梁小敏

（江西農(nóng)業(yè)工程職業(yè)學(xué)院，江西樟樹 331200）

生姜塊莖的誘導(dǎo)培養(yǎng)

梁小敏

（江西農(nóng)業(yè)工程職業(yè)學(xué)院，江西樟樹 331200）

以生姜塊莖為培養(yǎng)材料，通過對生姜催芽、表面滅菌、外植體切割和啟動培養(yǎng)等試驗研究得出，生姜適宜的培養(yǎng)方案為生姜塊莖先埋入含水量10%左右的細沙中催芽，清洗后用稀釋800倍的多菌靈浸泡30 min，再用0.12%的升汞浸泡12 min表面滅菌，切割外植體時保留少部分姜塊，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+BA 0.5 mg· L-1+NAA 0.25 mg·L-1+0.1%生姜提取液。

生姜塊莖；滅菌；芽誘導(dǎo)培養(yǎng)

生姜以地下塊莖無性繁殖為主，其繁殖系數(shù)較低，用種量大，并且易通過帶病種姜傳播病害。用組織培養(yǎng)的方法進行繁殖可以解決這一生產(chǎn)難題，但生姜在進行組織培養(yǎng)時會遇到一系列的問題，本試驗主要從生姜莖塊的滅菌、切割與啟動培養(yǎng)等組織培養(yǎng)技術(shù)方面加以研究。

1 材料與方法

1.1 材料

生姜購買于江西省樟樹市農(nóng)貿(mào)市場。

1.2 方法

把生姜埋在催芽盒細沙中，置25℃恒溫培養(yǎng)箱中催芽。當(dāng)芽長2～3 cm時，放在清水托盤里用毛刷清洗干凈，切下帶姜塊的芽點，用洗衣粉或多菌靈浸泡，自來水沖洗30～40 min，瀝干水分。在超凈工作臺上，先用75%的酒精浸潤30 s，再用0.10%～0.15%升汞滴加1～2滴吐溫80浸泡10～12 min，同時不停搖蕩使表面滅菌充分，然后無菌水沖洗，切割成0.5～1.0 cm的不定芽或帶0.5～1.0 cm見方姜塊的不定芽接種到培養(yǎng)基上，置于2 000 lx，（25±2）℃的溫控培養(yǎng)室中培養(yǎng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 生姜的表面滅菌

飽和洗衣粉浸泡1 min是實驗室常用的清洗材料的方法，但對生姜則達不到理想去污效果（污染率高達100%）；改用稀釋800倍的多菌靈清洗30 min后，污染率明顯下降（污染率為35%）。對不同濃度升汞和滅菌時間進行效果對比（表1）顯示，0.10%的升汞浸泡12 min是本實驗室常用的滅菌方法，但生姜污染率明顯太高。0.15%的升汞浸泡10 min，污染率雖降低，但同時伴隨著存活率的下降。0.12%的升汞浸泡12 min，滅菌效果在這3個濃度中比較好。

表1 不同濃度升汞及滅菌時間效果對比

2.2 生姜外植體的切割

經(jīng)過滅菌后，切割生姜芽點作為接種的外植體，針對所切割的外植體是否含有生姜芽基部以及基部的大小進行了對比試驗，結(jié)果（表2）顯示，切割外植體時，若外植體帶有小部分姜塊母體，則誘導(dǎo)出來的芽褐化程度較輕，生長較好。但所帶姜塊母體較多則會出現(xiàn)嚴(yán)重污染。而不帶任何姜塊母體的生姜芽點褐化較嚴(yán)重，生長也比較慢。

表2 生姜芽基部姜塊對離體培養(yǎng)的影響

2.3 芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基

切割好的生姜外植體接種在5種不同的培養(yǎng)基上，添加不同種類或濃度的生長調(diào)節(jié)劑，4周后進行觀察記錄（表3）。各處理均以MS為基本培養(yǎng)基，并加入0.7%瓊脂和0.3%的蔗糖，生姜莖塊培養(yǎng)過程中極易生根，有時會影響到芽的增殖倍數(shù)，相對而言，誘導(dǎo)發(fā)芽有一定的難度。陳娟等［1］認(rèn)為，6-BA的效果優(yōu)于KT和GA3，且GA3具有明顯的抑制作用。杭玲等［2］用BA 3.0 mg· L-1+NAA 0.1 mg·L-1的培養(yǎng)基誘導(dǎo)芽分化效果最好，且沒有幼根長出，而使用KT取代BA，其效果不如BA。

表3 5種培養(yǎng)基對啟動培養(yǎng)的影響

通過對5種培養(yǎng)基中生姜的芽誘導(dǎo)試驗認(rèn)為，僅有BA和GA，而無NAA培養(yǎng)基的長勢較差，但有BA與NAA的培養(yǎng)基的植株也出現(xiàn)不同程度的生根或生長不良現(xiàn)象。附加有生姜提取液的這組培養(yǎng)基材料生長狀況要好于其他培養(yǎng)基。

3 小結(jié)與討論

通過對生姜塊莖表面滅菌、外植體切割和選用不同的啟動培養(yǎng)基培養(yǎng)等試驗結(jié)果顯示，生姜莖塊應(yīng)埋入含水量10%左右的細沙中催芽，清洗后用稀釋800倍的多菌靈浸泡30 min，瀝干水，再用0.12%的升汞浸泡12 min進行表面滅菌，然后用無菌水清洗干凈。在切割外植體時保留少部分芽點以下的姜塊基部母體更容易成活。啟動培養(yǎng)基中增加1%的生姜汁液會讓培養(yǎng)結(jié)果更理想。

生姜進行塊莖無菌培養(yǎng)時，催芽有一定困難，細沙太干或恒溫箱相對濕度太低，則無法催芽；細沙太濕或恒溫箱相對濕度較高又易腐爛。同時，生姜為地下塊莖，芽上有鱗片，污染較嚴(yán)重，滅菌難度較大，是生姜塊莖離體培養(yǎng)的一大瓶頸。薛寒青等［3］用1 g·L-1次氯酸鈉處理20 m in，最后再用0.1 g·L-1升汞處理10 min。用表面消毒與脫菌素相結(jié)合的方式可有效降低染菌率。在切割外植體或轉(zhuǎn)接材料時，最好帶上部分姜塊。陳澤雄等［4］也認(rèn)為，采用保留基部0.5 cm的微型團塊作為生姜繼代方式效果較好。

在誘導(dǎo)芽的過程中，還常伴隨生根現(xiàn)象。對此，雷開榮［5］認(rèn)為，生姜快速繁殖要求較高的BA濃度，但在同時附加BA 2～3 mg·L-1+ NAA 0.5～1.0 mg·L-1的培養(yǎng)基中，可以實現(xiàn)生姜叢生芽和根同步誘導(dǎo)。孫霞等［6］采用附加KT 2.0 mg·L-1+NAA 1.0 mg·L-1的培養(yǎng)基，通過器官發(fā)生途徑可獲得大量的帶根苗。如果誘導(dǎo)出的芽數(shù)量足夠多，生根與增殖同步進行可節(jié)省培養(yǎng)時間。

培養(yǎng)中還發(fā)現(xiàn)，生姜較易出現(xiàn)葉片黃化現(xiàn)象。陳澤雄等［4］是以改良MS（1/3 NH4NO3）為基本培養(yǎng)基，BA 1.5 mg·L-1與BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1隔代交替使用，置于散射光條件下培養(yǎng)效果最好，且能降低玻璃化苗和黃化苗比例。

［1］ 陳娟，潘開文，畢世榮，等.生姜莖尖組織培養(yǎng)和污染率控制的研究［J］.長江蔬菜，2007（1）：38-40.

［2］ 杭玲，黃卓忠，江文，等.生姜組織培養(yǎng)快繁技術(shù)研究與應(yīng)用［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006（5）：125-127.

［3］ 薛寒青，周淑蘭.不同抗生素對生姜組織培養(yǎng)中姜芽脫菌效果的研究［J］.北方園藝，2009（6）：45-47.

［4］ 陳澤雄，劉奕清，黃登艷，等.培養(yǎng)因子及切割工藝對生姜試管苗生長效應(yīng)的研究［J］.中藥材，2010（5）：668-671.

［5］ 雷開榮.生姜組織培養(yǎng)中增殖與生根同步培養(yǎng)技術(shù)研究［J］.中國種業(yè)，2006（5）：33-34.

［6］ 孫霞，亓翠英，秦燕.生姜通過器官發(fā)生途徑體外再生的研究［J］.北方園藝，2012（19）：121-123.

（責(zé)任編輯：張瑞麟）

S 632.5

B

0528-9017（2014）06-0848-02

文獻著錄格式：梁小敏.生姜塊莖的誘導(dǎo)培養(yǎng)［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014（6）：848-849.

2013-12-16

梁小敏（1973-），女，副教授，碩士，主要從事農(nóng)業(yè)生物技術(shù)應(yīng)用教學(xué)與科研工作。E-mai1.1iangxm@sina.com。