李海平，陳瑞戰(zhàn)，金辰光，蔡 艷，陸 娟，劉春明，蘇麗紅

（長春師范大學(xué)化學(xué)學(xué)院，吉林長春130032）

黃芩為唇形科植物黃芩（Scutellaria baicalensis Georgi）的干根，別名為山茶根、土金茶根，含有黃酮類[1]、苷類[2]、多糖類[3]、萜類[4]、揮發(fā)油[5]等活性成分，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化、抗菌、抗病毒、抗輻射、抗炎、解熱等多種藥理活性[6]。

多糖是由10個分子以上單糖通過糖苷鍵結(jié)合而成的高分子碳水化合物，廣泛存在于植物、菌類等有機體中，不僅是組織細(xì)胞的結(jié)構(gòu)材料，而且參與生命體中各種細(xì)胞的活動，能夠控制細(xì)胞的分裂、分化，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長和衰老，具有抗腫瘤[7]、免疫調(diào)節(jié)[8]、抗氧化[9]等廣泛的藥理活性。多糖的常規(guī)提取方法是熱回流提取、熱水浸泡提取或稀酸（堿）浸泡提取，常規(guī)提取需要較長的時間、較高的能耗、較低的提取效率，且容易引起多糖的結(jié)構(gòu)變化和活性的降低[10]。超聲提取是當(dāng)一定頻率的大量超聲波作用于提取液時，溶液中尺寸適宜的小泡產(chǎn)生共振，小泡隨聲波的變化而迅速脹大和壓縮，從而產(chǎn)生高壓沖擊波，這種強烈的沖擊作用能使固體原料破碎，也能造成生物細(xì)胞壁及整個生物體破裂，加速細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的釋放、溶解和擴散，從而可大幅提高有效成分的提取率、縮短提取時間，降低能量消耗[11]。

本文以黃芩根為原料，采用超聲提取其中的多糖；在單因素實驗的基礎(chǔ)上，運用響應(yīng)面設(shè)計構(gòu)建定量描述多糖提取得率與各工藝參數(shù)的數(shù)學(xué)模型，進而優(yōu)化得出最佳提取工藝條件，并評價粗多糖總抗氧化能力和對各種自由基的清除能力，為黃芩多糖的綜合利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

黃芩根 產(chǎn)自黑龍江，購于長春中藥材藥店；2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl（DPPH）、2，4，6-tripyridyl-s-trazine（TPTZ） 購于Sigma公司（St.Louis，MO，America）；番紅、鄰苯三酚 國藥集團化學(xué)試劑有限公司；硫酸亞鐵、30%過氧化氫 北京化工廠；抗壞血酸（VC） 上海試劑二廠；乙二胺四乙酸二鈉鹽、三氯化鐵、無水乙醇、濃硫酸、苯酚、葡萄糖等 均為國產(chǎn)分析純。

SL-2010N型多頻超聲波細(xì)胞粉碎儀 南京順流儀器有限公司；UV-2401型紫外-可見分光光度計日本島津公司；FA1604A型電子天平 Sartorius；RV10型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 德國IKA公司；DZ-2BCII型真空干燥箱 天津泰斯特；FD-1-50型冷凍干燥機 北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司；GSY-11型恒溫水浴箱 北京市醫(yī)療設(shè)備廠；SHB-B88型循環(huán)水式多用真空泵 菏澤市生化儀器廠；TDL-40B型離心機 上海安亭科學(xué)儀器廠；LK-200A型高速中藥粉碎機 浙江溫嶺市創(chuàng)力藥材器材制造；Tecan型酶標(biāo)儀 奧地利GENios ELIASA公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 原料預(yù)處理 黃芩根切片，60℃下真空干燥24h，用高速中藥粉碎機粉碎成粉末，于500m L圓底燒瓶中加入石油醚回流脫脂、脫色兩次，每次2h，抽濾，濾渣揮干溶劑備用。

1.2.2 粗多糖超聲提取 準(zhǔn)確稱取黃芩預(yù)處理樣品5g于提取瓶中，加入蒸餾水150m L，浸泡6h，用多頻超聲波細(xì)胞粉碎儀，在一定溫度（40～80℃）、超聲功率（600～1200W）條件下，提取一定時間（10～50min），減壓過濾，濾液減壓濃縮至一定體積，加95%乙醇至最終乙醇濃度為70%，在4℃溫度下沉化24h，減壓過濾，沉淀用適量蒸餾水溶解，用Sevag法除去游離蛋白質(zhì)，裝于截留分子量3500u透析袋，用蒸餾水透析48h，除去單糖、無機鹽等小分子成分，凍干得黃芩粗多糖，采用苯酚-硫酸法測量多糖含量[12]，計算提取得率：提取率（%）=（黃芩多糖質(zhì)量/黃芩原料質(zhì)量）×100。

1.2.3 多糖含量的測定 以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，采用苯酚-硫酸法測定多糖含量。精密稱取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品1g，溶解后定容成50m L，然后稀釋成0.25mg/m L標(biāo)準(zhǔn)液。準(zhǔn)確量取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8m L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液于試管中，加蒸餾水至2.0m L，然后分別加入1.0m L 5%苯酚溶液，振蕩，迅速加入5m L濃H2SO4，置于沸水浴中恒溫20m in，取出冷卻至室溫，于490nm波長下，以試劑空白（2m L蒸餾水代替葡萄糖）為參比，測定吸光值。

1.2.4 單因素實驗 以黃芩粗多糖提取得率為指標(biāo)，分別考察超聲時間（10、20、30、40、50m in）、提取溫度（40、50、60、70、80℃）和超聲功率（600、750、900、1050、1200W）對黃芩粗多糖提取得率的影響。

1.2.5 響應(yīng)面法優(yōu)化提取工藝 在單因素實驗基礎(chǔ)上，采用Box-Benhnken Design實驗設(shè)計方案，以超聲時間（X1）、提取溫度（X2）和超聲功率（X3）為考察變量，以黃芩粗多糖提取得率（Y）為響應(yīng)值，應(yīng)用Design-Expert 6.0軟件，建立數(shù)學(xué)回歸模型，確定黃芩粗多糖的最佳超聲提取工藝參數(shù)。實驗因素和水平設(shè)計見表1。

表1 實驗因素水平及編碼Table1 Factors and levels of response surface experiments

1.2.6 總抗氧化活性測定 分別配制pH 3.6的300mmol/L醋酸鈉緩沖液，10mmol/L TPTZ溶液（溶解在40mmol/L鹽酸中）和20mmol/L FeCl3溶液，并以10∶1∶1（v∶v∶v）的比例混合配制成FRAP試劑（現(xiàn)用現(xiàn)配）；取5μL不同濃度樣品（1、2、3、4、5mg/m L）或標(biāo)準(zhǔn)品溶液加入96孔板中，迅速加入FRAP試劑150μL。在592nm波長下測定0m in和4m in時樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值，每個樣品平行測定三次，以500μmol/L VC溶液作為標(biāo)準(zhǔn)品，計算樣品的FRAP值，實驗結(jié)果按此計算：FRAP值（μmol/L）=（0-4minΔA592樣品）/（0-4min ΔA592標(biāo)準(zhǔn)品）×500

1.2.7 對羥基自由基的清除作用 利用Fenton反應(yīng)檢測各種自由基清除劑對羥基自由基（·OH）的清除作用?！H由EDTANa2-Fe（II）-H2O2體系產(chǎn)生，由于·OH可特異地使番紅褪色，根據(jù)褪色程度用比色法來衡量·OH的含量。反應(yīng)體系中加入1.0m L pH為7.4的磷酸緩沖液，0.2m L番紅（520μg/m L），1.0m L EDTANa2-Fe（II），再加入1.0m L不同濃度的樣品溶液，最后加入0.8m L 6%的H2O2，于40℃水浴保溫30m in，在波長514.9nm處測定吸光值（A樣品）。每個樣品濃度作三個平行樣，取其平均值。空白組以等體積的重蒸水代替樣品溶液（A空白）；對照組以等體積的重蒸水代替樣品溶液和EDTANa2-Fe（II）溶液（A對照）。實驗結(jié)果以清除率表示：清除率（%）=（A樣品-A空白）/（A對照-A空白）×100。

1.2.8 對DPPH自由基的清除作用 取不同濃度的樣品溶液40μL于96孔板中，分別加入200μL（6.5×10-5mol/L）DPPH甲醇溶液，避光反應(yīng)30min，于515nm波長下測定吸光值A(chǔ)i。對DPPH·的清除率可表示為：清除率（%）=[1-（Ai-Aj）/Ac]×100，其中：Ai為DPPH·與樣品反應(yīng)后的吸光度，Aj為空白樣品（40μL樣品+200μL甲醇）的吸光度，Ac為未加樣的DPPH·（40μL水+200μL DPPH·）的吸光度，每一待測樣品平行測定三次，取其平均值。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實驗結(jié)果

2.1.1 超聲時間對多糖提取率的影響 固定料液比1∶30（g/m L）、提取溫度60℃、超聲功率600W，考察超聲時間10、20、30、40、50min對黃芩粗多糖提取率的影響，結(jié)果如圖1所示。由圖1可知，提取時間在30m in內(nèi)，黃芩多糖提取得率隨超聲時間的延長逐漸增大，這說明在該段時間范圍內(nèi)，增加超聲時間，超聲波對黃芩細(xì)胞組織的影響程度增加，多糖的溶解更加完全，同時利于多糖由固體組織內(nèi)部充分?jǐn)U散到周圍提取溶劑中；但超聲時間超過30m in后，多糖提取率隨超聲時間的增加而緩慢降低，這可能是由于在較強的超聲波作用下，超過一定超聲時間導(dǎo)致多糖部分降解，致使多糖提取得率降低。因此，超聲時間選擇30m in較為適宜。

圖1 超聲時間對提取率的影響Fig.1 Effectof ultrasonic time on the extraction yield

圖2 提取溫度對提取率的影響Fig.2 Effectof extraction temperature on the extraction yield

2.1.2 提取溫度對多糖提取率的影響 固定料液比1∶30（g/m L）、超聲時間30m in、超聲功率600W，考察提取溫度40、50、60、70、80℃對黃芩多糖提取率的影響，結(jié)果如圖2所示。由圖2可知，在40～60℃溫度范圍內(nèi)，多糖提取得率隨提取溫度的增加而快速增加，在這一溫度范圍內(nèi)，溫度升高多糖溶解度增大，多糖由固體組織內(nèi)部向周圍提取溶劑的擴散速率增大，因此多糖提取率快速提高，在60℃時多糖提取得率達(dá)到峰值；但超過60℃后多糖提取得率快速下降，這主要是由于在超聲提取的過程中會釋放大量的能量，提取溫度過高可能會造成大分子多糖糖苷鍵斷裂，導(dǎo)致多糖的結(jié)構(gòu)變化、提取得率降低，這一現(xiàn)象在其他多糖的超聲提取過程也已發(fā)現(xiàn)[13]。因此，采用超聲波輔助提取黃芩多糖時，應(yīng)選用60℃左右的溫度比較適宜。

2.1.3 超聲功率對多糖提取率的影響 固定料液比1∶30（g/m L）、提取溫度60℃、超聲時間30m in，考察超聲功率600、750、900、1050、1200W對黃芩粗多糖提取得率的影響，結(jié)果如圖3所示。由圖3可以看到，超聲功率在600～750W范圍內(nèi)，多糖提取率隨超聲功率的增加而快速增加。但功率超過750W時，多糖提取得率隨功率增加快速降低，說明較高的超聲功率會產(chǎn)生較強的空化和剪切效應(yīng)，這些強烈的作用不僅能破壞細(xì)胞壁，也可能導(dǎo)致多糖的快速降解，當(dāng)降解的速率超過多糖增加的速率，會造成多糖提取率的下降。而且對于特定的物質(zhì)來說，超聲波作用效果與超聲功率、提取物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)有關(guān)系。不同的提取物需要不同的超聲功率。所以，黃芩多糖的超聲提取選用750W超聲功率較為適宜。

圖3 超聲功率對提取得率的影響Fig.3 Effectof ultrasonic power on the extraction yield

2.2 響應(yīng)面設(shè)計實驗結(jié)果

表2 Box-Behnken實驗設(shè)計方案及結(jié)果Table2 Box-Behnken designmatrix and response values

2.2.1 Box-Behnken設(shè)計方案 根據(jù)單因素實驗結(jié)果，選擇超聲時間（X1）、提取溫度（X2）以及超聲功率（X3）3個因素，以黃芩粗多糖提取率（Y）為響應(yīng)值進行優(yōu)化，根據(jù)Box-Behnken的中心組合實驗設(shè)計原理[14]，設(shè)計3因素3水平的實驗方案，實驗結(jié)果見表2。

2.2.2 回歸方程的構(gòu)建和方差分析 通過SAS數(shù)據(jù)分析軟件對表2中的響應(yīng)面實驗結(jié)果進行回歸分析，以黃芩粗多糖的提取得率（Y）為因變量，超聲時間（X1）、提取溫度（X2）以及超聲功率（X3）為自變量，進行回歸擬合，得到回歸方程：

對上述回歸模型進行F檢驗，判定回歸方程中各變量對響應(yīng)值影響的顯著性，概率越小，則相應(yīng)變量的顯著程度越高，方差分析結(jié)果見表3。

表3 響應(yīng)面回歸模型的方差分析結(jié)果Table3 ANOVA for response surface quadraticmodel

由方差分析表3可以看出，各因素對提取率影響次序為：超聲功率＞提取溫度＞超聲時間。模型F= 30.6139，p＜0.0001差異有統(tǒng)計學(xué)意義，說明建立的模型極顯著（p＜0.01）；失擬項F=0.826，失擬項相對于絕對誤差不顯著，說明模型的擬合程度良好，未知因素對實驗結(jié)果干擾很小。模型R2=0.975，Ad j R2=0.943，表明模型與實際實驗擬合較好，實驗誤差較小，可以用此模型對黃芩多糖的超聲提取進行分析和預(yù)測。

2.2.3 響應(yīng)面分析 超聲提取過程中，各因素對黃芩多糖提取率影響的三維響應(yīng)曲面見圖4～圖6。響應(yīng)面圖形是響應(yīng)值Y對應(yīng)于實驗因素X1、X2、X3所構(gòu)成的三維空間的曲面圖，響應(yīng)面圖可以直觀的反映各因素及它們之間的交互作用對響應(yīng)值的影響。

固定超聲功率750W，超聲時間和提取溫度對提取率的交互影響如圖4所示，在20～31m in超聲時間內(nèi)，隨超聲時間的增加，多糖提取率逐漸增加，在該段時間范圍內(nèi)延長超聲時間有利于多糖的提取，當(dāng)超聲時間超過31m in后出現(xiàn)提取得率緩慢降低的趨勢，發(fā)生這一現(xiàn)象的可能原因是長的超聲時間導(dǎo)致了多糖的降解[15]；而在50～63.8℃提取溫度范圍內(nèi)，提取率隨溫度的增加快速增加，當(dāng)提取溫度超過63.8℃時，隨提取溫度的增加提取率快速降低，發(fā)生這一現(xiàn)象的原因除了在較高的溫度和較強的超聲波作用多糖可能降解之外，另一方面隨溫度的升高超聲波的空化效應(yīng)降低，從而導(dǎo)致提取率的降低[16]。綜合看出提取溫度對提取率的影響相對較大。

圖4 超聲時間和提取溫度對提取得率影響的響應(yīng)面圖Fig.4 Response surface plots showing the effectof ultrasonic time and extraction temperature on extraction yield

固定提取溫度60℃，超聲時間和超聲功率對提取率的交互影響如圖5所示。由圖5可以看到，超聲時間和超聲功率的等值線圖呈現(xiàn)顯著的橢圓形，說明二者的交互作用較強。在20～27.5m in的超聲時間和600～675W的超聲功率范圍內(nèi)，提取率隨時間和功率的增加由10.2%逐漸增加到11.1%；之后隨提取時間和超聲功率的增加，提取率逐漸降低。說明在較強的超聲功率作用下，在短時間內(nèi)多糖的溶解和擴散即可達(dá)到平衡，而過高的超聲功率和長的超聲時間共同的作用結(jié)果會成提取率的降低。

圖5 超聲時間和超聲功率對提取得率影響的響應(yīng)面圖Fig.5 Response surface plots showing the effectof ultrasonic time and ultrasonic power on extraction yield

固定超聲時間30m in，提取溫度和超聲功率對提取率的交互影響如圖6所示。由圖6可以看到，多糖提取率隨超聲功率和提取溫度的增加逐漸增加，在超聲功率為787W、提取溫度為61.5℃時多糖提取得率達(dá)到最大值11.1%，之后隨超聲功率和提取溫度的增加逐漸降低，說明在一定的范圍內(nèi)增加超聲功率和提取溫度都有利于多糖提取率的增加，但過分增加超聲功率和提取溫度也都會造成提取率的降低，適宜的超聲功率和提取溫度對黃芩多糖的提取是十分必要的。

圖6 提取溫度和超聲功率對提取得率影響的響應(yīng)面圖Fig.6 Response surface plots showing the effectof extraction temperature and ultrasonic power on extraction yield

2.2.4 最優(yōu)提取工藝的確定 通過對響應(yīng)面圖以及利用Design-Expert 6.0的軟件對實驗數(shù)據(jù)的優(yōu)化分析，確定了超聲提取黃芩多糖的最佳提取條件：超聲時間30.05m in，提取溫度60.12℃，超聲功率754.8W，該條件下黃芩多糖理論提取率為12.16%?？紤]到實驗的可操作性，把上述優(yōu)化提取條件修正為超聲波提取時間為30min，超聲波提取溫度為61℃，超聲波功率為755W，重復(fù)3次進行驗證實驗，得到黃芩多糖平均提取率為12.95%，相對預(yù)測值的誤差為0.65%，相對誤差不到1%，驗證了模型的可行性。因此應(yīng)用響應(yīng)面法優(yōu)化超聲提取黃芩多糖獲得的工藝參數(shù)是可靠的，具有一定的實用價值。

2.3 抗氧化活性

2.3.1 黃芩粗多糖的總抗氧化活性 FRAP法反映的是樣品總的還原能力，一些學(xué)者因此認(rèn)為該法測定結(jié)果可用來反映樣品總抗氧化活性[17]。以VC溶液作為標(biāo)準(zhǔn)品，不同濃度的粗多糖的總抗氧化活性如圖7所示。從圖7可以看出，在實驗的濃度范圍內(nèi)，黃芩粗多糖具有較高的抗氧化活性，且抗氧化性與濃度成正相關(guān)關(guān)系。其抗氧化活性可能與多糖中單糖的組成、糖醛酸和蛋白質(zhì)含量、分子量分布范圍以及提取方法等多種因素有關(guān)[18]，但其作用機制有待于進一步研究。

圖7 黃芩多糖總抗氧化活性Fig.3 Antioxidant power（FRAP）of the crude polysaccharides from Scutellaria（n=3）

2.3.2 黃芩多糖對·OH的清除活性 ·OH是已知活性最強的活性氧自由基，可奪取蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的氧原子，引起機體氧化損傷，使機體抵抗力降低，導(dǎo)致癌變、過度衰老等多種疾病的發(fā)生，清除·OH的能力是評價抗氧化物質(zhì)的重要指標(biāo)[19]。由圖8可以看出，不同濃度黃芩多糖有較高的·OH清除活性，清除活性隨多糖濃度的逐漸增加，在1～3mg/m L的低濃度范圍內(nèi)，清除活性遠(yuǎn)低于VC，而在3～5mg/m L較高的濃度范圍內(nèi)對·OH的清除活性逐漸接近VC，說明該多糖有較高的·OH清除活性。

圖8 黃芩多糖·OH清除活性Fig.8 Scavenging activity to·OH of the crude polysaccharides from Scutellaria（n=3）

2.3.3 黃芩粗多糖對DPPH·的清除活性 DPPH·是一種以氮為中心，具有單電子的穩(wěn)定自由基，被廣泛地用于測定生物試樣以及食品等的抗氧化能力。DPPH·有的孤電子在517nm處有強的特征吸收，其醇溶液呈紫色，抗氧化劑可直接與孤對電子配對，使DPPH·吸收減弱，顏色從紫色逐漸減退，褪色程度與其接受的電子數(shù)量成量效關(guān)系，因此可以用分光光度法進行測定，定量反應(yīng)其抗氧化能力[20]。不同濃度黃芩多糖對DPPH·的清除作用結(jié)果見圖9。由圖9可知，黃芩多糖具有一定的DPPH·清除能力，清除率與多糖濃度呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系。特別是在濃度為5mg/m L時，黃芩多糖對DPPH·的清除率可達(dá)到94.22%，接近于該濃度下VC對DPPH·的清除率（98.34%）。這說明黃芩多糖具有較高的抗氧化活性，可以探索作為天然的抗氧化劑應(yīng)用于功能食品和藥品。

圖9 黃芩多糖DPPH·清除活性Fig.9 Scavenging activity to DPPH·of the crude polysaccharides from Scutellaria（n=3）

3 結(jié)論

在單因素實驗的基礎(chǔ)上，通過Box-Behnken實驗設(shè)計建立了超聲提取黃芩多糖的回歸模型，經(jīng)過方差分析建立的模型與實際實驗擬合較好，實驗誤差較小，可以用于提取率的預(yù)測分析；通過響應(yīng)面分析優(yōu)化出了最佳提取條件：超聲時間30min，提取溫度為61℃，超聲波功率為755W，按此工藝條件，黃芩多糖實驗提取得率為12.95%，接近于模型的預(yù)測得率12.16%，說明優(yōu)化得到的條件可靠。在測量的濃度范圍內(nèi)，黃芩多糖有較高抗氧化活性，抗氧化活性與濃度有很好的量效關(guān)系，可作為潛在天然抗氧化劑應(yīng)用于功能食品和藥品。

[1]李作平，衛(wèi)恒巧.黃芩屬植物化學(xué)成分的研究概況[J].國外醫(yī)藥：植物藥分冊，1994，9（4）：147-155.

[2]何春年，彭勇，肖偉，等.黃芩地上部分與根部的化學(xué)成分比較研究[J].中國現(xiàn)代中藥，2011，13（12）：32-35.

[3]董安珍，侯關(guān)林.黃芩生品和炮制品中多糖提取工藝的研究[J].河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，15（5）：105-108.

[4]魏順發(fā)，屈愛桃，任鳳霞，等.黃芩屬植物中二萜類成分研究進展[J].國際藥學(xué)研究雜志，2011，38（2）：123-129.

[5]楊得坡，張小莉，Chaumont JP，等.中藥黃芩揮發(fā)性化學(xué)成分的研究[J].中藥新藥與臨床藥理，1999，10（4）：234-236.

[6]李堆淑.中藥黃芩化學(xué)成分的研究進展[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報，2013，25（8）：51-54.

[7]Chen R Z，Meng F L，Liu Z Q，et al.Antitumor activities of different fractions of polysaccharide purified from Ornithogalum caudatum Ait[J].Carbohydrate Polymers，2010，80（3）：845-851.

[8]Chen R Z，Liu，Z Q，Zhao JM，et al.Antioxidant and immunobiological activity of water-soluble polysaccharide fractionspurified from Acanthopanax senticosu[J].Food Chemistry，2011，127（2）：434-440.

[9]董航，陳瑞戰(zhàn)，李世哲，等.橘皮粗多糖的提取工藝優(yōu)化及抗氧化活性評價[J].食品工業(yè)科技，2012，33（5）：215-218.

[10]Chen R Z，Li，S Z，Liu，C M，et al.Ultrasound complexenzymes assisted extraction and biochemical activities of polysaccharides from Epimedium leaves[J].Process Biochemistry，2012，47（12）：2040-2050.

[11]Chen R Z，Li Y，Dong H，et al.Optimization of ultrasonic extraction processofpolysaccharides from Ornithogalum Caudatum Ait and evaluation of its biological activities[J].Ultrasonics Sonochemistry，2012，19（6）：1160-1168.

[12]CuestaG，SuarezN，BessioM I，etal.Quantitativedetermination of pneumococcal capsular polysaccharide serotype 14 using a modification of phenol-sulfuric acid method[J].Journal of MicrobiologicalMethods，2003，52（1）：69-73.

[13]Li JW，Ding SD，Ding X L.Optimization of the ultrasonically assisted extraction of polysaccharides from Zizyphus jujuba cv.Jinsixiaozao[J].Journal of Food Engineering，2007，80（1），176-183.

[14]Chandrika L P，F(xiàn)ereidoon S.Optimization of extraction of phenolic compounds from wheat using response surface methodology[J].Food Chemistry，2005，93（1）：47-56.

[15]Ying Z，Han X，Li，J.Ultrasound-assisted extraction of polysaccharides from mulberry leaves [J].Food Chemistry，2011，127（3）：1273-1279.

[16]Zhao S N，Kwok K C，Liang H H.Investigation on ultrasound assisted extraction of saikosaponins from Radix Bupleuri[J].Separation and Purification Technology，2007，55（3）：307-312.

[17]郭長江，楊繼軍，李云峰，等.FRAP法測定水果不同部分抗氧化活性[J].中國公共衛(wèi)生，2003，19（7）：841-843.

[18]Li JW，Liu Y F，F(xiàn)an L P，et al.Antioxidant activities of polysaccharides from the fruiting bodies of Zizyphus Jujuba cv.Jinsixiaozao[J].Carbohydrate Polymers，2011，84（1）：390-394.

[19]殷軍，葛青，毛建衛(wèi)，等.竹葉多糖的組分及抗氧化活性分析[J].食品工業(yè)科技，2013，34（2）：100-103.

[20]劉春紅，馬宇，何忠梅，等.平貝母多糖的分離純化及抗氧化活性研究[J].食品科學(xué)，2011，32（21）：29-33.