIK聯(lián)合治療的方法，主要有:單獨使用CIK;CIK聯(lián)合DC; CIK聯(lián)合細胞因子或細胞因子導入CIK聯(lián)合細胞因子，包括:CIK聯(lián)合IL-2、IL-15、IL-24、IL-7等細胞因子基因導入; CIK聯(lián)合中藥或其他天然藥物;CIK聯(lián)合化放療、介入治療，臨床應用已較多，技術相對成熟，適用于手術、放化療后無法接受常規(guī)治療的腫瘤，多數(shù)治療顯示生存質量提高，免疫功能改善，另外對于清除MRD等有確定療效;CIK聯(lián)合分子靶向治療。

3 影響CIK細胞臨床療效的因素

3.1 不同血來源對CIK細胞生物學特性的影響 從肝臟、臍血、外周血、骨髓中取得的外周血單核細胞作為CIK細胞培養(yǎng)來源，其最終表現(xiàn)出的免疫表型及殺傷毒性有一定差異。有研究顯示［7］，從慢性粒細胞性白血病患者外周血獲得的CIK細胞擴增能力低于正常供者，但接近淋巴瘤患者外周血CIK細胞的擴增倍數(shù)，且CIK細胞費城染色體均為陰性。經該途徑獲得的CIK細胞，其有效成分及生物學活性不受腫瘤患者病情嚴重程度和腫瘤是否轉移的影響，該特點為不同臨床情況的腫瘤患者提供了有效治療途徑。值得注意的是，由外周血T細胞激活誘導為CIK細胞的比率、增殖能力、殺傷活性會隨著外周血保存時間的延長而逐漸降低［8］。臍血來源培養(yǎng)的CIK細胞較其他來源具有更顯著的增殖活性及細胞殺傷力，且臍血免疫原性弱，患者輸注臍血CIK細胞(CB-CIK)后不易引起移植物抗宿主反應(GVHD)。骨髓來源的CIK細胞體外增殖能力較臍血及外周血來源稍差，細胞毒作用與外周血CIK細胞相比無顯著差異［9］。

3.2 不同輸注途徑對CIK臨床療效的影響 回輸途徑可以影響CIK細胞進入人體后在各個器官的分布濃度、到達靶器官的豐度，這直接影響CIK細胞的臨床療效。大量研究表明［10-11］，CIK細胞經外周靜脈途徑輸注后，能廣泛分布于大多數(shù)組織器官，分布濃度高低與血供豐富程度、流經順序及器官免疫屬性相關。

4 安全性

CIK細胞治療主要不良反應是發(fā)熱，經對癥處理均好轉。未見其他不良反應［12-13］。

5 問題與展望

CIK細胞治療與其他細胞治療一樣仍存在著諸多的問題，生物治療本身存在的問題也是CIK存在和面臨的問題，沒有確切的靶標，沒有形成長期的治療方案和明確的CIK治療所需的最低有效劑量，如何制定切實可行的治療方案，因人制宜的給予最佳的治療劑量，最大限度地提高CIK細胞的活力，以便最有效的消滅腫瘤負荷，生物治療的科學方法尚無很好的應用于對腫瘤患者的認識和合理的治療設計，沒有大多數(shù)腫瘤患者都能接受的治療費用，因此建立規(guī)范的治療方案，降低治療費用，是近期急需解決的問題。

沒有形成公認的療效評價體系，CIK最佳療效的獲得和長期療效的維持是CIK治療的核心問題。目前國內采取CR +PR+SD=總有效率的療效評價體系，只是對近期療效的評估，而且這種評價體系還會出現(xiàn)矛盾的結論，比如以腫瘤大小為評價指標，會出現(xiàn)癥狀緩解而瘤體增大的矛盾結論，以短期的臨床觀察改變來推斷長期的可能獲益，到目前為止，尚沒有令人信服的隨機對照試驗、資料等可以提供結論性的證據(jù)來證實CIK治療是肝癌治療的最大獲益。

盡管CIK治療還存在著諸多亟待解決的問題，但CIK具有不可比擬的治療優(yōu)勢，目前應用DC-CIK聯(lián)合治療肝癌的臨床病例日益增加，臨床同樣表明，DC-CIK細胞免疫治療可以彌補手術、放療、化療等傳統(tǒng)方式“不徹底、易轉移、副作用大”等不足，有些患者生存的時間能夠延長3～5年，是國際公認的有希望消滅癌細胞的第四大腫瘤治療新技術。這就要求我們加快制定系統(tǒng)方案，加強制度建設，積極引導CIK的良性發(fā)展，治療模式上CIK的劑量采取以腫瘤負荷為特定靶標，因人因病不同采取”細水長流式”的長期治療或者“重點投入式”沖擊療法，真正做到精確點射，而不濫殺無辜，同時要與其他療法適當聯(lián)合，療效評價方法應采取細胞與影像學技術的完美結合，不同的臨床研究應盡可能采用統(tǒng)一的標準化方案。

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10.3969/j.issn.1009－0754.2014.06.047

2014－07－25)

(本文編輯:甘輝亮)

上海市衛(wèi)生局資助(20114179)

200433 上海，第二軍醫(yī)大學東方肝膽外科醫(yī)院中西醫(yī)結合科

羅明，電子信箱:romi915@126.com