王 蕾 范書嶠 樊明喜

（南京生命能科技開發(fā)有限公司·210016）

烏雞白鳳丸由烏雞、當歸、地黃、白芍等20味中藥制成，為《中國藥典》2010年版收載品種，具有補氣養(yǎng)血、調(diào)經(jīng)止帶之功效，用于治療氣血兩虧引起的月經(jīng)不調(diào)、行經(jīng)腹痛、崩漏帶下、產(chǎn)后虛弱等癥。其中白芍是組方中的主要藥物之一。研究表明，烏雞白鳳丸可降低大鼠甘油三脂及氧化低密度脂蛋白、阻止動脈硬化[1-2]，有防治骨質疏松[3]，保護肝臟[4]等作用，對阿爾茨海默病具有潛在的藥用價值[5]。因此，烏雞白鳳丸的臨床應用越來越廣，目前國內(nèi)有多家藥廠生產(chǎn)。2010年版藥典已有烏雞白鳳丸含量測定的質量標準，也有文獻報道烏雞白鳳丸中丹參酮、丹參素和芍藥苷含量測定的方法[6-8]。但至今未有對藥典的芍藥苷含量測定中樣品提取方法進行比較研究。鑒于藥典方法含量測定項中芍藥苷的測定步驟操作較復雜，實驗周期較長且平行樣品測定結果偏差較大問題，本文以烏雞白鳳丸中白芍的主要成份芍藥苷含量為指標，采用2010版中國藥典的色譜條件，通過含量結果比較評價不同提取方法對結果的影響，為簡化烏雞白鳳丸中芍藥苷含量測定的提取操作步驟，縮短生產(chǎn)過程中對該含量測定的實驗周期提供實驗依據(jù)。

1 儀器與試藥

安捷倫Agilent1200系列液相色譜儀，UV-260島津紫外分光光度儀；芍藥苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號110736-200934；烏雞白鳳丸：為南京同仁堂藥業(yè)有限責任公司生產(chǎn)大蜜丸。

2 方法與結果

2.1 色譜分析條件

AgilentZorbax SB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5μm)Serial No.：USCL029483;依利特Sinochrom OODSBP-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm， 5μm)，Serial No.：E2018436;流動相甲醇-水(33：67)，檢測波長230 nm，理論板數(shù)按照芍藥苷峰計應不小于2000;流速1.0ml·min-1，柱溫為25℃，進樣量10μl;環(huán)境條件：所有試藥均為分析純；HPLC所用試液為色譜純；水均為純化水。室溫為20℃，相對濕度為55.0%。

2.2 供試品溶液配制

供試品溶液的制備方法（超聲處理參數(shù)為功率300W，頻率50k Hz）

2.2.1 藥典方法 取本品，研細，精密稱取5.0 g，精密加入30%乙醇25 ml，稱重，時時振搖，靜置24 h，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，加30%乙醇補足減失質量，濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5 cm，長12 cm)，用30%乙醇100 ml洗脫，收集洗脫液，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣用水5ml分次使溶解，轉移至25mL量瓶中，容器用甲醇適量多次洗滌，洗液并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，既得。

2.2.2 提取方法1 取本品，研細，精密稱取5.0g，精密加入30%乙醇25 ml，稱重，時時振搖，放置24 h，超聲處理30 min，放冷，稱重，用30%乙醇補足減失重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，置蒸發(fā)皿中蒸干，以下同藥典方法。

2.2.3 提取方法2 取本品，研細，精密稱取5.0g，精密加入30%乙醇25 ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，稱重，用30%乙醇補足減失重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，置蒸發(fā)皿中蒸干，以下同藥典方法。

2.2.4 提取方法3 取本品，研細，精密稱取5.0g，精密加入30%乙醇25 ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，稱重，用30%乙醇補足減失重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml轉移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度定容，搖勻，既得。

2.3 樣品含量測定

將樣品按2.2方法制備供試品溶液，按2.1色譜條件進行測定，以外標法計算芍藥苷含量，結果見表1。

表1 樣品中芍藥苷含量(mg/丸)

2.4 不同提取方法色譜分離結果見表2

表2 不同提取方法色譜分離結果匯總表

3 方法學驗證

通過2.4對不同提取方法對含量測定結果影響的總結，認為提取方法2和提取方法1雖然測定結果大小有差異，但色譜分離情況看基本無影響，且提取方法2的含量測定結果接近藥典方法的測定結果，因此選擇提取方法2進行提取方法對含量測定影響的驗證。

3.1 標準曲線與線性范圍

精密稱取五氧化二磷干燥24 h的芍藥苷對照品適量，加甲醇制成42.16ug·ml-1的對照品溶液。精密吸取對照品液(42.16 ug·ml-1)2， 5， 10，15， 20μL，按上述色譜條件測定峰面積，以進樣量x(μg)對峰面積Y進行線性回歸，得回歸方程y=0.775x-0.3302，r=0.9999。表明芍藥苷在84.32～843.2μg呈良好的線性關系。

3.2 精密度試驗

取同一供試品溶液，連續(xù)進樣7次，結果RSD 0.28% (n=7)，表明儀器精密度良好。

3.3 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，分別于0，2， 4， 6， 8， 12，18， 24 ，48h進樣，測得峰面積，計算得峰面積的RSD 為1.0%。表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

3.4 重復性試驗

取同一批號(101201)樣品7份，分別依本法處理進行測定，結果芍藥苷平均含量為4.09mg/丸，RSD 0.6% (n=7)，結果表明以本法測定重復性好。

3.5 回收率試驗

精密稱取已測知含量的樣品(101201)約2.5 g，共9份，分別準確加入一定量的芍藥苷對照品溶液，依上述方法進行含量測定并計算回收率，結果見表3。方法平均回收率為99.4%，RSD0.8% (n=9)，符合中藥制劑分析要求。

表3 芍藥苷加樣回收率

3.6 結論

經(jīng)方法學驗證，該提取方法的樣品平均回收率99.4%，回收率試驗的RSD為0.8%（n=9）；重復性實驗RSD為0.6%，表明該法準確可靠、重現(xiàn)性好，可作為制劑中芍藥苷含量測定的質量控制標準。

4 討論

（1）從各提取方法的測定結果可以看到平行樣品的測定結果偏差，不經(jīng)過樹脂柱處理的樣品明顯具有更好的平行性。

（2）本文采用的樣品選擇的是大蜜丸，主要是因為大蜜丸中含糖量高，提取方法是否能有效排除糖、蜜對測定結果影響最大。故本文在簡化藥典提取方法的操作步驟的同時，也對每一個簡化環(huán)節(jié)進行了有效的對比研究，結果表明：通過D101型大孔樹脂柱確實可以有效的去除雜質，但在芍藥苷檢出位置是否通過樹脂柱的影響并不大；通過軟化浸泡過夜24小時后超聲提取，與直接超聲提取，從含量測定結果看區(qū)別不明顯，因此本簡化方法可以用于生產(chǎn)環(huán)節(jié)中間體的質量控制，可以縮短檢驗周期，從而縮短生產(chǎn)周期。

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[4]李小芹，賀 蓉.烏雞白鳳丸口服液及丸劑對中毒性肝損傷影響的比較[J].中藥藥理與臨床，2000，16(4): 1.

[5]錢冬萌，謝俊霞.烏雞白鳳丸對Aβ1-40誘導的大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的保護作用[J].青島大學醫(yī)學院學報， 2006，43(1): 1.

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