摘要：目的：探討分析顯色熒光方法檢測牛奶或水中大腸桿菌的效果。方法：對牛奶或水中大腸桿菌使用以MUG為培養(yǎng)基的顯色熒光法和標(biāo)準(zhǔn)方法進行檢測，使用大腸桿菌的最可能數(shù)（MPN值）對牛奶樣品中的大腸桿菌數(shù)進行評價。對比分析檢測結(jié)果。結(jié)果：使用顯色熒光法檢測牛奶或水中大腸桿菌，檢測結(jié)果和標(biāo)準(zhǔn)方法相同；顯示熒光法的試驗時間為21.3h，明顯少于標(biāo)準(zhǔn)方法，p<0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義；對牛奶樣品進行的大腸桿菌最可能數(shù)檢測，使用MUG培養(yǎng)基和其它標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基的MPN值一致。結(jié)論：以MUG為培養(yǎng)基的顯色熒光法的綜合檢測效果要優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)方法。

關(guān)鍵詞：顯色熒光方法 標(biāo)準(zhǔn)方法 大腸桿菌

中圖分類號：TS252.7 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1672-5336（2013）20-0024-02

隨著生活水平的不斷提高，人們對食品安全也提出了更高要求，牛奶是日常重要的消費食品之一，生產(chǎn)牛奶的過程復(fù)雜，因而需要嚴(yán)格監(jiān)控和檢測每個步驟以及半成品、成品是否符合衛(wèi)生安全需要[1]。大腸桿菌是牛奶和水中常見的細(xì)菌，當(dāng)含量超標(biāo)時會對人體產(chǎn)生危害[2]。使用標(biāo)準(zhǔn)方法檢測牛奶中大腸桿菌的試驗步驟復(fù)雜，準(zhǔn)備工作耗時長，往往無法較好地滿足實際生產(chǎn)對快速檢測的需要[3]。我們對牛奶或水中大腸桿菌使用以MUG為培養(yǎng)基的顯色熒光法和標(biāo)準(zhǔn)方法進行檢測，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料和方法

1.1 基本材料

選用的培養(yǎng)基主要包括月桂基硫酸鹽蛋白胨培養(yǎng)基（LST）、伊紅美藍培養(yǎng)基、品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基、從Sigma公司采購的MUG培養(yǎng)基；選用的培養(yǎng)液主要包括煌綠乳膽鹽（BGLB）、乳糖蛋白胨培養(yǎng)液。使用磷酸鹽作為緩沖液，液體轉(zhuǎn)移使用玻璃試管。在無菌培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)溶液，在溫度為7-44℃恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)箱中有紫外儀。對所有實驗使用器具在高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌。

1.2 方法

分別使用顯色熒光方法和標(biāo)準(zhǔn)方法對稀釋牛奶和水樣品中的大腸桿菌進行檢測。顯色熒光法具體為：取100ml牛奶稀釋液或水樣或標(biāo)準(zhǔn)菌株稀釋液加入到配制的MUG培養(yǎng)基中，緩慢搖勻，同時制作陽性、陰性樣品進行對照。將培養(yǎng)液置于室溫下培養(yǎng)24h后放置在可見光和紫外光下（366nm）仔細(xì)觀察培養(yǎng)基的顏色變化和熒光現(xiàn)象。有藍紫色熒光產(chǎn)生的培養(yǎng)基說明大腸桿菌的存在。牛奶和水中大腸桿菌的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法分別參照相關(guān)文獻進行。最后的樣品為6個分別為加入標(biāo)準(zhǔn)菌株稀釋液的牛奶樣品（1號樣品）、本地不同區(qū)域的自來水樣品（2，4，5號樣品）、加入標(biāo)準(zhǔn)菌株稀釋液的自來水樣品（3號樣品）、標(biāo)準(zhǔn)菌株稀釋液（6號樣品）。

1.3 大腸桿菌數(shù)評價標(biāo)準(zhǔn)

使用大腸桿菌的最可能數(shù)（MPN值）對大腸桿菌數(shù)進行評價。牛奶樣品使用磷酸鹽緩沖液按梯度稀釋法分別稀釋為1：10、1：100、1：1000（體積比）倍的稀釋液。將這3種稀釋倍數(shù)的稀釋液分別加入到裝有培養(yǎng)基的試管中進行培育，最后每支試管取1ml的稀釋液進行檢測。同時做陰性對照品。在室溫下仔細(xì)觀察被檢試管，查看是否有顏色變化或熒光產(chǎn)生。同時參考最可能數(shù)（MPN）表進行計算。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS14.0處理所有數(shù)據(jù)，統(tǒng)計學(xué)方法使用t檢驗，p<0.05，為差異統(tǒng)計學(xué)顯著。

2 結(jié)果

我們的研究結(jié)果顯示使用顯色熒光法1、3、6號樣品均為大腸桿菌陽性，和標(biāo)準(zhǔn)方法相同。同時我們發(fā)現(xiàn)顯示熒光法的試驗時間為21.3h，明顯少于標(biāo)準(zhǔn)方法，p<0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義，見附表2。

我們對牛奶樣品進行的大腸桿菌最可能數(shù)檢測，結(jié)果顯示使用MUG培養(yǎng)基和其它標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基的MPN值一致。

3 討論

隨著生活水平的不斷提高，人們對食品安全也提出了更高要求，牛奶是日常重要的消費食品之一，生產(chǎn)牛奶的過程復(fù)雜，因而需要嚴(yán)格監(jiān)控和檢測每個步驟以及半成品、成品是否符合衛(wèi)生安全需要。使用標(biāo)準(zhǔn)方法檢測牛奶中大腸桿菌的試驗步驟復(fù)雜，準(zhǔn)備工作耗時長，往往無法較好地滿足實際生產(chǎn)對快速檢測的需要。

微生物酶學(xué)中一個重要的科學(xué)現(xiàn)象就是細(xì)菌特異性酶和特異性底物結(jié)合后，可導(dǎo)致反應(yīng)物顯色或發(fā)光[4]。這個科學(xué)原理被成功地應(yīng)用到對大腸菌群和大腸桿菌的檢測中。我們使用的MUG培養(yǎng)基就符合這一反應(yīng)原理[5]。我們的檢測結(jié)果顯示使用顯色熒光法對大腸桿菌檢測的陽性率和標(biāo)準(zhǔn)方法相同。使用顯色熒光法對牛奶樣品進行的大腸桿菌最可能數(shù)檢測，結(jié)果顯示和其它標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基一致。并且使用顯色熒光法的試驗時間明顯短于標(biāo)準(zhǔn)方法。說明以MUG為培養(yǎng)基的顯色熒光法的綜合檢測效果要優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)方法。

參考文獻

[1]黃小平，王瑜.應(yīng)用顯色熒光方法檢測牛奶或水中大腸菌群和大腸桿菌[J].中國乳品工業(yè)，2005，07：541-542.

[2]盧純惠，陳永娟.水中大腸菌群檢測方法研究進展[J].上海環(huán)境科學(xué)，1992，08：24-27.

[3]孫宗科，吳榕，丁培，薛金榮，陳西平，張雅婕，張淑紅，遇曉杰.水中大腸菌群快速檢測方法-酶底物法與多管發(fā)酵法的比較[J].衛(wèi)生研究，2006，04：497-498.

[4]劉松堂，王項南，李芝鳳.快速檢測海水中大腸菌群/大腸桿菌的膜圖像法研究[J].海洋技術(shù)，2008，04：37-40.

[5]袁月明，俞慕華，袁夢.水中大腸菌群和大腸埃希氏菌檢測方法的比較[J].河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2009，03：185-186.