廣西中醫(yī)藥大學(xué)生物教研室， 廣西 南寧 530001

X染色質(zhì)標(biāo)本制作方法的改進(jìn)

李景云劉紹良

廣西中醫(yī)藥大學(xué)生物教研室， 廣西 南寧 530001

為提高制作X染色質(zhì)標(biāo)本的質(zhì)量，對(duì)原有的方法進(jìn)行了改進(jìn)。新方法將口腔黏膜細(xì)胞直接涮入固定液中，以滴片法制片，自來(lái)水流水沖洗玻片，用甲苯胺藍(lán)染色，取得了良好的實(shí)驗(yàn)效果。

X染色質(zhì)，制作方法，改進(jìn)

X染色質(zhì)是女性間期細(xì)胞核膜內(nèi)側(cè)邊緣輪廓清楚的濃染小體，大小約為1μm，一般呈平凸、圓形、扁平或三角形[1]。制作X染色質(zhì)標(biāo)本相對(duì)于染色體的制備來(lái)說(shuō)更簡(jiǎn)單易行，在鑒定性別及染色體數(shù)目異常疾病的診斷中發(fā)揮著重要作用。根據(jù)標(biāo)本制作的效果，針對(duì)傳統(tǒng)制片方法中存在的一些問(wèn)題，對(duì)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行了一些改進(jìn)，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 固定的新方法

讓受檢者漱口后刮取口腔黏膜細(xì)胞數(shù)次，將刮取物直接涮入裝有固定液(甲醇∶冰醋酸=3∶1)的離心管內(nèi)，固定15min。原方法將刮取物先涮入生理鹽水中，離心去上清液后再添加固定液固定，導(dǎo)致細(xì)胞丟失較多，離心次數(shù)多較費(fèi)時(shí)。改進(jìn)后的方法可以減少離心次數(shù)，減少細(xì)胞丟失，結(jié)果更準(zhǔn)確。

2 制片的新方法

用滴片的方法取代原來(lái)的涂片法。直接涂片法[2]可以保留較多細(xì)胞，但存在涂抹不均勻，細(xì)胞重疊聚集或過(guò)度分散，并且涂抹物中雜質(zhì)多，影響X染色質(zhì)的準(zhǔn)確鑒別。離心后的細(xì)胞懸液滴片，雜質(zhì)少，滴片時(shí)易于控制細(xì)胞密度，實(shí)驗(yàn)效果好。

3 沖洗的新方法

玻片置于自來(lái)水下流水沖洗，將玻片上的鹽酸徹底沖洗干凈，以免影響染色；染色后的玻片也置于自來(lái)水流水沖掉片上多余的染液。原來(lái)的方法是置于蒸餾水中涮洗，如果制作大量的標(biāo)本，多次反復(fù)使用同一染缸中的蒸餾水，易造成涮洗不干凈，標(biāo)本間相互干擾大。改用自來(lái)水流水沖洗，各標(biāo)本獨(dú)立清洗，避免彼此影響。自來(lái)水價(jià)格較蒸餾水低，也可節(jié)約成本。

4 染色的新方法

以甲苯胺藍(lán)代替硫堇染色。以0.2%甲苯胺藍(lán)作為染液，染色10min，染色效果好。甲苯胺藍(lán)染液配制方法簡(jiǎn)單，硫堇染液配制步驟繁瑣；甲苯胺藍(lán)染色效果易于控制，硫堇染液易殘留在玻片上，不易沖洗干凈，造成背景較臟[3]。

用改進(jìn)后的方法制備X染色質(zhì)，細(xì)胞分布均勻，背景中的雜質(zhì)少，細(xì)胞核著色清晰，X染色質(zhì)陽(yáng)性率高，實(shí)驗(yàn)效果好，為X染色質(zhì)的進(jìn)一步研究提供了基礎(chǔ)。

[1]王修海等. 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].科學(xué)出版社，2001:32.

[2]李石旺，盧新華，許名宗. 人類X染色質(zhì)標(biāo)本制備實(shí)驗(yàn)方法的改進(jìn)[J].解剖學(xué)雜志，2005,28(2)：240-241.

[3]紀(jì)靜.兩種染色方法對(duì)X染色質(zhì)顯示效果的比較[J].青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003,39(3):354-355.

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