王國(guó)玉, 王 璐,李 偉,趙 翠,王浩宇,佟繼銘

(1. 承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，河北 承德 067000；2.河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 承德 )

馬齒莧是馬齒莧科馬齒莧屬一年生草本植物，《中華人民共和國(guó)藥典》收載馬齒莧具有清熱解毒、涼血止血等作用，對(duì)癰腫疔瘡、濕疹、丹毒等也具有治療作用，對(duì)于皮膚粗糙干燥、夜盲癥、矽肺、肺結(jié)核、皮炎、各種癰腫等治療有效。本試驗(yàn)對(duì)馬齒莧水提取物(Water Extract of Portulaca oleraceaL，WEPO)平喘作用進(jìn)行研究，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物

馬齒莧干燥地上部分采自河北省承德市，經(jīng)承德醫(yī)學(xué)院藥用植物研究室鑒定為馬齒莧科植物Portulaca oleracea L.的干燥地上部分。藥材標(biāo)本[1]保存于承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所藥理毒理研究室。

1.2 試劑

磷酸組織胺(Histamine diphospate，His)為上海恒盛生物科技有限公司生產(chǎn)(批號(hào)20100224)，氯化乙酰膽堿(Acetylcholine chloride，AchC)為上海藍(lán)源生物科技有限公司生產(chǎn)(批號(hào)20101024)，氨茶堿溶液(Aminophylline，Ami)為內(nèi)蒙古蒙欣藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(批號(hào)100904)。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

MacLab/4e 生理記錄儀源于澳大利亞，恒溫離體浴槽源于澳大利亞，張力換能器(Made in Spain by PRNL，S.L：LE 13206)來自澳大利亞。

1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種豚鼠，體質(zhì)量160～180 g、300～350 g，來源于承德醫(yī)學(xué)院動(dòng)物研究所繁育場(chǎng)。

1.5 方法

1.5.1 WEPO 平喘作用 采用整體豚鼠平喘實(shí)驗(yàn)[2]，取白色幼年豚鼠，體質(zhì)量160～180 g，雌雄兼用，分別置于4000 ml容積的密閉鐘罩內(nèi)，以超聲霧化器噴霧2%氯化乙酰膽堿和0.1%磷酸組織胺等容積混合液15 s，立即取出豚鼠，觀察豚鼠的引喘潛伏期(從噴霧開始到哮喘發(fā)作、呼吸極度困難，直至抽搐跌倒的時(shí)間)，選取引喘潛伏期<120 s豚鼠50只供試驗(yàn)用。第2天將引喘潛伏期合格的豚鼠隨機(jī)分為WEPO 5 g/kg、2.5 g/kg、1.25 g/kg組和Ami 20 mg/kg組及NS對(duì)照組5組各10只，灌胃給藥(ig)，空白對(duì)照組ig等容積蒸餾水。藥后45 min以藥前同樣方法引喘。觀察引喘潛伏期及發(fā)生抽搐跌倒動(dòng)物數(shù)，不喘者引喘潛伏期以360 s計(jì)。

1.5.2 WEPO平喘機(jī)制 采用離體完整氣管法(毛細(xì)管法)[3]，取體質(zhì)量300～350 g豚鼠共60只，雄雌兼用，擊后腦處死，取下從喉頭至氣管分叉處的整條氣管，快速放入盛有氧飽和Krebs-Henseleit營(yíng)養(yǎng)液中，輕輕剝?nèi)テ渫庵芙M織，用營(yíng)養(yǎng)液沖凈管腔內(nèi)容物，按照文獻(xiàn)方法將氣管固定于離體完整氣管描記裝置上。用注射器將整個(gè)系統(tǒng)充滿營(yíng)養(yǎng)液，排出氣泡。將整個(gè)描記裝置放入20 ml恒溫麥?zhǔn)显〔蹆?nèi)，恒溫為37℃，從浴槽底部通入95%O2+5%CO2,15～20個(gè)氣泡/min，等待毛細(xì)管內(nèi)液面恒定20 min，將此時(shí)液面作為原點(diǎn)。分別給予不同劑量的WEPO(終濃度分別為300 μg/ml、150 μg/ml、75 μg/ml)；Ami(終濃度為30 μg/ml)和His(終濃度為 0.01 μg/ml)。觀察用藥后10 min毛細(xì)管內(nèi)液面高度的變化。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 WEPO對(duì)Ach-His誘發(fā)豚鼠喘息潛伏期及動(dòng)物跌倒比率的影響

表1顯示，WEPO 1.25 g/kg、2.5 g/kg和5 g/kg劑量組動(dòng)物引喘潛伏期分別為(108.2±19.1、211.3±45.2和226.9±41.5) s，與NS組(59.5±10.8) s比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)。表2顯示，中、大劑量組抽搐跌倒動(dòng)物的比率分別為40%和30%，與NS組(100%)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。小劑量組抽搐跌倒動(dòng)物的比率為70%，與NS組(100%)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 WEPO對(duì)離體完整氣管平滑肌張力影響

表3顯示，WEPO 75 μg/ml、150 μg/ml、300 μg/ml劑量組藥前離體氣管平滑肌裝置毛細(xì)管內(nèi)液面高度分別為(25.1±4.5、24.6±3.7、23.9±4.3) mm，藥后毛細(xì)管內(nèi)液面高度分別為(20.1±3.2、15.8±4.1、13.6±3.1) mm，用藥前后比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)，提示W(wǎng)EPO具有松弛氣管平滑肌作用。

表1 WEPO對(duì)Ach-His誘發(fā)豚鼠喘息潛伏期的影響

注：WEPO 各組與Dw對(duì)照組比較：*P<0.05,**P<0.01

表2 WEPO對(duì)Ach-His誘發(fā)豚鼠喘息動(dòng)物跌倒比率的影響

注：WEPO 各組與Dw對(duì)照組比較：*P<0.05；WEPO 各組與氨茶堿組比較：△P<0.05

表3 WEPO 對(duì)豚鼠離體氣管平滑肌張力的影響

注：藥前與藥后比較：*P<0.05，**P<0.01；與His比較：△△P<0.01

3 討論

支氣管哮喘是一種常見病、多發(fā)病，近年來發(fā)病率逐漸增加，嚴(yán)重危害人類健康。文獻(xiàn)報(bào)道，馬齒莧具有抗菌、抗炎、抗過敏等作用，且經(jīng)試驗(yàn)證明其具有明顯的鎮(zhèn)咳作用。本實(shí)驗(yàn)對(duì)新型平喘藥物研制進(jìn)行了初步探討，并通過制備整體豚鼠喘息模型及離體完整氣管法觀察WEPO的平喘療效。聯(lián)合應(yīng)用His 和Ach誘發(fā)哮喘是一種常用的評(píng)價(jià)藥物平喘作用的喘息模型，His和Ach霧化噴霧誘發(fā)豚鼠支氣管痙攣，使動(dòng)物窒息，導(dǎo)致抽搐跌倒。具有松弛氣管平滑肌作用的藥物可減輕由于支氣管痙攣引起的動(dòng)物窒息、抽搐跌倒動(dòng)物的比率。本研究結(jié)果顯示，WEPO延長(zhǎng)引喘潛伏期，減少抽搐跌倒動(dòng)物數(shù)，證明WEPO可抑制His、Ach誘發(fā)的支氣管痙攣，其作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。以豚鼠離體氣管平滑肌的液面高度為指標(biāo)，直接觀察用藥前后液面高度的變化。結(jié)果顯示，用藥后氣管平滑肌液面的高度明顯低于用藥前，WEPO可降低氣管平滑肌張力，說明其可抑制氣管平滑肌的興奮性，對(duì)正常完整離體氣管平滑肌有松弛作用，松弛氣管平滑肌是其平喘作用的重要環(huán)節(jié)，說明WEPO具有平喘作用，但其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

[1] 賀圣文,尤敏,苗乃法,等.野生馬齒莧對(duì)PHA誘導(dǎo)的家兔淋巴細(xì)胞增殖的影響[J].廊坊醫(yī)學(xué)院報(bào),1996,18(3):206-207.

[2] 陳安山,劉志超,夏婷,等.地枇杷水煎液對(duì)小鼠鎮(zhèn)咳作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].右江民族醫(yī)學(xué)院報(bào),2009,5:784-785.

[3] 張會(huì)宇，向紹杰，孟莉，等.中藥細(xì)辛不同提取物平喘活性分析[J].遼寧中醫(yī)雜志，2011,38(3)：551-552.