李曉艷

（山西省醫(yī)藥與生命科學(xué)研究院，山西太原030006）

分光光度法測(cè)定兩種納豆總黃酮的方法研究及含量分析*

李曉艷**

（山西省醫(yī)藥與生命科學(xué)研究院，山西太原030006）

采用紫外分光光度法，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)納豆、苦蕎納豆中總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定分析。試驗(yàn)結(jié)果顯示，蘆丁在0.0 μg/mL～25.3 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R2=0.999 8），平均回收率為98.94%，RSD為1.42%。納豆中總黃酮含量0.33 g/kg，苦蕎納豆中總黃酮含量0.78 g/kg。結(jié)果表明，采用紫外分光光度法可以簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的測(cè)定納豆、苦蕎納豆中總黃酮含量，苦蕎納豆中總黃酮含量比納豆中總黃酮含量高出136%。

紫外分光光度法；納豆；苦蕎納豆；總黃酮；含量測(cè)定

納豆是日本傳統(tǒng)的大豆發(fā)酵食品，富含蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、各種氨基酸和礦物質(zhì)等多種營(yíng)養(yǎng)成分，還含有其他食品中所沒有的各種生物酶，尤其是含有強(qiáng)烈纖溶活性的酶——納豆激酶。納豆對(duì)溶解血栓、預(yù)防心腦血管疾病有重要的現(xiàn)實(shí)意義。傳統(tǒng)納豆放置數(shù)天后會(huì)產(chǎn)生氨味，保存性差，且很不適合中國(guó)人口味，嚴(yán)重影響了納豆食品在我國(guó)的普及與推廣。為改善納豆風(fēng)味，提高納豆品質(zhì)，在傳統(tǒng)納豆中添加一定比例的苦蕎麥組合發(fā)酵，研制出苦蕎納豆，其具有較好的食用風(fēng)味?？嗍w麥?zhǔn)侵鳟a(chǎn)于我國(guó)四川涼山地區(qū)和山西省晉北地區(qū)的高原作物。據(jù)《本草綱目》記載：苦蕎麥味苦，性平寒，能實(shí)腸胃、益氣力、續(xù)精神、利耳目，煉五臟渣穢?？嗍w麥主要功效成分為苦蕎黃酮，具有降血糖、降血脂、抗腫瘤、抗炎、抗衰老、增加人體免疫力的作用。關(guān)于苦蕎納豆發(fā)酵工藝的研究，國(guó)內(nèi)外雖有報(bào)道，但對(duì)苦蕎納豆總黃酮的含量分析研究至今尚未見報(bào)道。為此，開展該產(chǎn)品保健功效成分總黃酮的分析研究很有必要。

1 材料與儀器

1.1 材料

納豆，自制，150 g/瓶，批號(hào)分別為20130611、20130612、20130613；苦蕎納豆，自制，150 g/瓶，批號(hào)分別為20130601、20130602、20130603；甲醇，分析純，天津市標(biāo)準(zhǔn)科技有限公司；乙醇，分析純，成都市科龍化工試劑廠；聚酰胺粉，100～200目，浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠；苯，分析純，成都市科龍化工試劑廠；蘆丁，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100080-200306。

1.2儀器

UV757CRT紫外可見分光光度計(jì)，上海精科；KQ-250B型超聲波清洗儀，江蘇省昆山市超聲儀器廠；290SCS電子天平，瑞士PRECISA；層析柱，直徑1.0 cm。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液制備

取供試品適量，研磨搗碎后精密稱取3 g，置于具塞錐形瓶中，加入25 mL乙醇，稱定重量，超聲提取20 min，放冷后再次稱定重量，用乙醇補(bǔ)足失重，搖勻，靜置，精密吸取上清液2 mL于蒸發(fā)皿中，加1 g聚酰胺粉吸附，于水浴鍋上揮去乙醇，轉(zhuǎn)入層析柱。先用20 mL苯洗，棄去苯液，再用甲醇洗脫并定容至25 mL，即得。

2.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱取蘆丁對(duì)照品5.0 mg，加甲醇溶解并定容至100 mL，即得。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液：0.0 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。以甲醇為空白，采用分光光度法，于波長(zhǎng)360 nm測(cè)定吸光度。以質(zhì)量濃度c（μg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖1。求得回歸方程為D=0.023c-0.001，R2=0.999 8，表明蘆丁質(zhì)量濃度在0.0 μg/mL～25.3 μg/mL范圍內(nèi)，與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批苦蕎納豆樣品（批號(hào)：20130603）6份，按2.1方法制備供試品溶液，以甲醇為空白，采用分光光度法，于波長(zhǎng)360 nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算樣品中總黃酮含量，結(jié)果見表1。由表1結(jié)果可知，采用該方法提取與檢測(cè)，重復(fù)性良好。

表1 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別于0 min、15 min、30 min、45 min、60 min、90 min后測(cè)定吸光度，結(jié)果見表2。由表2結(jié)果可知，供試品溶液在90 min內(nèi)基本穩(wěn)定。

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.6 加樣回收試驗(yàn)

精密稱取已知含量的供試品（0.783 g/kg）0.5 g，共5份，精密加入0.401 6 mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液（0.100 4 mg/mL）4 mL，按照2.1方法制備供試品溶液，記錄吸光度，計(jì)算總黃酮含量，結(jié)果見表3。由表3結(jié)果可知，供試品溶液的制備及測(cè)定方法合理可行。

表3 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=5）

2.7 樣品測(cè)定

取不同批次的苦蕎納豆和納豆，按照2.1的方法制備供試品溶液，依法測(cè)定吸光度，計(jì)算總黃酮含量，每個(gè)批號(hào)樣品平行測(cè)定2次，結(jié)果見表4。

表4 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

綜上所述，采用該方法提取、測(cè)定苦蕎納豆中總黃酮含量線性良好，穩(wěn)定性好，重復(fù)性和加樣回收試驗(yàn)結(jié)果符合要求，可用于兩種納豆中總黃酮含量測(cè)定。

從測(cè)定結(jié)果來看：苦蕎納豆產(chǎn)品中總黃酮含量比普通納豆產(chǎn)品中提高了136%。眾所周知，納豆是大豆的發(fā)酵產(chǎn)物，且大豆中含有豐富的黃酮類化合物，具有多種生理活性?？嗍w納豆產(chǎn)品中不僅富含納豆的營(yíng)養(yǎng)成分，而且富含大豆異黃酮和苦蕎黃酮，兩種黃酮的生理效應(yīng)具有疊加作用。因此，大力開發(fā)本產(chǎn)品可更有效地為國(guó)民提供一種風(fēng)味可口、保健功效顯著的健康食品，同時(shí)也為企業(yè)制定該產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)依據(jù)。

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表7 穩(wěn)定劑復(fù)配正交試驗(yàn)方差分析

3 結(jié)論

通過正交試驗(yàn)確定糙米豆奶配方為：大豆9.0%、酶解糙米粉3.0%、白砂糖6.0%、棕櫚油1.5%，可獲得口感良好，香甜適口的糙米豆奶。其最佳復(fù)配穩(wěn)定劑成分為：微晶纖維素0.30%、卡拉膠0.013%、聚甘油脂肪酸酯0.100%、磷脂0.10%，該復(fù)配穩(wěn)定劑能有效控制產(chǎn)品分層及沉淀現(xiàn)象，并且對(duì)控制產(chǎn)品脂肪上浮效果良好。

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Study on spectrophotometric determ ination and analysis of flavonids in nattos*

LI Xiao-yan**
（Shanxi institute ofmedicine and life science，Shanxi Taiyuan 030006，China）

Determination of flavonoids in natto and tartary buckwheat natto by spectrophotometry was developed. Rutin was used as standard for comparison.The calibration curve was linear in the range of 0.0 μg/mL～25.3 μg/mL（R2=0.999 8）.The average recovery was 98.94%，RSD was 1.42%.The content of alavonoids in nattos was 0.33 g/kg，and that of 0.78 g/kg in tartary buckwheat natto.Results showed this method was simple,fast,and accurate to determinate the flavonoids in nattos.

spectrophotometry；natto；tartary buckwheat natto；flavonoids；contents determination

TS207.5+1

A

1673-6044（2014）03-0058-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2014.03.018

山西省中藥現(xiàn)代化提取分離技術(shù)平臺(tái)建設(shè)（051016-1）。

**李曉艷，女，1980年出生，2004年畢業(yè)于山西中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)專業(yè)，工程師。

2014-07-31