劉正愛(ài)

鄒城市婦幼保健院生殖科，山東 鄒城 273500

56例復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者免疫治療的臨床特征觀(guān)察與分析

劉正愛(ài)

鄒城市婦幼保健院生殖科，山東 鄒城 273500

目的觀(guān)察同種免疫型復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)（RSA）淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療臨床效果。方法對(duì)我院不孕不育生殖中心就診治療900余例復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)（2～5次）患者進(jìn)行臨床分類(lèi)和病因篩查，對(duì)資料完整的患者進(jìn)行病因分析。結(jié)果56例治療后再次妊娠34人，已有活產(chǎn)患者19人，轉(zhuǎn)陰后成功妊娠者34人，APLA陰性成功妊娠5人。結(jié)論淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療，能促使封閉抗體轉(zhuǎn)陰并提高復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者再次妊娠保胎成功率。孕前孕后淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療，保胎成功率高，孕后才做淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療，保胎成功率較孕前免疫治療成功率明顯降低。重點(diǎn)篩查流產(chǎn)原因，綜合保胎治療可提高保胎成功率。

復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)；封閉抗體；淋巴細(xì)胞免疫治療

1 資料和方法

1.1 臨床資料

2011年1月～2013年8月，在鄒城市婦幼保健院不孕不育生殖中心就診的免疫治療復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)的患者500例，年齡28～42歲，其中56例APLA陰性患者采用淋巴細(xì)胞免疫療法進(jìn)行血清封閉抗體的檢測(cè)。本中心不孕專(zhuān)科門(mén)診對(duì)同種免疫型復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者給予淋巴細(xì)胞免疫治療（LIT），所有患者均自愿接受治療并簽署知情同意書(shū)。

1.2 免疫治療前檢查

雙方檢查血常規(guī)、ABO及Rh血型，丙肝lgM、乙肝二對(duì)半，HIV、RPR，供血者檢查無(wú)異常方可做免疫治療。若供血者檢查異常，選用第三方供血。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

檢測(cè)試劑盒由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程研究所灝洋生物聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室監(jiān)制、天津市灝洋生物制品有限責(zé)任公司提供，按試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行操作。每次間隔2～3周注射1次，3次為一療程，治療過(guò)程中囑患者避孕，療程結(jié)束后，鼓勵(lì)患者在6個(gè)月內(nèi)受孕，妊娠后每周1次，繼續(xù)治療2～3次。

操作簡(jiǎn)便，結(jié)果方便易讀，檢測(cè)位點(diǎn)4個(gè)，靈敏度高，特異性好，結(jié)果可靠。

1.4 方法

1.4.1 準(zhǔn)備10 ml移液管，標(biāo)注患者姓名及編號(hào)，加人淋巴細(xì)胞分離液分別注入15ml無(wú)菌離心管，每管4 ml，共5管，與血液比為1∶1。

1.4.2 在無(wú)菌條件下抽取丈夫靜脈血30 ml，肝素抗凝（10∶1）。

1.4.3 分別吸取丈夫6 ml靜脈血，傾斜離心管沿管壁緩慢加在人淋巴分離液上，注意一定要緩慢加入，以免跟分離液混勻而致分界不清，影響分離效果。

1.4.4 離心。3 000轉(zhuǎn)/10 min。

1.4.5 提取淋巴細(xì)胞洗滌。離心結(jié)束后，用吸管吸取中間層，富含淋巴細(xì)胞的細(xì)胞轉(zhuǎn)至無(wú)菌試管中，并加無(wú)菌生理鹽水至8 ml，混勻。

1.4.6 離心。進(jìn)行離心洗滌。棄上清，加生理鹽水反復(fù)洗滌混勻，3 000轉(zhuǎn)/10 min進(jìn)行第二次離心洗滌。

1.4.7 重復(fù)洗滌3次，3 000轉(zhuǎn)/10 min。

1.4.8 徹底棄上清，留沉渣，加入生理鹽水2 ml于離心管內(nèi)輕輕吹打均勻。將全部液體轉(zhuǎn)至另一無(wú)菌的5 ml離心管內(nèi)。

1.4.9 計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞吸取5 μl混勻提取液于一潔凈的載玻片上，蓋上，22×22 mm蓋玻片。放置1 min，在顯微鏡下計(jì)數(shù)，總放大倍數(shù)為400倍，據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果調(diào)整淋巴細(xì)胞濃度為（20～60）108/ml，混勻備用[1]。

1.4.10 消毒接受免疫者用1 ml無(wú)菌針管皮內(nèi)注射前臂6～8個(gè)小皮丘，盡量避開(kāi)血管。

2 結(jié)果

2.1 患者治療一個(gè)周期后指標(biāo)變化情況分析

研究中，分別在0周、1周、3周、5周時(shí)，采丈夫靜脈血30 ml通過(guò)內(nèi)注射的方式將丈夫的淋巴細(xì)胞注入到妻子體內(nèi)。

2.2 患者治療3個(gè)療程后轉(zhuǎn)陽(yáng)率分析

詳見(jiàn)表1。

表1 3個(gè)療程后轉(zhuǎn)陽(yáng)率結(jié)果

2.3 患者免疫治療后相關(guān)指標(biāo)分析

轉(zhuǎn)陽(yáng)后妊娠率56例再次妊娠34人，妊娠率60.7% （34/56），已有活產(chǎn)患者19人，占33.9%（19/56），轉(zhuǎn)陽(yáng)后成功妊娠者34人，占87.2%，（34/39），APLA陰性成功妊娠5人，占12.8%（5/39）。

2.4 淋巴細(xì)胞注射副作用

注射淋巴細(xì)胞后均有程度不同的注射皮丘部位發(fā)紅、瘙癢或腫大，1例過(guò)敏。1例發(fā)生全身團(tuán)塊狀蕁麻疹；首次注射淋巴細(xì)胞后一周，皮膚出現(xiàn)數(shù)個(gè)散在淤血點(diǎn)，口服抗過(guò)敏藥西替利嗪后好轉(zhuǎn)；第二次淋巴細(xì)胞注射后再次出現(xiàn)皮膚淤血點(diǎn)，較第一次淤血點(diǎn)明顯減少；第三次注射后未發(fā)生皮膚瘀斑，未發(fā)生血液傳染病感染。

表2 免疫治療后封閉抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)后妊娠結(jié)果

3 討論

3.1 復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的病因比較復(fù)雜，有學(xué)者認(rèn)為：HLA抗原基因多態(tài)性與復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)關(guān)系密切的HLA基因可能是免疫治療妊娠結(jié)局有價(jià)值的預(yù)測(cè)因子。復(fù)發(fā)性流產(chǎn)夫婦間白細(xì)胞抗原共容性大主要在HLA-A、HLA-B、HLADR、HLA-DQA1的位點(diǎn)[2]。

3.2 本研究中，接受治療的56名患者中，陰性者7人，占12.5%（7/56），APLA陰性成功妊娠者5人，占8.93%（5/56），這可能是因?yàn)橹鲃?dòng)免疫治療使這些患者誘發(fā)了由細(xì)胞免疫參與的免疫抑制，使封閉效應(yīng)增強(qiáng)反應(yīng)。

3.3 有明確病因者應(yīng)盡快開(kāi)展相應(yīng)治療，綜上所述，對(duì)于復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者進(jìn)行APLA的檢測(cè)是非常必要的。APLA陰性的患者應(yīng)常規(guī)行淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療，提高APLA的陽(yáng)性率及再次妊娠的成功率，淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)安全有效。APLA水平變化的監(jiān)測(cè)，對(duì)指導(dǎo)復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者妊娠及對(duì)再次妊娠的結(jié)局有良好的指導(dǎo)意義。

3.4 本研究對(duì)淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療能促使封閉抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)并提高復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者再次妊娠保胎成功率。孕前孕后淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療保胎成功率高，表明封閉抗體陽(yáng)性對(duì)復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)的必要性，但本中心接受免疫治療的患者數(shù)相對(duì)較少，今后進(jìn)一步對(duì)治療的患者進(jìn)行分析觀(guān)察與研究，并對(duì)患者遠(yuǎn)期安全性進(jìn)行跟蹤觀(guān)察和分析，因此對(duì)免疫治療的遠(yuǎn)期療效有待于今后工作中進(jìn)行樣本長(zhǎng)時(shí)間觀(guān)察，進(jìn)一步驗(yàn)證結(jié)果，以提高妊娠保胎成功率。

[1]林其德. 現(xiàn)代生殖免疫學(xué)[M]. 1版. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：157-173.

[2]李杰蘭, 馬衛(wèi)軍. 主動(dòng)免疫治療不明原因復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)的臨床分析[J]. 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2012, 33(14): 1865-1866.

R271.9

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1674-9308（2014）06-0035-02

10.3969/J.ISSN.1674-9308.2014.06.023