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(青島大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院特需保健科，山東 青島 266003)

心肌肥厚是心臟對長期、慢性的機械負荷和神經(jīng)遞質等應激反應的一種復雜的代償機制，多表現(xiàn)為左心室心肌肥厚(LVH)。近年來研究證實，心肌肥厚是心力衰竭等疾病的代償階段，長期的、廣泛的心肌肥厚會最終誘發(fā)心腔擴大、心肌纖維化、心力衰竭甚至心源性猝死，是心臟疾患的獨立危險因素以及進展、預后的主要預測因子[1]。動物實驗及遺傳學研究結果顯示，心肌肥厚是多個基因及信號通路參與的復雜病理過程[2]。從遺傳學角度揭示其發(fā)病機制，已經(jīng)成為該疾病的研究熱點。本研究應用基因芯片技術，分析內(nèi)皮素-2(ET-2)A985G基因多態(tài)性，探討ET-2基因多態(tài)性與老年原發(fā)性高血壓病人左心室心肌肥厚的相關性。

1 對象和方法

1.1 研究對象

2010年1月—2012年10月，隨機抽取就診于我科原發(fā)性高血壓病人312例，男204例，女108例；年齡60～90歲，平均72.32歲。排除繼發(fā)性高血壓、心臟瓣膜病、嚴重心腦血管疾病、肝腎功能衰竭、惡性腫瘤病人。所有病人均簽署知情同意書。

1.2 檢測指標及方法

1.2.1基線特征 收集研究對象的糖尿病、冠心病病史、用藥史以及社會學特征等資料。測量病人身高、體質量，留取病人尿液及空腹12 h靜脈血，自動生化儀分別檢測三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、血糖、尿素氮、肌酐。根據(jù)2012年美國糖尿病聯(lián)合會(ADA)糖尿病臨床指南,糖尿病診斷標準：空腹血糖≥7.0 mmol/L，或餐后2 h血糖≥11.1 mmol/L。

1.2.2血壓測定 病人于安靜環(huán)境中靜息30 min以上，采用水銀血壓計測右上臂血壓，取3次非同日血壓的均值。根據(jù)WHO制定標準，高血壓定義為收縮壓(SBP)≥18.67 kPa和(或)舒張壓(DBP)≥6.75 kPa和(或)服用降壓藥物。

1.2.3超聲心動圖檢查 應用GE Vivid 7型多功能彩色多普勒超聲診斷儀，二維探頭M3S，顯示胸骨旁左心室長軸切面。根據(jù)美國心臟超聲協(xié)會推薦方法，測量標準左心室長軸切面M型超聲連續(xù)的3個心動周期并取平均值，測量左心室舒張末期內(nèi)徑(LVDd)、左心室后壁厚度(LVPWT)、舒張期室間隔厚度(IVST)、射血分數(shù)(EF)，計算左心室質量(LVmass)、左心室質量指數(shù)(LVMI)和心臟指數(shù)(CI)。LVmass(g)=1.04×[(LVDd+IVST+LVPWT)3-(LVDd)3]-13.6，體表面積(m2)=0.0061×身高+0.0128×體質量-0.1529，LVMI=LVmass/體表面積。左心室肥厚的診斷標準[3]：男性LVMI>134 g/m2,女性LVMI>110 g/m2。根據(jù)超聲心動圖檢查結果將研究對象分為心肌肥厚組(103例)及非心肌肥厚組(對照組，209例)。

1.2.4ET-2 A985G基因多態(tài)性測定 采集病人肘靜脈血3～5 mL，二胺四乙酸(EDTA)50 μL抗凝處理。應用低滲法裂解紅細胞分離得到白細胞。應用飽和酚-氯仿法提取白細胞基因組DNA，加入TE溶解DNA，-20 ℃保存。將提取到的DNA通過聚合酶鏈式反應擴增ET-2基因的特異片段。反應條件：92 ℃熱啟動5 min；92 ℃變性25 s，55 ℃退火25 s，72 ℃延伸25 s，35個循環(huán)；72 ℃延伸5 min，最后冷卻至4 ℃?；蛐酒cPCR擴增產(chǎn)物于雜交倉中混勻雜交，加顯色溶液后置于BaiO基因生物芯片識讀儀上檢測，Array Doctor圖像軟件自動分析生成檢測結果，檢測ET-2基因多態(tài)性位點。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結 果

2.1 心肌肥厚組與對照組基線特征比較

心肌肥厚組與對照組比較，BMI、HDL-C、LDL-C差異均有統(tǒng)計學意義(t=-2.709～3.654，P<0.05)；收縮壓、舒張壓、血糖、性別、冠心病病史、糖尿病病史差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2 兩組彩色多普勒心臟超聲參數(shù)比較

心肌肥厚組與對照組彩色多普勒心臟超聲參數(shù)LVDd、LVPWT、IVST、EF、LVMI比較，差異均有顯著性(t=-2.116～12.481,P<0.05);CI差異無顯著性(P>0.05)。見表2。

2.3 基因型及等位基因的頻率分布及關聯(lián)性

遺傳平衡檢驗結果顯示，總體、心肌肥厚組、對照組的基因型分布均符合HWE，樣本具有群體代表性。心肌肥厚組基因型GG、GA、AA所占的比例分別為59.22%、37.86%、2.91%，對照組所占比例分別為78.95%、19.14%、1.91%，兩組基因型分布比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=13.57，P<0.01)，其中心肌肥厚組與對照組基因型GG與基因型AG+AA比較，差異有顯著意義(χ2=13.44，P<0.01)。等位基因G與A所占的比例：心肌肥厚組分別為78.15%、21.84%，對照組88.52%、11.48%，兩組比較差異有顯著性(χ2=5.35，P<0.01)。

2.4 不同基因型超聲參數(shù)比較

基因型AG+AA組與GG組比較,LVPWT、IVST、LVMI差異均有顯著性(t=2.215～2.507,P<0.05)；兩組病人年齡、BMI、HDL-C、LDL-C及LVDd比較，差異無顯著性(P>0.05)。見表3。

2.5 二分類Logistic回歸分析

將心肌肥厚有無定義為因變量(非心肌肥厚=0，心肌肥厚=1)；將年齡、HDL-C、LDL-C、糖尿病有無(非糖尿病病人=0，糖尿病病人=1)、冠心病有無(非冠心病病人=0，冠心病病人=1)及ET-2的優(yōu)勢基因(基因型GG=0,基因型AG+AA=1)定義為自變量，進行二分類Logistic回歸分析。結果表明，HDL-C可能為心肌肥厚的保護因素(OR=0.319，95%CI=0.155～0.656)，冠心病史可能是心肌肥厚的危險因素(OR=3.880，95%CI=1.857～8.110)，基因型AG+AA可能為心肌肥厚的危險因素(OR=2.588，95%CI=1.239～5.404)。見表4。

3 討 論

1989年，INOUE提出了“內(nèi)皮素家族”的概念，并根據(jù)其異構體的發(fā)現(xiàn)順序命名為ET-1、ET-2和EF-3。迄今為止，已發(fā)現(xiàn)ETA、ETB、ETC和VIC等4種亞型；其中，ETA大約占內(nèi)皮素受體總數(shù)的90%。已有研究證實，內(nèi)皮素系統(tǒng)參與心肌肥厚的形成，ET-1可能作為重要的致肥厚因子參與心肌肥厚的形成[4]。LU等[5]研究顯示，DY-9760e可以通過抑制CaMKII和ERK信號通路，抑制ET-1誘導的心肌細胞肥大。INOUE等[6]通過對豬與麻醉大鼠的冠狀動脈的研究表明，從縮血管的活性及動脈血壓的恢復時間上考慮，內(nèi)皮素系統(tǒng)3種異構體作用ET-2>ET-1>EF-3，認為該現(xiàn)象可能與ET-2的色氨酸殘基導致的高疏水性有關。ET-2基因定位于1p34，A985G多態(tài)性的具體機制尚未明確。近年國外學者研究顯示，ET-2 A985G基因多態(tài)性亦可能參與心肌肥厚的形成[7]。但國內(nèi)有關該基因多態(tài)性與高血壓致左心室心肌肥厚的研究則少見報道。

表1 心肌肥厚組與對照組基線資料比較±s)

表2 心肌肥厚與對照組彩色多普勒心臟超聲參數(shù)比較±s)

表3 基因型GG與AG+AA病人彩色多普勒心臟超聲參數(shù)比較±s)

表4 心肌肥厚組與對照組二分類Logistic回歸分析

以往關于ET-2的研究多集中在其與腫瘤的相關性方面。2010年100項心血管研究新成果中，美國哈佛大學STRUHL提出腫瘤與心血管疾病可能擁有共同的分子通路和相似的遺傳背景。因此，ET-2基因影響腫瘤發(fā)生發(fā)展過程的分子機制可能在心血管疾病中同樣適用。MATTHEW等[8]首次證明，ET-2的自分泌通過ETB作用于腫瘤細胞從而避免其在低氧狀態(tài)下出現(xiàn)細胞損傷，通過促進抗凋亡因子增加、葡萄糖攝入的增多及抑制凋亡信號實現(xiàn)。這種能量供應的改變在心肌細胞中同樣存在。正常的心肌細胞中，脂肪酸氧化作用為其提供主要的能量來源(60%～70%)，而葡萄糖與乳酸的代謝供給則僅占總能量合成的30%[9]。病理性心肌肥厚的心肌細胞則以脂肪酸氧化代謝降低、葡萄糖代謝增加為其特征；在分子水平主要表現(xiàn)為心肌細胞肥大的同時伴有細胞凋亡及細胞外基質纖維化。BILSEN等[10]研究顯示，心肌肥厚時主要能量供給的改變可能是肥厚的心肌細胞對低氧狀態(tài)、能量不足的一種保護性代償機制。近年來，原發(fā)性高血壓誘導血流動力學指標改變與ET-2 A985G基因多態(tài)性的相關性已見于國外的報道[11]。

NAGAI等[7]進行的HapMap data研究結果顯示，不同種族的A985G基因多態(tài)性A等位基因的比例為4%～31%，本研究與之相符；A等位基因可能為心血管疾病的保護性基因[7]。而本研究結果顯示，心肌肥厚組等位基因G與A所占比例分別為78.15%、21.84%，對照組為88.52%、11.48%，兩組比較差異有顯著性；基因型AG+AA可能為心肌肥厚的危險因素。提示A等位基因可能為高血壓致左心室肥厚的危險因素之一，ET-2 A985G基因多態(tài)性與高血壓致左心室心肌肥厚相關，ET-2的A等位基因可能為該病的危險因素。

本研究系回顧性研究，較前瞻性研究具有一定局限性，樣本量偏小，難以避免選擇性偏倚，有待于加大樣本進一步研究。

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