黎可京 邱小蕾 袁耀宗

1.廣東省佛山市第一人民醫(yī)院特需醫(yī)療中心，廣東佛山528000；2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院特需醫(yī)療中心，上海200025

5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體與腸易激綜合征患者軀體心理癥狀的相關(guān)性分析

黎可京1邱小蕾1袁耀宗2

1.廣東省佛山市第一人民醫(yī)院特需醫(yī)療中心，廣東佛山528000；2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院特需醫(yī)療中心，上海200025

目的研究5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體（SERT）與腸易激綜合征（IBS）患者軀體和心理癥狀是否存在相關(guān)性。方法選取2010年1月～2012年12月佛山市第一人民醫(yī)院IBS患者154例為病例組，并按不同癥狀分為3個亞組（CIBS組65例、D-IBS組47例、A-IBS組42例），選擇同期健康志愿者154名作為對照組。應(yīng)用心理癥狀自評量表（SCL-90）來評價研究對象的心理狀態(tài)；采用實(shí)時定量PCR法測定SERT信使RNA（mRNA）表達(dá)量，Western印跡法測定SERT蛋白表達(dá)水平。結(jié)果SERT蛋白表達(dá)量：病例組（0.81±0.45）和對照組（0.79±0.47）比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。SERTmRNA轉(zhuǎn)錄表達(dá)量：病例組（0.46±0.25）和對照組（0.42±0.28）比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。C-IBS組SERT蛋白表達(dá)量（0.98±0.51）及mRNA表達(dá)量（0.58±0.23）均顯著高于D-IBS組[（0.71± 0.40）、（0.41±0.25）]、A-IBS組[（0.67±0.35）、（0.37±0.23）]和對照組[（0.79±0.47）、（0.42±0.28）]，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。SERT蛋白表達(dá)量與軀體化癥狀（r=-0.681，P<0.05）、敵意因子（r=-0.663，P<0.05）、焦慮因子（r =-0.711，P<0.05）和抑郁因子（r=-0.812，P<0.05）呈負(fù)相關(guān)，與強(qiáng)迫癥狀、恐懼、偏執(zhí)、人際關(guān)系敏感和精神病因子均無明顯相關(guān)性（P>0.05）。結(jié)論IBS患者SERT的mRNA及蛋白量表達(dá)水平與患者的軀體和心理癥狀密切相關(guān)，越低則越容易出現(xiàn)軀體化癥狀、焦慮等情緒表現(xiàn)。

5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體；腸易激綜合征；轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)；軀體化癥狀；心理癥狀

腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS）是一種常見的慢性胃腸功能紊亂性疾病，至今為止病因和發(fā)病機(jī)制尚未明確，根據(jù)癥狀不同分為便秘型（constipationirritable bowelsyndrome，C-IBS）、腹瀉型（diarrhea irritable bowel syndrome，D-IBS）和腹瀉便秘交替型（alternating diarrhea andconstipationirritable bowelsyndrome，A-IBS）[1]。

近年研究發(fā)現(xiàn)，5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）及5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體（seroto-nin transporter，SERT）在腸道動力紊亂、內(nèi)臟感覺異常等機(jī)制中發(fā)揮著重要作用[2]，IBS患者中有40%～60%都伴焦慮、抑郁等心理障礙[3]。本研究正是為了探討SERT異常與患者軀體和心理癥狀之間的關(guān)系，以期對IBS治療和藥物的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年1月～2012年12月佛山市第一人民醫(yī)院IBS患者154例為病例組，其中男59例，女95例，平均年齡（41.9±11.9）歲，根據(jù)臨床癥狀分為便秘主導(dǎo)型（C-IBS）組、腹瀉主導(dǎo)型（D-IBS）組和腹瀉便秘交替型（A-IBS）組3個亞組。其中C-IBS組65例，平均年齡（40.1±8.7）歲；D-IBS組47例，平均年齡（42.2±9.3）歲；A-IBS組42例，平均年齡（39.8±9.4）歲。對照組為同時間的健康志愿者154名，平均年齡（41.1± 9.7）歲。本研究實(shí)驗(yàn)前已經(jīng)獲得醫(yī)院倫理委員會通過，所有研究對象都預(yù)先知情，并且簽署了知情同意書。所有研究對象都經(jīng)過詳細(xì)查問病史，進(jìn)行全面體格檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查，排除器質(zhì)性疾病、精神病及藥物濫用者，病例組必須符合羅馬Ⅲ分型診斷標(biāo)準(zhǔn)。兩組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 D-IBS組、C-IBS組和A-IBS組入選標(biāo)準(zhǔn)

①每周排便<3次；②每天排便>3次；③塊狀或硬便；④稀爛便或水樣便；⑤排便費(fèi)力；⑥排便急迫感。

D-IBS組：符合上述癥狀②、④、⑥項(xiàng)之1項(xiàng)或以上，而無①、③、⑤項(xiàng)；或有②、④、⑥項(xiàng)之2項(xiàng)或以上，可伴①、⑤項(xiàng)之中1項(xiàng)，但無③項(xiàng)。

C-IBS組：符合上述癥狀①、③、⑤項(xiàng)之1項(xiàng)或以上，而無②、④、⑥項(xiàng)；或有①、③、⑤項(xiàng)之2項(xiàng)或以上，可伴②、④、⑥之中1項(xiàng)。

A-IBS組：上述癥狀交替出現(xiàn)。

1.3 方法

1.3.1 心理癥狀調(diào)查

采用癥狀自評量表（SCL-90）[4]，研究對象均獨(dú)立完成。SCL-90量表共有90個項(xiàng)目，采用10個因子分別反映10個方面的心理癥狀情況，即軀體化、強(qiáng)迫癥狀、人際關(guān)系敏感、抑郁、焦慮、敵對、恐怖、偏執(zhí)和精神病性，未能歸入上述因子將之歸為因子10“其他”。SCL-90的每一個項(xiàng)目均采用5級評分制，依據(jù)研究對象自覺有無該項(xiàng)癥狀及程度來得分：沒有為0分；很輕為1分；中度為2分；偏重為3分；嚴(yán)重為4分。“輕、中、重”由被試者自己體會，不必做硬性規(guī)定。評定的時間，是“現(xiàn)在”或者是“最近1個星期”的實(shí)際感覺。得分越高，代表與相關(guān)因素關(guān)系越密切。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)部分

1.3.2.1 標(biāo)本采集分別在乙狀結(jié)腸、直腸與乙狀結(jié)腸交界處和直腸處，用結(jié)腸鏡鉗取3塊腸黏膜組織，標(biāo)本約0.3 cm×0.2 cm×0.3 cm，保存在液氮中[5]。

1.3.2.2 PCR檢測用TRIzol方法來提取腸黏膜組織總的RNA，并反轉(zhuǎn)錄成cDNA，反應(yīng)引物由上海英駿生物技術(shù)公司負(fù)責(zé)合成。PCR反應(yīng)總體系為10μL，模板cDNA 1μL，dd H2O 3.6μL，SYBRMastermix 5μL，10mmol/L上下游引物各0.2μL；反應(yīng)的條件設(shè)定為95℃5min，94℃10 s，59℃10 s，72℃10 s，循環(huán)40次，溫度的變化速率設(shè)為20℃/s；之后以95℃10 s，65℃15 s，以0.1℃/s速率逐漸使溫度升至95℃10 s。持續(xù)監(jiān)測并記錄熒光信號的變化，對熔解曲線進(jìn)行分析，以GAPDH為內(nèi)參照，作相對定量的分析，用2-△Ct來表示樣本SERT基因相對于內(nèi)參照表達(dá)量（△Ct=Ct目的基因－Ct內(nèi)參照）[6]。

1.3.2.3Western的印跡分析法提取結(jié)腸黏膜標(biāo)本的組織蛋白，行SDS-PAGE，轉(zhuǎn)膜，以5%脫脂奶粉封閉，并加入ab36127羊抗SERT（1∶1000），然后于4℃條件下?lián)u床過夜，TBST漂洗，加辣根酶標(biāo)記抗山羊lgG（1∶5000）后溫育1 h，以TBST漂洗，DAB顯色，當(dāng)出現(xiàn)目標(biāo)條帶后立即終止反應(yīng)。最后用圖像分析儀測量各樣品顯色的灰度，利用灰度值進(jìn)行分析[7]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 19.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩獨(dú)立樣本的計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)；多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。相關(guān)性關(guān)系采用Pearson法分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各型IBS患者SERT mRNA、蛋白表達(dá)量情況

SERT蛋白表達(dá)量：病例組（0.81±0.45）和對照組（0.79±0.47）比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。SERT mRNA轉(zhuǎn)錄表達(dá)量：病例組（0.46±0.25）和對照組（0.42± 0.28）比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。C-IBS組SERT蛋白表達(dá)量（0.98±0.51）及mRNA表達(dá)量（0.58±0.23）均顯著高于D-IBS組[（0.71±0.40），（0.41± 0.25）]、A-IBS組[（0.67±0.35），（0.37±0.23）]和對照組[（0.79±0.47），（0.42±0.28）]，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P< 0.05）。見表1。

表1 各組別SERTm RNA表達(dá)量及SERT蛋白表達(dá)量比較（x±s）

表2 IBS患者自評量表各項(xiàng)因子平均得分情況（分，x±s）

表3 IBS患者SERT蛋白表達(dá)量與SCL-90分值相關(guān)性分析

2.2 SERT蛋白表達(dá)量與IBS患者心理癥狀相關(guān)性分析

2.2.1 IBS患者自評量表各項(xiàng)因子平均得分情況

IBS病例組與健康對照組在軀體化癥狀因子、抑郁因子、焦慮因子和敵意因子影響方面差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；在強(qiáng)迫癥狀因子、人際關(guān)系敏感因子、恐懼因子、偏執(zhí)因子和精神病因子影響方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

2.2.2 IBS患者SERT蛋白表達(dá)量與SCL-90分值相關(guān)性分析

SERT蛋白表達(dá)量與軀體化癥狀、抑郁因子、焦慮因子和敵意因子均有相關(guān)性（P<0.05），且呈負(fù)相關(guān)；與強(qiáng)迫癥狀、人際關(guān)系敏感、恐懼、偏執(zhí)和精神病因子均不存在相關(guān)性（P>0.05）。見表3。

3 討論

IBS癥狀持續(xù)或反復(fù)發(fā)作，給人們工作、生活帶來了諸多不便和沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。自從Sikander等[8]用原位雜交法證實(shí)編碼SERTmRNA在小鼠腸道有表達(dá)以來，對SERT的研究逐年增多。

5-HT是重要的神經(jīng)遞質(zhì)和信號分子，在IBS發(fā)病中介導(dǎo)許多效應(yīng)[9]，調(diào)控著胃腸運(yùn)動、分泌、吸收及感覺等復(fù)雜功能，5-HT對胃腸道作用的終止有賴于SERT。SERT通過攝取神經(jīng)突觸間隙5-HT，對其起滅活作用[10]。本研究中，C-IBS組SERTmRNA和蛋白表達(dá)量較高，而D-IBS組及A-IBS組均較低，由此推測，便秘可能是由于SERT表達(dá)水平高，將未完全發(fā)揮效應(yīng)的5-HT提前滅活，使腸道蠕動反射和分泌反射減弱、腸道對糞便水分重吸收增加所致，而腹瀉則正好相反，交替組則可能與5-HT受體脫敏引起暫時性便秘有關(guān)[11]。

本研究結(jié)果顯示，SERT蛋白表達(dá)量較低患者更易出現(xiàn)負(fù)面情緒，而Eugenio等[12]亦發(fā)現(xiàn)，IBS患者中有50%～90%都存在情感障礙相關(guān)疾病，說明IBS發(fā)病與心理因素密切相關(guān)。由此推測，可能是由于SERT蛋白表達(dá)水平低，5-HT不能被及時滅活，積聚在突觸間隙，因而能夠發(fā)揮生理效應(yīng)的5-HT不斷減少，最后導(dǎo)致了心理癥狀的發(fā)生[13]。

綜上所述，SERT表達(dá)水平的高低直接影響著IBS患者的軀體和心理狀況，這提示，在治療IBS患者時要兼顧對患者社會心理的干預(yù)；同時也顯示出了研發(fā)SERT相關(guān)制劑用于治療IBS患者的切實(shí)可行性和樂觀前景。

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Correlation between expression of SERT and somatic and psychological sym ptom s of irritable bowel syndrome

LIKejing1QIU Xiaolei1YUAN Yaozong2
1.Department of Special Medical Center,the First People's Hospital of Foshan City,Guangdong Province,Foshan 528000,China;2.Department of Special Medical Center,the Affiliated Ruijin Hospital of Shanghai Jiaotong University School of Medicine,Shanghai 200025,China

Objective To explore the correlation between the expression of SERT and somatic and psychological symptoms of irritable bowel syndrome(IBS).M ethods 154 cases of IBS patients in the First People's Hospital of Foshan City from January 2010 to December 2012 were selected as disease group and divided into three groups(C-IBS group 65 cases,D-IBS group 47 cases,A-IBS group 42 cases)according to different symptom.154 healthy volunteers were selected as control group.The psychological symptom of study objectswere evaluated by SLC-90.The expression of SERT at mRNA level was tested by real-time potymerase chain reaction(PCR)and the expression of SERT at protein level was detected with Western blotting.Results The expressions of SERT at protein:disease group(0.81± 0.45)and control group(0.79±0.47)were compared,the difference was not statistically significant(P>0.05).The expressions ofmRNA:disease group(0.46±0.25)and the control group(0.42±0.28)were compared,the difference was not statistically significant(P>0.05).The expressions of SERT at protein(0.98±0.51)and mRNA(0.58±0.23)in C-IBS group were significantly higher than those in D-IBS group[(0.71±0.40),(0.41±0.25)],A-IBSgroup[(0.67±0.35),(0.37± 0.23)]and control group[(0.79±0.47),(0.42±0.28)],the differenceswere statistically significant(P<0.05).Therewere negative correlationsbetween the expression of SERTatprotein leveland somatic symptoms(r=-0.681,P<0.05),hostility factor(r=-0.663,P<0.05),anxiety factor(r=-0.711,P<0.05)and depression factor(r=-0.812,P<0.05),however there was no correlation between the expression of SERT at protein level and obsessive-compulsive symptoms,terror,paranoia, interpersonal sensitivity and psychosis factors(P>0.05).Conclusion There is significant correlation between the expressions of SERT atmRNA and protein level and the somatic and psychological symptoms of IBS patients.It shows that the lower level of SERT expressions,themore emotional performance of somatization,anxiety and so on.

SERT;Irritable bowel syndrome;Transport proteinst;Somatic symptoms;Psychological symptoms

R574.4

A

1673-7210（2014）02（c）-0018-04

2013-06-21本文編輯：李繼翔）

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（編號81170347）。