楊克沙，趙海云，顧承真，李在輝，盧 劼，曹建新，*

（1.昆明理工大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院，云南昆明650500；2.文山州農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測檢驗中心，云南文山663000）

芒果（Mangifera indica L.）系漆樹科（Sumach）植物，主要分布在熱帶的亞熱帶地區(qū)。芒果植物中含有多酚、黃酮和萜類化合物，具有抗脂質(zhì)過氧化、抗病毒、抗腫瘤、抗菌、抗免疫、抗炎、祛痰、保肝利膽等作用，可用于治療熱滯腹痛、氣脹、小兒疳積和消渴等癥[1-3]。芒果葉中含有芒果苷、高芒果苷、異芒果苷、槲皮素、金絲桃苷、沒食子酸乙酯、原兒茶酸、沒食子酸[4]、沒食子酸甲酯[5]、兒茶素[6]等化合物。近年發(fā)現(xiàn)芒果植物中的芒果苷具有降尿酸的新作用，是一類很有開發(fā)前景的抗痛風(fēng)的藥物[7]，本文用高效液相色譜法測定芒果植物中芒果苷的含量，為芒果食用的保健功能研究和芒果苷的工業(yè)生產(chǎn)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

芒果苷對照品（純度≥98%） 實驗室自制；16個不同品種芒果的芒果葉，芒果皮，芒果果肉 采于云南元江和元謀；純凈水 杭州娃哈哈集團(tuán)；甲醇 為色譜純，購于江蘇漢邦科技有限公司；磷酸 分析純，購于天津市風(fēng)串化學(xué)試劑科技有限公司。

PE Series 200LC型高效液相色譜儀 美國鉑金埃爾默公司；D101型大孔吸附樹脂 天津海光化工有限公司；TU-1901型雙光束紫外可見分光光度計 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；DHG-9240A型電熱鼓風(fēng)干燥箱 上海一恒科技有限公司；SB-2000 EYELA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海愛郎儀器有限公司；AL204型電子天平 梅特勒-托利多上海有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 對照品溶液的制備 準(zhǔn)確稱取芒果苷對照品5.0mg，置于100m L容量瓶中，用50%的甲醇-水定容至刻度，搖勻，得對照品溶液，備用。

1.2.2 待測樣品溶液的制備 準(zhǔn)確稱取芒果葉樣品1.0g置于圓底燒瓶中，加50%的甲醇-水1L回流1h，重復(fù)兩次，過濾、合并濾液后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸去多余的體積，然后置于200m L容量瓶中，用50%甲醇-水定容至刻度，得芒果葉供試品溶液。

將芒果削皮，并準(zhǔn)確稱取果皮100g、果肉500g。將果皮剪碎置于圓底燒瓶中用50%的甲醇-水1L回流1h，回流兩次，過濾、合并濾液后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至5m L，上D101大孔吸附樹脂柱脫糖，將脫糖后的部分用50%的甲醇-水洗脫后置于200m L容量瓶中用50%甲醇-水定容至刻度，得芒果皮供試品溶液。

果肉用榨汁機榨碎，將全部果肉和果汁轉(zhuǎn)移到圓底燒瓶中用50%的甲醇-水1L回流1h，回流兩次，然后置于離心機中離心得上清液，合并上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸去其中的甲醇，上D101大孔吸附樹脂柱脫糖，將脫糖后的部分用50%甲醇-水洗脫后置于200m L容量瓶中用50%甲醇-水定容至刻度，得芒果果肉供試品溶液。

1.2.3 色譜條件 色譜柱Dimaonsil C18（250×4.6mm，5μm）；檢測器：紫外檢測器；檢測波長：240nm；柱溫：30℃；流速：1m L/m in；進(jìn)樣量：10μL；流動相：甲醇-0.2%磷酸水溶液（30∶70）等度洗脫25m in。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜分離參數(shù)的確定

2.1.1 檢測波長的確定 采用雙光束紫外可見光光度計對芒果苷進(jìn)行掃描，掃描波長范圍為190～400nm，芒果苷在λ=240nm處有最大吸收峰，與文獻(xiàn)值一致。所以，選擇檢測波長λ=240nm，對芒果苷進(jìn)行HPLC檢測。

圖1 芒果果皮液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram of peel

圖2 芒果苷標(biāo)準(zhǔn)品（0.05μg/L）液相色譜圖Fig.2 HPLC chromatogram ofmangiferin standards（0.05μg/L）

2.1.2 流動相的確定[8]為了獲得較好的分離度，實驗中利用6組不同的流動相系統(tǒng)：乙腈-水溶液，乙腈-0.2%磷酸水溶液，甲醇-水溶液，甲醇-0.1%磷酸水溶液，甲醇-0.2%磷酸水溶液，甲醇-0.3%磷酸水溶液。分別對樣品中化合物含量進(jìn)行測定，通過比較化合物保留時間和峰型，最終選用甲醇-0.2%磷酸水溶液系統(tǒng)。將供試品經(jīng)HPLC進(jìn)行分析，結(jié)果顯示：甲醇-0.2%磷酸水溶液等度洗脫（30∶70，25m in），芒果苷可獲得較好的分離度。具體分析圖譜見圖1、圖2。

2.2 芒果苷標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線

準(zhǔn)確稱取芒果苷標(biāo)準(zhǔn)品16.3mg，置于100m L容量瓶中，用50%的甲醇-水定容至刻度，搖勻，即得0.163μg/L的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。在液相色譜儀中分別進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)品溶液2、4、6、8、10μL，然后以峰面積（y）為縱坐標(biāo)，以含量（x）為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=2900000x+23426（R2=0.9995），線性關(guān)系良好（見圖3）。

圖3 芒果苷線性關(guān)系Fig.3 Standard curve ofMangiferin

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 精密度考察 取適量配制好的芒果苷對照品溶液，用0.45μm濾微膜微濾過后進(jìn)行HPLC分析，連續(xù)進(jìn)樣6次，芒果苷對照品HPLC分析結(jié)果相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.78%，表明儀器精密度良好，該方法精密度符合要求。結(jié)果見表1。

表1 芒果苷精密度實驗結(jié)果Table1 Precision of the experimental results of Mangiferin

2.3.2 穩(wěn)定性考察 取同一供試品溶液在0、4、8、12、16、24、48h時，各進(jìn)樣一次，按照上述色譜條件測定，記錄芒果苷的峰面積，算得RSD=0.49%，表明供試品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定性較好。測定結(jié)果見表2。

2.3.3 回收率實驗 準(zhǔn)確稱取樣品10.60、15.51、8.27、13.74、7.41g各1份，各加入5mg芒果苷對照品，測定各樣品中芒果苷的含量。供試品溶液中芒果苷加樣回收實驗結(jié)果見表3。

實驗結(jié)果表明，此方法具有較好的加樣回收率，供試品溶液中芒果苷的平均回收率為97.2%～100.2%，RSD=1.2%。

2.3.4 檢測限與定量限的考察 配制一低濃度的對照品溶液，注入液相色譜儀檢測其峰高，計算其峰高與基線噪音高的比，S/N=3（S為對照品峰高，N為基線噪音高）時的對照品濃度為此物質(zhì)的檢測限，得芒果苷的檢測限3.26μg/m L；同樣S/N=10時的濃度便為物質(zhì)的定量限，得芒果苷的定量限為10.86μg/m L。

表2 芒果苷穩(wěn)定性實驗結(jié)果Table2 Stability of the experimental results ofmangiferin

表3 添加回收率的結(jié)果（n=5）Table3 Results of recovery（n=5）

依照液相條件，測得各供試品溶液中芒果苷的含量見表4。

由表4可知，多年種植的芒果的果肉中沒有芒果苷，即使有芒果苷含量也很低；在果皮中芒果苷的含量也很低，并且成熟的芒果皮中芒果苷的含量比生芒果皮中含量高；在芒果葉中，元江虎豹牙中芒果苷的含量最高為2.98%，元江胭脂芒中芒果苷含量最低為0.33%。

3 結(jié)論與討論

3.1 本實驗確定了芒果苷高效液相色譜分析條件，采用色譜柱Dimaonsil C1（8250×4.6mm，5μm），甲醇-0.2%磷酸水溶液等度洗脫（30∶70，25min），檢測波長240nm，芒果苷的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于1%，回收率在97%以上，表明該方法準(zhǔn)確、簡便、靈敏，可作為芒果苷含量的定量分析方法。

表4 樣品溶液中芒果苷含量Table4 The content ofMangiferin in samples

3.2 通過對云南16個不同品種、不同成熟度的芒果果肉中芒果苷含量的研究，結(jié)果表明在鷹嘴芒、象牙芒、三年芒的生芒果果肉中含有一定量的芒果苷。而且調(diào)查發(fā)現(xiàn)云南很多地區(qū)都有食用生芒果的習(xí)慣，人們將生芒果切片后放上調(diào)味料直接食用，因此本研究為生芒果的保健功能開發(fā)提供一定的依據(jù)。

[1]廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳.廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)[S].南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，1992：54.

[2]韋國峰，黃祖良，何有成.芒果葉提取物的鎮(zhèn)咳祛痰作用研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2006，17（10）：1954-1955.

[3]郭伶伶，張煒，劉二偉，等.芒果葉中芒果苷含量的測定[J].天津中藥學(xué)大學(xué)學(xué)報，2013，32（1）：43-45.

[4]陸仲毅.芒果葉化學(xué)成分研究[J].中草藥，1982，13（3）：3-6.

[5]郭伶伶，吳春華，葛丹丹，等.芒果葉化學(xué)成分研究Ⅱ[J].熱帶亞熱帶植物學(xué)報，2012，20（6）：591-595.

[6]Janet Rodríguez，Donato Di Pierro，Magda Gioia，et al.Effects of a natural extract from Mangifera indica，and its active compound，mangiferin，on energy state and lipid peroxidation of red blood cells[J].Sciences，2006，1760：1333-1342.

[7]李玲，張植和.芒果苷類化合物的新用途：中國，CN200810058019.6[P].2008-07-09.

[8]張元元，李進(jìn)，陳濤，等.高效液相色譜法同時測定金銀花中綠原酸和木犀草苷的含量[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2011，28（2）：107-109.