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        猴頭菌多糖水提取工藝的優(yōu)化

        2013-12-31 00:00:00陸智王濤李德靈
        中外食品工業(yè) 2013年10期

        摘要:本文對水提法提取猴頭菇多糖的工藝進行研究,最后得出最優(yōu)化工藝條件為:提取溫度100℃、提取時間120分鐘、料液比為1:18,提取次數(shù)2次。結(jié)果證實了實驗室數(shù)據(jù)的可靠性,為大規(guī)模生產(chǎn)提供了理論依據(jù)。

        關(guān)鍵詞:猴頭菌 多糖 水提取工藝

        中圖分類號:TQ461 文獻標識碼:A 文章編號:1672-5336(2013)20-0016-04

        猴頭菌屬于擔子菌門,猴頭菌科,是一種藥食兩用的真菌。性平,味甘,利五臟,助消化,滋補,素有“山珍猴頭,海味燕窩”之說法。猴頭菌的藥效成分主要有多糖、低聚糖、甾醇、脂肪酸、猴頭菌素和猴頭菌酮等,臨床上試用于治療胃癌、食管癌及胃十二指腸潰瘍、慢性胃炎[1-2]等疾病具有較好的療效。本研究旨在通過研究猴頭菌多糖提取工藝,尋找猴頭菌開發(fā)的途徑,研究結(jié)果對綜合開發(fā)、利用猴頭菌資源具有較大的意義。

        1 材料與方法

        1.1 試驗材料

        1.1.1 猴頭菌子實體

        無極限(中國)有限公司提供95%食用酒精。

        1.1.2 儀器設(shè)備(見圖1)

        1.2 實驗方法

        1.2.1 猴頭菌多糖測定

        精密量取1mL提取液,加入乙醇12mL,搖勻,室溫放置12h,取出,離心,傾去上清液,沉淀用2mL95%乙醇溶液洗滌1次,離心。用水將上述不溶物轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中,水浴溶解,加水稀釋至刻度,搖勻,稀釋十倍,此溶液為樣品測定液。

        分別吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL標準葡萄糖溶液(50mg/mL)置玻璃試管中,用蒸餾水補至1mL,再加入5%苯酚溶液0.5mL,混勻后迅速加入2.5mL濃硫酸,使用漩渦振蕩器使反應(yīng)液充分混合,然后將試管置于沸水浴中反應(yīng)15min,490nm測吸光度,以葡萄糖質(zhì)量濃度為橫坐標,吸光度為縱坐標,繪制標準曲線。根據(jù)樣品測定的吸光度值查找標準曲線計算多糖的量。

        1.2.2 不同提取條件分別對多糖得率和含量的影響

        料液比:多糖的水提取溫度100℃,提取時間2h,提取一次,分別以料液比為1:9、1:12、1:15、1:18、1:21提??;提取時間:固定多糖的提取溫度為100℃,根據(jù)第一次試驗結(jié)果,料液比選1:18,提取一次,分別于不同提取時間1h、1.5h、2h、2.5h、3h提取(三個重復(fù));提取溫度:料液比選1:18,時間選2h,提取一次,分別于不同提取溫度60℃、70℃、80℃、90℃、100℃提?。ㄈ齻€重復(fù));提取次數(shù):固定多糖的提取溫度為100℃,提取時間2h,料液比為1:18,我們選取提取次數(shù)1次、2次、3次進行提?。ㄈ齻€重復(fù))。

        提取方法:稱取15g猴頭菌干→加入定量蒸餾水浸泡0.5h,在一定的溫度、料液比下浸提一定時間→提取液用濾布過濾,濾液濃縮到50mL,12000r/min離心,將上清液定容到50mL,取5mL該上清凍干,算得率;取1mL測總糖含量,再取1mL加入12mL無水乙醇,醇沉12h;4000r/min,離心15min,沉淀用95%乙醇清洗,溶于蒸餾水,定容到25mL,取樣,稀釋,用苯酚硫酸法測多糖含量。

        提取率計算方法:得率(%)=(m*10)/15100%,m:50mL上清液凍干后的質(zhì)量,單位為g。

        1.2.3 提取物HPLC分析方法

        緩沖液的配制:用去離子水配制緩沖液,其中NaH2PO4和NaNO3的濃度分別為0.1mol/L和0.3mol/L,用1mol/L的NaOH溶液將pH值調(diào)到7.0,再加10mL的10mg/mLNaN2以防腐,所配制的溶液用0.45μm的濾膜過濾,并用超聲或真空脫氣。

        多糖分子量分布分析:取待分析樣品2mg于1mL緩沖液中,充分溶解,于10000r/min(15000g)離心20min,吸取上清液至2mL色譜瓶中準備上樣分析。

        HPLC的具體分析測試條件如下:TSK PWXL 4000和TSK PWXL3000串聯(lián)使用(或是TSK PWXL 5000);示差檢測器檢測,流速為0.5mL/min,柱溫為35±0.1℃,取20μL上樣。在凝膠柱的分子量分析范圍內(nèi),取葡聚糖標準品Dextran T-5,12,25,50,80,150,270和410各2mg,溶于1mL緩沖液中,10000r/min離心20min。按樣品上樣方法上樣,根據(jù)樣品的保留時間計算分子量分布。

        2 實驗結(jié)果與分析

        2.1 不同料液比提取多糖的結(jié)果

        試驗采用五種料液比進行多糖的提取,分別為1:9、1:12、1:15、1:18、1:21。試驗結(jié)果表明,隨著提取料液比的增加,多糖含量和得率也增高(圖2),但在1:18時達到最高,到1:21又下降。分析原因,料液比對多糖的提取是有影響的,料液比低不利于多糖的提取,料液比太高會提出其它的成分,也會影響其含量。試驗得到的最佳料液比為1:18。

        2.2 不同提取時間對猴頭菌多糖提取的結(jié)果

        采用1h、1.5h、2h、2.5h、3h五個不同的時間對猴頭菌多糖進行提取,試驗結(jié)果表明,提取時間對多糖得率的影響不大,在2.5h略低,而此時多糖的含量則較高。比較子實體凈多糖的得率結(jié)果,提取2h較好,與3h的結(jié)果接近,但從節(jié)能的角度看,提取2h即可。(見圖3)

        2.3 不同提取溫度對猴頭菌多糖提取的結(jié)果

        試驗設(shè)計了五個不同的溫度對猴頭菌多糖進行提取,結(jié)果表明(圖4),在60℃下提取得到的多糖得率較高,多糖含量也較高;隨著溫度的升高,得率略有下降,但多糖的含量仍呈上升趨勢。從試驗結(jié)果看,60℃易于多糖的提取,但實際生產(chǎn)中對溫度的控制不好把握。綜合考慮多糖得率和含量,選取100℃的提取溫度較好。

        2.4 不同提取次數(shù)得到的猴頭菌多糖比較

        將猴頭菌子實體依次提取三次,分別計算每一次得到的猴頭菌多糖的得率和含量。從結(jié)果(表1)可以看出,提取第一次得到的干物質(zhì)量最多,得率為22.3%;第二次仍然有不少多糖提出,得率為10.9%;第三次提取出的干物質(zhì)較少,僅2.4%。從多糖提取制備的成本和效率考慮,提取二次即可。

        2.5 多糖分子量分布

        對不同提取條件下得到的猴頭菌提取物進行HPLC分析,結(jié)果見圖5—圖8。從分析結(jié)果來看,在不同提取方式下得到的提取物分子量分布很接近,在提取時間和提取次數(shù)上略有差別。說明提取因素對多糖分子量的分布影響不大,提取時間短時得到的多糖分子量較小一些,時間長時得到的分子量較大一些。

        黑色為分子量為5萬的葡聚糖標準品,棕色為料液比1:21,紅色為1:18,淺藍為1:15,綠色為1:12,藍色為1:9。

        黑色為分子量為5萬的葡聚糖標準品,棕色提取3h,紅色為2.5h,淺藍為2h,綠色為1.5h,藍色為1h。

        黑色為分子量為5萬的葡聚糖標準品,棕色為提出溫度100℃,紅色為90℃,淺藍為80℃,綠色為70℃,藍色為60℃。

        黑色為分子量為5萬的葡聚糖標準品,淺藍為第3次提取結(jié)果,綠色為第2次,藍色為第1次。

        3 結(jié)論

        (1)本試驗結(jié)果表明:綜合各方面因素考慮,熱水提猴頭菌多糖最優(yōu)工藝條件:提取溫度100℃、提取時間120min、料液比為1:18,提取次數(shù)2次。

        (2)對不同提取條件下得到的猴頭菌提取物進行HPLC分析,從分析結(jié)果來看,在不同提取方式下得到的提取物分子量分布很接近,在提取時間和提取次數(shù)上略有差別。說明提取因素對多糖分子量的分布影響不大,提取時間短時得到的多糖分子量較小一些,時間長時得到的分子量較大一些。

        參考文獻

        [1]徐錦堂.中國藥用真菌學(xué)[M].北京:北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1997.

        [2]楊炎,周昌艷,白韻琴,等.猴頭菌多糖調(diào)節(jié)機體免疫功能的研究[J].食用菌學(xué)報,2000,7(1):19-22.

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