李 婷 楊蘭輝 穆劍強(qiáng) 張 婷

（云南省紅河州第一人民醫(yī)院，云南蒙自661199）

論著／冠心病

心腦血管疾病患者的載脂蛋白E基因多態(tài)性與血脂水平相關(guān)性

李 婷 楊蘭輝 穆劍強(qiáng) 張 婷

（云南省紅河州第一人民醫(yī)院，云南蒙自661199）

目的 探討心腦血管疾病患者的載脂蛋白E（apoE）基因多態(tài)性同自身血脂水平的相關(guān)性。方法 采用聚合酶鏈反應(yīng)酶切技術(shù)以及血脂檢測(cè)技術(shù)分別對(duì)心腦血管疾病患者（觀察組）和對(duì)照組健康人群進(jìn)行研究，對(duì)兩組人群中心腦血管疾病出現(xiàn)率和血脂水平同apoE基因多態(tài)性的相關(guān)性進(jìn)行分析。結(jié)果 兩組人群中apoE基因多態(tài)性的分布不同，對(duì)照組中載脂蛋白E3等位基因所占比例高于觀察組，而觀察組中E2和E4所占比例高于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。分析兩組患者的血脂指標(biāo)，攜帶E2等位基因的人群甘油三酯水平高于攜帶E3和E4的人群，攜帶E4等位基因的人群總膽固醇水平高于攜帶E3和E2的人群。結(jié)論 心腦血管疾病患者中載脂蛋白E2及E4等位基因的比例較高，提示兩者是導(dǎo)致心腦血管疾病高危因素之一，甘油三酯水平升高同E2等位基因具有相關(guān)性，而總膽固醇水平升高同E4等位基因具有相關(guān)性。

載脂蛋白E；聚合酶鏈反應(yīng)；基因多態(tài)性；血脂

動(dòng)脈粥樣硬化是導(dǎo)致心腦血管疾病的高危因素,在國(guó)外的致死率達(dá)到了50%[1]，而我國(guó)的心腦血管疾病發(fā)病率也呈上升趨勢(shì)。導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的因素非常多，包括遺傳因素、年齡因素、性別因素以及高血壓和飲食習(xí)慣等。其中由遺傳因素導(dǎo)致的血脂代謝紊亂同心腦血管疾病的發(fā)病率密切相關(guān),臨床研究證明載脂蛋白E基因（apoE）同脂質(zhì)代謝異常具有緊密的相關(guān)性。本文對(duì)apoE基因多態(tài)性在心腦血管疾病患者和健康人群中的分布情況進(jìn)行了分析，對(duì)apoE基因多態(tài)性同心腦血管疾病以及血脂水平的相關(guān)性進(jìn)行了分析。

1 材料與方法

1.1 一般資料

我院在2012年9月-2013年9月共收治139例心腦血管疾病患者，臨床均得到確診，疾病類型包括腦梗死、腦梗死合并腦出血、腦梗死合并高血壓、腦梗死合并冠心病等，將患者設(shè)為觀察組；選擇116例健康人群作為對(duì)照組，對(duì)照組和觀察組的年齡因素、性別因素等一般資料沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），具有可比性。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 apoE基因型檢測(cè) 抽取3ml抗凝靜脈血，使用低滲溶血以及酚/氯仿法提取白細(xì)胞中的基因組,進(jìn)行沉淀和洗滌，干燥后放入TE緩沖液進(jìn)行溶解，然后凍存?zhèn)溆?。采用PCR引物對(duì)apoE基因特異片段進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為244bp。采用酶切鑒定apoE的基因型：首先選擇5m擴(kuò)增產(chǎn)物，使用2%含量的瓊脂糖凝膠電泳上對(duì)DNA片段進(jìn)行檢測(cè)，然后使用凝膠電泳自動(dòng)成像儀進(jìn)行觀察和拍照。

1.2.2 血脂檢測(cè) 采用酶法分別檢測(cè)血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)；檢測(cè)儀器為奧林巴斯5821全自動(dòng)生化分析儀。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

使用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用t檢驗(yàn)計(jì)量資料的組間比較結(jié)果，采用χ2檢驗(yàn)分類資料的組間構(gòu)成比，P＜0.05說明具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 apoE基因多態(tài)性同心腦血管疾病的相關(guān)性

E3/3型比例在兩組人群中的比例最高；觀察組E2/3和E3/4所占比例高于對(duì)照組，而E3/3型低于對(duì)照組，比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），見表1。

2.2 apoE基因多態(tài)性同血脂之間的關(guān)系

通過對(duì)兩組患者的血清總膽固醇（TC）、甘油三脂（TG）及HDL-C進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示觀察組TC、TG 和HDL-C指標(biāo)顯著高于對(duì)照組，其中觀察組患者中E4/4比例最高的其總膽固醇水平明顯高于無E4/4的患者，而患者中E2/3比例最高的甘油三脂水平明顯高于無E2/3的患者，比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。見表2。

2.3 apoE基因多態(tài)性同心腦血管疾病的相關(guān)性分析

apoE不同基因型在腦出血、高血壓、冠心病等腦梗死合并癥患者中所占比例，E2/3、E3/4型所占比例均高于對(duì)照組人群，而E3/3型所占比例均低于對(duì)照組，而E3/3型在無合并癥的患者中所占比例較高，比較結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。見表3。

表1 對(duì)照組和觀察組的apoE基因型的對(duì)比情況

表2 觀察組患者不同apoE基因型之間的血脂指標(biāo)對(duì)比

表3 apoE基因多態(tài)性同心腦血管疾病的相關(guān)性對(duì)比

3 討論

載脂蛋白E(apoE)構(gòu)成血漿脂蛋白的重要成分，主要通過肝臟合成，通常在低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL)廣泛存在。apoE基因多態(tài)性同許多疾病具有相關(guān)性，例如高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病以及腦卒中等[2]。通過采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法對(duì)人基因組DNA中的apoE片段進(jìn)行擴(kuò)增,然后在 聚 丙 烯 酰 胺 凝 膠 電 泳 (polyacrylamide gelelectrophoresis，PAGE)對(duì)apoE的基因型進(jìn)行檢測(cè),通過對(duì)apoE基因多態(tài)性在心腦血管疾病患者及健康人群中的分布情況進(jìn)行研究，并聯(lián)合血脂和脂蛋白等多項(xiàng)指標(biāo)，從而分析apoE基因多態(tài)性同心腦血管疾病、心腦血管合并癥以及血脂水平之間的相關(guān)性。Chow dhury等通過分析147例心腦血管疾病患者、80例腦出血患者以及190健康人群，結(jié)果證明E3/4以及E4等位基因是導(dǎo)致腦血栓的高危因素，E2等位基因是導(dǎo)致腦出血的高危因素[3]。Kokub等研究證明E2和E4基因是導(dǎo)致腦血栓和腦出血的高危因素，并且同患者的年齡因素具有相關(guān)性。導(dǎo)致結(jié)果不一致性的因素是多方面的。首先引發(fā)心腦血管疾病的高危因素還有遺傳因素、環(huán)境因素、年齡因素等其他因素共同作用；其次選擇病例時(shí)，需要大量的樣本才能完成更加深入的研究。盡管不同研究者的研究結(jié)果不盡相同，但apoE基因多態(tài)性是導(dǎo)致心腦血管疾病的高危因素已經(jīng)普遍得到肯定。其致病原理是apoE基因多態(tài)性通過影響脂質(zhì)代謝最終導(dǎo)致心腦血管疾病的發(fā)生，并對(duì)疾病的預(yù)后也起到相應(yīng)的影響。ApoE能夠調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，apoE不同類型的異構(gòu)體對(duì)血漿脂質(zhì)水平造成的影響有明顯的差異。大部分研究認(rèn)為，apoE多態(tài)性不會(huì)對(duì)HDL-C及apoA1起到明顯的作用；E2不會(huì)對(duì)LD受體以及apoE受體產(chǎn)生親和力，而E3和E4之間的親和力沒有顯著差異；E2比例較高的個(gè)體其血脂變化為甘油三酯出現(xiàn)升高，E4比例較高的個(gè)體其血脂變化為總膽固醇出現(xiàn)升高但甘油三酯沒有明顯變化[4]。

本次研究發(fā)現(xiàn)：apoE基因分布情況，心腦血管疾病患者中，載脂蛋白E2和E4等位基因比例顯著高于健康人群，E3等位基因比例顯著低于健康人群，比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；血脂變化方面，E2等位基因同甘油三酯水平升高具有相關(guān)性，E4等位基因同總膽固醇水平升高具有相關(guān)性，說明載脂蛋白E2 和E4基因是導(dǎo)致心腦血管疾病的高危因素。

［1］ 黃剛，袁剛，汪道文.載脂蛋白及其基因多態(tài)性與冠心病的關(guān)系[J].臨床內(nèi)科雜志，2008，21（02）：114-115.

［2］ 王永卿，吳嬋娟，姚敏，張應(yīng)愛，鄭玲玲.黎族心腦血管疾病患者apoE基因多態(tài)性分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2012，18（04）：227-228.

［3］ 馬娟，田青.血脂代謝相關(guān)基因與冠心病的關(guān)系[J].云南醫(yī)藥，2009，18（05）：178-179.

［4］ 王永卿，周凱玲，姚敏，符先先，鄭青，鐘祥旭.黎族心腦血管疾病患者載脂蛋白E基因多態(tài)性與血脂的關(guān)系[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2012，23（08）：376-377.

李婷，1977年生，女，漢族，紅河蒙自人，主管技師，主要從事生化檢驗(yàn)方面的工作。