曾祥，李巖，裴冬梅

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院1.社會(huì)服務(wù)部；2.消化內(nèi)科，沈陽(yáng)110004）

DOG1、CD117和Ki67在胃腸道間質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與臨床病理因素和危險(xiǎn)度的相關(guān)性

曾祥1，李巖2，裴冬梅1

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院1.社會(huì)服務(wù)部；2.消化內(nèi)科，沈陽(yáng)110004）

目的探討DOG1、CD117和Ki67在胃腸道間質(zhì)瘤中表達(dá)及其與臨床病理因素的相關(guān)性和危險(xiǎn)度的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)DOG1、CD117和Ki67在66例GIST中表達(dá)情況，并對(duì)病例進(jìn)行危險(xiǎn)度分級(jí)，分析上述免疫組化指標(biāo)與臨床病理相關(guān)因素和危險(xiǎn)度之間的關(guān)系。結(jié)果在66例GIST中，DOG1表達(dá)陽(yáng)性率為93.94%，CD117表達(dá)陽(yáng)性率為65.15%，其中CD117陰性的GIST中DOG1陽(yáng)性表達(dá)率為82.61%。DOG1和CD117陽(yáng)性表達(dá)率與性別、年齡、部位、腫瘤大小、核分裂數(shù)、危險(xiǎn)度之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。但DOG1表達(dá)陽(yáng)性率高于CD117，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。Ki67增殖指數(shù)＜1%，1%～5%和＞5%的例數(shù)分別為15例、20例、24例。Ki67增殖指數(shù)在GIST中陽(yáng)性表達(dá)率為89.39%，Ki67的陽(yáng)性表達(dá)與性別、年齡、部位之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而與腫瘤大小、核分裂數(shù)及危險(xiǎn)度之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），并且Ki67增殖指數(shù)與腫瘤大小、核分裂數(shù)及危險(xiǎn)度之間均呈正相關(guān)（r=0.488、r=0.425、r=0.550）。在CD117陽(yáng)性的GIST中，Ki67陽(yáng)性表達(dá)率高于DOG1陽(yáng)性的GIST，兩者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論在GIST中，DOG1比CD117有更高的敏感性，Ki67增殖指數(shù)的表達(dá)可與腫瘤大小、核分裂數(shù)一起作為判斷危險(xiǎn)度及預(yù)測(cè)預(yù)后的重要指標(biāo)。

胃腸道間質(zhì)瘤；DOG1；CD117；Ki67增殖指數(shù)；危險(xiǎn)度

胃腸道間質(zhì)瘤（gastrointestinal stromal tumors，GIST）是最常見(jiàn)的胃腸道間葉源性腫瘤［1］。由Mazur和Clark提出并命名。GIST發(fā)生的中心事件是C-kit和PDGFRa獲得功能性突變［2］。病理診斷主要依靠腫瘤組織中CD117的陽(yáng)性表達(dá)，但近年來(lái)在越來(lái)越多的GIST中CD117表達(dá)陰性，誤診漏診率較高。DOG1基因是最新發(fā)現(xiàn)的GIST特異性標(biāo)志物［3］，對(duì)于CD117陰性的GIST的診斷具有重要意義。而對(duì)于GIST的生物學(xué)行為評(píng)估，宜以危險(xiǎn)程度代替良惡性。目前主要依據(jù)是腫瘤大小和核分裂象計(jì)數(shù)。本文通過(guò)對(duì)66例GIST標(biāo)本進(jìn)行光鏡觀察及免疫組化檢測(cè)，進(jìn)一步探討GIST中DOG1、CD117和Ki67的表達(dá)特征及其危險(xiǎn)度分級(jí)的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

收集中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院2010年11月至2012年8月間66例資料完整，診斷明確的GIST石蠟標(biāo)本。其中來(lái)源于胃47例，腸道17例，腹腔2例；男性26例，女性40例，平均年齡58.18歲（24～78歲），中位年齡57歲。

1.2 方法

1.2.1 DOG1、CD117和Ki67的表達(dá)：所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛液固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚切片，HE染色，光鏡觀察。采用SP法檢測(cè)DOG1、CD117和 Ki67的表達(dá)情況，用相同SP法檢測(cè)的陽(yáng)性切片做陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗為陰性對(duì)照，染色步驟和抗體稀釋度均按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.2 結(jié)果判定：DOG1、CD117染色定位于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜，為棕色或棕黃色顆粒。每張切片觀測(cè)10個(gè)高倍鏡視野內(nèi)陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞數(shù)；DOG1著色腫瘤細(xì)胞數(shù)＞10%為陽(yáng)性，CD117著色腫瘤細(xì)胞數(shù)＞5%為陽(yáng)性表達(dá)，否則為陰性。Ki67表達(dá)定位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒。每例切片隨即選擇10個(gè)HPF，記數(shù)其中1 000個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的百分?jǐn)?shù)表示Ki67增殖指數(shù)。統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，取平均值。Ki67染色結(jié)果按增殖指數(shù)＜1%，1%～5%（包括1%和5%），＞5%分為3個(gè)等級(jí)。

1.2.3 危險(xiǎn)度分級(jí)：選擇細(xì)胞生長(zhǎng)最活躍區(qū)，連續(xù)50個(gè)HPF（×400）觀察進(jìn)行核分裂計(jì)數(shù)。采用2008年NIH專(zhuān)家組討論的原發(fā)GIST切除后風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)［4］，分為極低度、低度、中度和高度4級(jí)（表1）。

表1 原發(fā)GIST切除后風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)Tab.1 Proposed modification of consensus classification for selecting patients with GIST for adjuvant therapy

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用Pearson χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 DOG1、CD117的表達(dá)與臨床病理因素的相關(guān)性

66例GIST中，DOG1陽(yáng)性（圖1A）62例，陽(yáng)性率93.94%（62/66）。CD117陽(yáng)性（圖1B）43例，陽(yáng)性率65.15%（43/66）。在CD117陰性的GIST中DOG1陽(yáng)性19例，陽(yáng)性率為82.61%（19/23）。DOG1比CD117有更高的敏感性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。但DOG1、CD117的表達(dá)與性別、年齡、部位、腫瘤大小、核分裂數(shù)、危險(xiǎn)度之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，表2）。

2.2 Ki67的表達(dá)與GIST危險(xiǎn)度的相關(guān)性

66例GIST中，Ki67增殖指數(shù)陰性（圖1C），＜1%（圖1D），1%～5%（圖1E）和＞5%（圖1F）的例數(shù)分別為7、15、20、24例。Ki67的陽(yáng)性表達(dá)與性別、年齡、部位均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。但Ki67的表達(dá)與腫瘤大小、核分裂數(shù)及危險(xiǎn)度之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，表1）。并且Ki67增殖指數(shù)與腫瘤大小、核分裂數(shù)及危險(xiǎn)度之間均呈正相關(guān)（r=0.488、r=0.425、r=0.550）（圖2A、2B、2C）。

2.3 DOG1、CD117的表達(dá)與Ki67的相關(guān)性

DOG1陽(yáng)性的62例GIST中，Ki67表達(dá)的陽(yáng)性率為91.94%（57/62）。CD117陽(yáng)性的43例GIST中，Ki67表達(dá)的陽(yáng)性率93.02%（40/43）。CD117陽(yáng)性的GIST，Ki67的陽(yáng)性表達(dá)率高于DOG1陽(yáng)性的GIST，兩者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表2 DOG1、CD117和Ki67在GIST中的表達(dá)與臨床病理因素和危險(xiǎn)度的相關(guān)性Tab.2 Expression of DOG1，CD117 and Ki67 in GIST and their correlation with clinicopathological features and risk rank

3 討論

GIST是一種胃腸道的間葉源性腫瘤。依據(jù)2008年《中國(guó)胃腸道間質(zhì)瘤診斷治療共識(shí)》，GIST定義為［5］：GIST是一類(lèi)特殊的、通常CD117免疫表型陽(yáng)性的胃腸道最常見(jiàn)的間葉源性腫瘤，組織學(xué)上由梭形細(xì)胞、上皮樣細(xì)胞、偶或多形性細(xì)胞排列成束狀或彌漫狀圖像，免疫表型上表達(dá)C-Kit基因蛋白產(chǎn)物Kit（CD117），由突變的C-Kit基因或血小板源性生長(zhǎng)因子受體（PDGFRA）基因驅(qū)動(dòng)?，F(xiàn)認(rèn)為起源于胃腸道的Cajal細(xì)胞，占胃腸道腫瘤的1%～4%［6，7］。目前，病理診斷是GIST最主要的診斷方式，其診斷主要依靠病理組織學(xué)及免疫組織化學(xué)，以CD117陽(yáng)性表達(dá)為診斷標(biāo)準(zhǔn)。

圖1 DOG1、CD117和Ki67在胃腸道間質(zhì)瘤中的免疫組化結(jié)果SP×200Fig.1 Immunohistochemical staining for DOG1，CD117 and Ki67 in GIST SP×200

圖2 Ki67增殖指數(shù)與腫瘤大小、核分裂數(shù)及危險(xiǎn)度的相關(guān)性Fig.2 Relationship between Ki67 expression and tumor size，tumor mitotic count and risk rank

DOG1是由人類(lèi)11q13上的CCND1-EMS1基因座所編碼的8次穿膜蛋白［8］，由West［9］提出的選擇性地高表達(dá)于GIST的基因，國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道在GIST中的表達(dá)率可達(dá)90%～95%［3～10］，其表達(dá)對(duì)于上皮樣胃間質(zhì)瘤、PDGFRA突變間質(zhì)瘤、胃腸道外間質(zhì)瘤、轉(zhuǎn)移性間質(zhì)瘤以及兒科間質(zhì)瘤都有較好的敏感性和特異性，且表達(dá)不依賴(lài)于KIT或PDGFRA基因的突變狀態(tài)［11］。Miettinen等［10］對(duì)1 168例不同部位、不同病理分型的GIST進(jìn)行免疫組化研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)DOG1陽(yáng)性率高達(dá)94.4%，說(shuō)明DOG1有較高的敏感性。本研究66例GIST中，DOG1陽(yáng)性表達(dá)率93.94%，CD117陽(yáng)性表達(dá)率65.15%。DOG1的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于CD117，兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意（P＜0.01）?？梢?jiàn)DOG1與CD117聯(lián)合診斷可以提高GIST的診斷率，并減少誤診漏診率。

關(guān)于GIST的良惡性，目前比較公認(rèn)的是所有GIST均應(yīng)被視為具有惡性潛能的腫瘤，但其惡性程度分級(jí)尚沒(méi)有一個(gè)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，大多認(rèn)為與腫瘤大小及核分裂數(shù)有關(guān)，既往采用較公認(rèn)的2002版美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生署（NIH）的危險(xiǎn)度分級(jí)［12］。2008年NIH專(zhuān)家組重新討論了GIST的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，并在2008版的《中國(guó)胃腸道間質(zhì)瘤病理共識(shí)意見(jiàn)》中將原發(fā)腫瘤部位和腫瘤破裂也作為預(yù)后的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)。將GIST按照危險(xiǎn)程度分為極低度、低度、中度、高度共4級(jí)。本研究分析了DOG1、CD117的表達(dá)情況與GIST危險(xiǎn)度分級(jí)之間的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)DOG1和CD117的陽(yáng)性表達(dá)率在不同危險(xiǎn)度之間均沒(méi)有顯著差異，故不能作為判斷GIST危險(xiǎn)度的指標(biāo)。

Ki67增殖指數(shù)是與增殖細(xì)胞相關(guān)的核抗原，僅分布于核內(nèi)，其功能被認(rèn)為與細(xì)胞的有絲分裂密切相關(guān)，一種反映細(xì)胞分裂和增值活性的標(biāo)志物，已在臨床廣泛使用。本研究顯示Ki67在極低危險(xiǎn)度、低危險(xiǎn)度、中危險(xiǎn)度、高危險(xiǎn)度的GIST中表達(dá)的陽(yáng)性率分別為62.50%、90.91%、93.33%、95.24%，Ki67的表達(dá)在極低、低危險(xiǎn)度與中、高危險(xiǎn)度組組有顯著性差異（P＜0.01），并且Ki67增值指數(shù)陽(yáng)性表達(dá)率越高，危險(xiǎn)度也越高，兩者間呈正相關(guān)，提示Ki67增值指數(shù)可能是判斷危險(xiǎn)度和預(yù)測(cè)預(yù)后的有效指標(biāo)。

綜上，DOG1可作為診斷GIST或鑒別非GIST的一個(gè)敏感的重要標(biāo)記物，對(duì)于CD117陰性的病例，建議聯(lián)合檢測(cè)DOG1，使病理學(xué)診斷更客觀和完整，因此DOG1的檢測(cè)更值得在GIST的診斷和鑒別診斷中推廣。對(duì)于Ki67增殖指數(shù)臨床病理中檢測(cè)方便、易行，有助于對(duì)GIST預(yù)后的判斷，可與腫瘤大小及核分裂數(shù)一起作為臨床判定GIST危險(xiǎn)度及預(yù)后的重要指標(biāo)。

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（編輯 裘孝琦）

Expression of DOG1，CD117 and Ki67 in GastrointestinalStromalTumorsand Their Correlation with ClinicopathologicalFeaturesand Risk Rank ofGISTs

ZENG Xiang1，LIYan2，PEIDong-mei1
（1.DepartmentofSocialService，Shengjing Hospital，China MedicalUniversity，Shenyang 110004，China；2.DepartmentofGastroenterology，Shengjing Hospital，China MedicalUniversity，Shenyang 110004，China）

ObjectiveTo investigate the expression of DOG1，CD117，and Ki-67 in gastrointestinal stromal tumors and explore their relationship with the clinicopathological factors and risk rank of GISTs.MethodsImmunohistochemical method was adopted to detected the expression of DOG1，CD117，and Ki67 in 66 cases of GIST.The risks in all cases were also ranked.The correlation between immunohistochemical indicators and clinicopathological factors and risk ranks of GISTs were analyzed.ResultsAmong the 66 GISTs，the positive rates of DOG1 and CD117 were 93.94%and 65.15%.The positive rate of DOG1 in CD117 negative GISTs was 82.61%.had There were no significant difference among groups in gender，age，position，tumor size，tumor mitotic count in the expression of DOG1 and CD117 and risk rank（P＞0.05）.However，DOG1 was more sensitive than CD117（P＜0.01）.The number of cases with Ki67 proliferation indices＜1%，1%-5%and＞5%were 15，20，and 24，respectively. The positive rate of Ki67 was 89.39%.No significant difference was found in the expression of Ki67 among groups in gender，age，and position（P＞0.05）.Nevertheless，e Ki67 protein expression waspositively correlated with the tumorsize，tumormitotic countand risk rank（P＜0.01）（r=0.488，r=0.425，r=0.550）.The positive rate of Ki67 was a little bit higher in CD117 positive GISTs than the these DOG1 positive cases，but there was no significant difference（P＞0.05）.ConclusionDOG1 has higher sensitivity than CD117 in GISTs.Ki67 protein，tumor size，and tumor mitotic countwere risk indicatorsfor GISTs and could be predictors forprognosis.

gastrointestinal stromal tumors；DOG1；CD117；Ki67；risk rank

R735

A

0258-4646（2014）05-0449-05

曾祥（1986-），男，住院醫(yī)師，碩士.

李巖，E-mail：yanli0227@126.com

2013-12-04

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