摘要：建立了同時測定嬰幼兒配方奶粉中維生素A、維生素E（包括）和β-胡蘿卜素等脂溶性維生素的高效液相色譜測定法。采用Zorbax NH（5 um，4.6 mm×250 mm i.d）色譜柱，以體積為750毫升正烷、250毫升甲基叔丁基醚和3毫升甲醇混合，還有純正己烷作為流動相，進(jìn)樣量100 μL， 柱溫箱25℃。方法檢出限0.0001～0.02 mg/kg，加標(biāo)回收率95%～101%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.4%～0.6%。該法具有樣品前處理簡單，靈敏度高，分析時間短等優(yōu)點，適用于嬰幼兒配方奶粉中Vitamin A Palmitate、Vitamin E Acetate、Vitamin E Synthetic和β-carotene的同時測定。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜儀 嬰幼兒配方奶粉 脂溶性維生素

中圖分類號：TS252.7 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1672-5336（2013）20-0028-02

1 引言

油溶性維生素主要包括維生素A、維生素E、維生素D、維生素K等等，雖然這些維生素在體內(nèi)雖然含量很少，但是但在人體生長、代謝過程中卻發(fā)揮著非常重要的作用，因而是嬰兒配方奶粉的重要組成部分。

目前國標(biāo)中測試這些油溶性維生素的方法主要是液相色譜法（1），但是在這些方法中都要用到皂化、萃取，操作復(fù)雜，耗費時間長，容易產(chǎn)生誤差。而本文所采用的用酶解前處理樣品然后用HPLC測定的方法簡單快速，準(zhǔn)確性也較高。

2 實驗

2.1 儀器和試劑

2.1.1 儀器

Waters2695高效液相色譜儀，配置自動進(jìn)樣器，紫外檢測器，熒光檢測器。

2.1.2 試劑和標(biāo)準(zhǔn)品

甲醇，正己烷，甲基叔丁基醚，異辛烷，丁基羥基茴香醚，木瓜蛋白酶，對位苯二酚，無水醋酸鈉，鹽酸，Vitamin A Palmitate標(biāo)準(zhǔn)品、Vitamin E Acetate標(biāo)準(zhǔn)品、Vitamin E Synthetic標(biāo)準(zhǔn)品和β-carotene標(biāo)準(zhǔn)品。市售嬰幼兒配方奶粉。

2%木瓜蛋白酶溶液：用約80毫升水將100毫克對位苯二酚以及4克醋酸鈉溶解在100毫升的燒瓶中。隨后，用稀鹽酸將pH調(diào)節(jié)至5.0。添加2克木瓜蛋白酶，定容。

酸化甲醇：在1升甲醇中添加20毫升乙酸和20毫克丁基羥基茴香醚（BHA）并混合。

2.2 色譜條件

色譜柱：正相Zorbax NH色譜柱；梯度洗脫條件見表1。

柱溫為25℃。

檢測波長：見表2。

流動相A：正己烷 流動相B：750毫升正烷、250毫升甲基叔丁基醚和3毫升甲醇混合。

如果在分析中只需要β-carotene，則可以通過單獨注入50uL，運行HPLC：等度模式（%a=95；%B=5）波長=455nm），運行時間僅為5分鐘。

2.3 樣品處理

準(zhǔn)確稱取0.5g樣品到一根50ml塑料離心管中，加入6ml水，再加入5ml2%木瓜蛋白酶溶液，震蕩渦旋混勻，然后將試管置于37±2°C的恒溫水槽中，放置20-25分鐘。將試樣從恒溫水槽中移出并冷卻（冷凍約5分鐘或冷藏約20分鐘）。加入20毫升酸化甲醇，并混合。用移液管，精確加入10.0ml異辛烷。旋緊蓋子，以防止發(fā)生泄漏，并在震蕩機上振10分鐘。然后按3000rpm，進(jìn)行離心5分鐘，得到上層異辛烷層。將離心管內(nèi)的異辛烷注入進(jìn)樣小瓶內(nèi)，就可以進(jìn)行液相分析。

2.4 定性定量方法

采用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時間對樣品峰進(jìn)行準(zhǔn)確定性，采用外標(biāo)法以峰面積計算定量，依次配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣分析，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3 結(jié)果

表3是用紫外測定VA和β-carotene和用熒光檢測器測定VE的到一些數(shù)據(jù)。

4 結(jié)論

同時測定嬰幼兒配方奶粉中3種酯溶性維生素的高效液相色譜測定方法。該法樣品預(yù)處理簡單，分離度高，明顯提高了檢測效率，且其準(zhǔn)確性和重復(fù)性好，具有推廣應(yīng)用的實際意義。

參考文獻(xiàn)

[1]GB 5413.9-2010嬰幼兒食品和乳品中維生素A、D、E的測定[S].2010.