趙倩瑜 張俊峰 衛(wèi)紅偉

乙型肝炎病毒表面抗原低水平陽性血清的病毒核酸載量分析

趙倩瑜 張俊峰 衛(wèi)紅偉

目的 探討分析血清中乙型肝炎病毒表面抗原 (HBV-HBsAg)低水平陽性與病毒核酸載量的關(guān)系。方法 HBsAg 弱陽性的患者 3632 例 , 通過酶聯(lián)免疫吸附試驗 (ELISA)檢測血清 (HBsAg)、使用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng) (FQ-PCR)檢測血清乙型肝炎病毒 DNA(HBV-DNA)。結(jié)果 3632 例 HBsAg 弱陽性的患者病毒 DNA 檢出率為 80.55%, 病毒核酸載量的平均值為 7.305。結(jié)論 乙型肝炎病毒表面抗原低水平陽性對乙型肝炎的診斷不具有代表性 , 只能能說明體內(nèi)含有乙肝病毒外殼 , 還需要結(jié)合血清病毒核酸載量檢測來判斷患者體內(nèi)是否具有乙肝病毒 DNA。只有在 HBsAg 陽性且合并病毒核酸載量值異常時 , 才有助于乙型病毒性肝炎的診斷和療效的評估。

乙型肝炎病毒；表面抗原低水平陽性；病毒核酸載量

乙型病毒性肝炎 (viral hepatitis type B)簡稱乙肝 , 是由乙肝病毒 (HBV)感染引起的 , 我國是乙肝大國［1］, 乙肝病毒攜帶者占全世界攜帶者的 46.43%。乙肝表面抗原 (HBsAg)是乙肝病毒的外殼 , 只具有抗原性 , 無傳染性［2］。HBsAg 陽性或弱陽性是感染乙肝病毒的標志之一。HBsAg 低水平陽性存在的情況有以下幾種［3］：①乙肝潛伏期 ；②無癥狀的乙肝病毒攜帶者 ；③慢性乙肝 ；④檢驗結(jié)果誤差。由于 ELISA 試驗檢測的是病毒標志物 , 或多或少會對 HBV 造成漏檢 , 而 PCR技術(shù)可以補充 ELISA 試驗的不足 , 可效提高病毒檢出率?，F(xiàn)就本院 2013 年期間選取的 3632 例 HBsAg 低水平陽性者病毒核酸載量檢測結(jié)果進行分析。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取 2013 年 1～12 月期間本院消化內(nèi)科與傳染病科門診部和住院部共同收治的 HBsAg低水平陽性的患 者 3632 例 , 其 中 男 3168 例 , 女 464 例 ；年 齡 27～58 歲 ,平均年齡 36歲。所有患者經(jīng)乙肝病毒酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測符合 HBsAg 低水平陽性。

1. 2 方法 HBsAg 檢測采用 ELISA 試驗［4］, 試劑盒由廣州威佳科技有限公司提供。HBV-DNA 采用 FQ-PCR 檢測［5］,試劑盒由寶生物工程有限公司提供。

1. 2. 1 ELISA 檢測 標本在室溫下離 心 (1000×g 離心 10 min)將血清和紅細胞迅速小心地分離。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管 , 按照試劑盒操作步驟說明進行實驗。如果標本不立即使用 , 將其分裝保存于 -70℃條件下 , 避免反復(fù)冷凍 ,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。避免使用溶血或脂血。

1. 2. 2 核酸檢測 留取血標本中核酸檢測成分 , 將 ELISA檢測結(jié)果中 HBsAg 低水平陽性標本依次編號進行核酸檢測 ,檢測過程依據(jù)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)說明書進行。

2 結(jié)果

HBsAg 低水平陽性者 3632 例 , 占 2013 年全年在本院進行 HBsAg 檢測的患者的 29.23%, 對 HBsAg 低水平陽性者進行 HBV-DNA 定量檢測 , 病毒 DNA 檢出率為 80.55%, 病毒核酸載量的平均值為 7.305。說明當檢測出乙肝表面抗原低水平陽性時 , 只能說明人體內(nèi)有乙肝病毒外殼或者是假陽性 ,而外殼里面有沒有乙肝病毒 DNA則還要通過乙肝病毒核酸檢測來確定。

3 討論

HBsAg 編碼區(qū)位于 HBV 編碼的 5 個閱讀框架的第 3 個 , HBsAg 的衣殼蛋白是由 HBsAg 的編碼產(chǎn)物 Pre-S1、Pre-S2以及 HBsAg-PHSA-Re 共同組成［6］。當感染 HBV 后 , 病毒常以完整的病毒顆粒、絲狀或管狀顆粒、球形顆粒3種形式存在 , 其中病毒顆粒含有病毒蛋白和核酸。由于感染 HBV后存在一段時間的窗口期［7］, 即人體感染乙肝病毒后 , 免疫系統(tǒng)在消滅乙肝病毒的這段時期 , 也稱乙肝恢復(fù)期末端 , 此時病毒將大量減少或者全部消失 , 但是還沒有產(chǎn)生乙型肝炎表面抗體 (HBsAb)。而 HBsAb 一般要在急性乙肝病毒感染后期或 HBsAg 消失后 , 經(jīng)過一段時間才出現(xiàn) , 在此間隔期HBsAg 與 HBsAb 都不能被檢出 , 稱為“空白期”或“窗口期”。目前雖然有先進的熒光定量 PCR 技術(shù)可以及時準確的診斷感染性疾病 , 但窗口期仍然是全世界的難題 , 且對于一些沒有條件實現(xiàn)臨床 PCR 實驗室建立的醫(yī)院來說 , 很難實現(xiàn)對 HBsAg低水平陽性乙型病毒性肝炎患者的正確診斷。所以 ,本文在此探討血清標志物 HBsAg 低水平陽性與 HBV-DNA檢測之間的相互關(guān)系 , 希望能夠?qū)σ倚透窝椎呐R床診斷及療效觀察和預(yù)后判斷起到一定的作用。

HBsAg 的出現(xiàn)常伴隨乙肝病毒的存在 , 因此 HBsAg 是已感染 HBV 的標志。HBsAg 可存在于 HBV 感染者的血液、唾液、乳汁、汗液、淚水、鼻咽分泌物、精液及陰道分泌物中。在感染乙肝病毒后 2～6 個月、谷丙轉(zhuǎn)氨酶升高前 2～8 周時 , 可在血清中測到 HBsAg 陽性 ；當 HBsAg 呈低水平陽性時 , 可結(jié)合熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)來進一步檢測體內(nèi)是否含有 HBV-DNA。

研究結(jié)果顯示 , HBsAg 低水平陽性且乙肝病毒 DNA＜1000,則體內(nèi)存在乙肝病毒的表面外殼而不存在乙肝病毒 DNA, 不存在病毒復(fù)制和傳染性 ；HBsAg 陽性或弱陽性且乙肝病毒DNA＞1000, 則說明體內(nèi)存在完整的乙肝病毒 , 具傳染性且復(fù)制。因此 , 當出現(xiàn) HBsAg 陽性或低水平陽性時 , 也不一定是 HBV 患者 , 還有可能是乙肝潛伏期、無癥狀攜帶者、慢性乙肝或者假陽性者 , 這都需要結(jié)合 PCR 檢查結(jié)果做出綜合判斷。

參考文獻

［1］邱黎霞 , 郭滿盈 , 楊海燕 . 血清 PreS1, PreS2 抗原在乙肝診斷中的價值 .實驗與檢驗醫(yī)學(xué) , 2009, 27(2):177-178.

［2］王宇 , 楊延敏 .對乙型肝炎患者檢測乙肝表面抗原大蛋白和前 S1 抗原的區(qū)別和臨床意義 .檢驗醫(yī)學(xué)與臨床 , 2010, 7(22): 2446-2447.

［3］夏邦世 , 陳友土 , 沈忠海 .HBsAg 陰性或低值弱陽性的乙型肝炎病毒感染 .中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志 , 2006, 7(1):49-51.

［4］陳慧英 , 肖艷群 , 張健 , 等 . 酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測乙型肝炎病毒表面抗原臨界樣本復(fù)檢范圍的探討 .檢驗醫(yī)學(xué) , 2010, 25 (6):447-450.

［5］劉慶鳴 , 曾黎峰 , 萬本愿 , 等 .乙肝病毒免疫標志物與其 DNA熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)之間的關(guān)系探討 .實驗與檢驗醫(yī)學(xué) , 2010(5):270-271.

［6］崔美蘭 , 周海洋 , 劉杰 , 等 .抗乙肝病毒化學(xué)藥物研究進展 .國際藥學(xué)研究雜志 , 2011, 39(4):280-293.

［7］荊永正 , 孫鳳英 , 于學(xué)英 .獻血員感染 HBV 窗口期的病毒核酸篩查 .實用醫(yī)藥雜志 , 2010, 27(012):1064-1066.

2014-05-15］

471600 宜陽縣人民醫(yī)院檢驗科