摘要：目的： 提高葡萄酒中合成著色劑檢測方法的回收率和精密度。方法： 改進(jìn)試樣前處理過程中的提取步驟。結(jié)果： 檢測方法的回收率為91.5%-107.2%，測定結(jié)果相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于7.2%。結(jié)論： 改進(jìn)后的檢測方法操作簡便，精密度好準(zhǔn)確度高。

關(guān)鍵詞：精密度 準(zhǔn)確度

中圖分類號：R155.5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1672-5336（2013）22-0030-02

色素（著色劑）作為食品添加劑，可分為食用天然色素和人工合成色素兩大類，前者一般較為安全。人工合成色素是用人工化學(xué)合成方法所制得的有機(jī)色素，主要是以煤焦油中分離出來的苯胺染料為原料制成的，本身無營養(yǎng)價值，但由于其成本低廉、色澤鮮艷、著色力強(qiáng)、性質(zhì)穩(wěn)定、配色方便，可以增加食品的感官美和提高人們的食欲，在食品生產(chǎn)加工行業(yè)中被廣泛應(yīng)用。

研究表明過量攝入人工合成色素，將會在體內(nèi)畜積，對腎臟、肝臟產(chǎn)生一定的傷害。偶氮化合物在體內(nèi)代謝，可形成具有潛在致突變的化合物。因此GB2760-2011《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中對著色劑的使用范圍及限量有明確的規(guī)定，葡萄酒中禁止使用。

1 原理

試樣中的人工合成著色劑用聚酰胺吸附法提取，制成水溶液，注入高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離，根據(jù)保留時間定性和峰面積外標(biāo)法定量。

2 溶劑與材料

（1）甲醇：色譜純。（2）聚酰胺粉（尼龍6）：過200目篩。（3）甲醇+甲酸溶液：6+4。（4）乙醇+氨水+水溶液：7+2+1。（5）檸檬酸溶液：200g/L。（6）pH6、pH4的水：水加檸檬酸溶液調(diào)pH值。（7）乙酸銨溶液：0.02mol/L稱取1.54g乙酸銨加水定容至1000ml溶解，調(diào)pH=4經(jīng)0.45μm濾膜過濾。（8）合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)溶液：采用國家標(biāo)物中心的有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3 儀器和測定條件

（1）高效液相色譜儀：（HPLC）島津SPD-10Avp配有紫外檢測器。（2）色譜柱：SHIMADZU VP-ODS 150mm×4.6mm5um。（3）流動相：甲醇：乙酸銨（0.02mol/L）。（4）梯度洗脫：20%～35%，3min；35%～98%，6min；98%繼續(xù)6min。（5）流速1.0ml/min。（6）波長254nm。（7）進(jìn)樣量20ml。（8）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：RE-52A。

4 樣品前處理

聚酰胺吸附法：稱取10.0g試樣于小燒杯調(diào)pH值到6，放入水浴鍋中加熱至60℃，加1g聚酰胺粉攪拌均勻至無顆粒，用60℃pH=4的水將試樣轉(zhuǎn)移至G3垂融漏斗，然后用甲醇+甲酸混合溶液洗滌3-5次，再用水洗至中性，用乙醇+氨水+水混合溶液解析3-5次，每次5ml，收集解吸液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器的蒸發(fā)瓶中，將蒸發(fā)瓶至于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，蒸發(fā)溫度60℃，蒸發(fā)至干，加pH=6的蒸餾水5.0ml定容，經(jīng)0.45um微孔濾膜過濾后，供HPLC測定。

5 分析結(jié)果

5.1 保留時間與峰形

取濃度為0.05mg/ml合成著色劑混合標(biāo)準(zhǔn)樣品，檢測到檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅和日落黃標(biāo)準(zhǔn)品譜圖。

由圖1可見，本方法所測檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅和日落黃峰形尖銳，對稱性好。

5.2 精密度

取濃度為0.05mg/ml合成著色劑混合標(biāo)樣，連續(xù)進(jìn)樣5次以組分日落黃為例，組分日落黃保留時間和峰面積。

本方法在測定合成著色劑混合標(biāo)樣時，具有良好的精密度和重現(xiàn)性。

5.3 提取效率的測定

取濃度為0.05mg/ml合成著色劑混合標(biāo)準(zhǔn)樣品于試樣同時進(jìn)行試樣前處理，經(jīng)吸附、解析、蒸發(fā)定容測定提取效率結(jié)果如下。

濃度為0.05mg/ml合成著色劑混合標(biāo)準(zhǔn)樣品經(jīng)提取后測定結(jié)果計算出提取效率

本方法在合成著色劑混合標(biāo)準(zhǔn)品提取測定時，提取效率為96.4%-99.4%，所測檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅和日落黃譜圖與合成著色劑混合標(biāo)樣譜圖符合。

5.4 加標(biāo)回收

以紅葡萄酒為基質(zhì)樣品，做加標(biāo)回收率測定。

取不同濃度的合成著色劑混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，加入紅葡萄酒樣品中使最終合成著色劑混合樣品濃度為0.05mg/ml、0.01mg/ml 和0.005mg/ml，檢測到檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅和日落黃的譜圖。

由圖3可見，葡萄酒中添加合成著色劑混合樣品中組分檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅和日落黃峰形尖銳，分離度好。

葡萄酒中添加合成著色劑混合標(biāo)樣獲得平均回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）

測定結(jié)果如下：

不同濃度的樣品回收率測定，回收率在91.5%-107.6%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差2.3-7.2%。

6 結(jié)語

本方法在樣品的前處理過程中，采用蒸發(fā)瓶收集解吸液后，直接連接旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)可蒸發(fā)至干，簡化了試樣的前處理過程，縮短了試樣蒸發(fā)至干的時間。改進(jìn)后樣品的測定數(shù)據(jù)表明該方法穩(wěn)定可靠，樣品回收率在91.5%-107.6%，樣品測定的變異系數(shù)均小于10%，操作簡單方便，靈敏度較高重現(xiàn)性好。

參考文獻(xiàn)

[1] 楊惠芬等主編.《食品衛(wèi)生理化檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)手冊》第二章.

[2] GB/T5009.1～5009.100-2003《食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法 理化部分》.