，，，，，

(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬青島市市立醫(yī)院病理科，山東 青島 266071)

肺癌是我國常見惡性腫瘤之一，近年來其發(fā)病率和病死率不斷上升[1]。小細(xì)胞肺癌(SCLC)占全部肺癌的15%～20%，是一種高度惡性腫瘤，生長迅速，可早期發(fā)生轉(zhuǎn)移，目前治療主要是以化療和放療為主的綜合治療措施。研究表明，SCLC中神經(jīng)內(nèi)分泌的免疫標(biāo)記物如神經(jīng)細(xì)胞黏附分子(CD56)、嗜鉻蛋白A(CgA)、突觸素(Syn)有不同程度的表達(dá)[2-3]；也有研究結(jié)果表明，甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1蛋白(TTF-1)在SCLC中表達(dá)較高[4]。本研究通過免疫組化法檢測(cè)SCLC與非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織中CD56、CgA、Syn及TTF-1的表達(dá)，旨在探討其對(duì)SCLC聯(lián)合診斷的價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料來源

收集2009年11月—2012年3月我院病理科確診的活檢或手術(shù)切除的SCLC標(biāo)本62例(實(shí)驗(yàn)組)。實(shí)驗(yàn)組62例中，男58例，女4例；年齡41～79歲，中位年齡為64歲；其中2例為中分化鱗癌并SCLC,2例為低分化鱗癌并SCLC，2例為SCLC伴局灶腺癌；活檢組織34例，手術(shù)組織28例；有吸煙史者48例(77.4%)；中央型60例，周圍型2例；局限期20例，廣泛期42例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者38例。隨即選取NSCLC病人40例標(biāo)本作為對(duì)照組(腺癌22例，鱗癌12例，大細(xì)胞癌6例)。

1.2 試劑及方法

標(biāo)本均經(jīng)過40 g/L的中性甲醛固定、石蠟包埋及常規(guī)連續(xù)切片。切片經(jīng)脫蠟、水化后放入PBS沖洗，檸檬酸緩沖液中微波處理修復(fù)；以體積分?jǐn)?shù)0.03的過氧化氫室溫孵育10 min阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，依次加入抗體室溫孵育，PBS沖洗，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，光鏡下觀察。用已知的陽性切片作為陽性對(duì)照，PBS代替一抗作為空白對(duì)照。全部單克隆抗體SP法試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.3 結(jié)果判斷

結(jié)果由兩位病理醫(yī)生獨(dú)立觀察每張免疫組化切片后做出判斷。CD56、CgA、Syn的陽性表達(dá)均為細(xì)胞膜和(或)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒沉積；TTF-1陽性為細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒沉積。陽性表達(dá)判斷標(biāo)準(zhǔn)見文獻(xiàn)[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各指標(biāo)在SCLC與NSCLC組織中的表達(dá)

CD56、CgA、Syn、TTF-1在SCLC組織中的陽性表達(dá)率分別為93.5%(58/62)、9.7%(6/62)、87.1%(54/62)、80.6%(50/62)，CD56、Syn、TTF-1為彌漫陽性，CgA多為局灶弱陽性；CD56、CgA、Syn、TTF-1在NSCLC組織中的陽性表達(dá)率分別為7.5%(3/40)、0(0/40)、15.0%(6/40)、47.5%(19/40)；TTF-1在NSCLC腺癌組織中陽性表達(dá)率為72.7%(16/22)，在鱗癌及大細(xì)胞癌組織中的陽性表達(dá)率均為16.7%(2/12、1/6)；CD56、Syn、TTF-1在SCLC組織中的陽性表達(dá)均顯著高于NSCLC(χ2=12.21～74.89，P<0.01)。CD56、CgA、Syn、TTF-1在SCLC活檢組織中的陽性表達(dá)率為94.1%(32/34)、11.8%(4/34)、88.2%(30/34)、82.4%(28/34)；在手術(shù)組織中陽性表達(dá)率分別為92.9%(26/28)、7.1%(2/28)、85.7%(24/28)、78.6%(22/28)；CD56、CgA、Syn及TTF-1在SCLC活檢組織與手術(shù)組織中的陽性表達(dá)率比較差異均無顯著性(P>0.05)。SCLC組織中，CD56與CgA、Syn與CgA、TTF-1與CgA的陽性表達(dá)率比較，差異均有顯著性(χ2=63.04～87.32,P<0.01)。

2.2 SCLC組織中各指標(biāo)表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系

SCLC組織中CD56、CgA、Syn及TTF-1的表達(dá)在不同臨床病理學(xué)參數(shù)之間(如年齡、性別、有無吸煙史、腫瘤的分期與分型及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)差異均無顯著性(P>0.05)。見表1。

3 討 論

SCLC的惡性程度高，侵襲能力強(qiáng)，通常在診斷時(shí)已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移。由于活檢組織擠壓較重，通過HE染色進(jìn)行病理診斷難度較大，因此通過免疫組化法對(duì)SCLC進(jìn)行早期診斷具有重要意義。

CD56是一種神經(jīng)細(xì)胞黏附分子(NCAM)，主要分布于大多數(shù)神經(jīng)外胚層來源細(xì)胞、組織和腫瘤中。近年來研究顯示，CD56在SCLC組織中有較高的表達(dá)。FARINOLA等[6]報(bào)道CD56在SCLC組織及其淋巴結(jié)中的陽性表達(dá)率為100%(8/8)；KONTOGIANNI等[7]研究20例SCLC活檢標(biāo)本結(jié)果顯示，該組織中CD56均呈陽性表達(dá)，甚至受擠壓部分的腫瘤組織中CD56也有較高的表達(dá)。Syn、CgA作為傳統(tǒng)的神經(jīng)內(nèi)分泌的免疫標(biāo)記物，常用于SCLC及胃腸道類癌的診斷[8]。TTF-1主要表達(dá)于甲狀腺及肺腫瘤，近年來研究顯示，其在SCLC和肺腺癌中有較高表達(dá)[4]。HIROSHIMA等[9]研究顯示，TTF-1是SCLC的一種敏感而特異的免疫標(biāo)記物，其陽性表達(dá)率為80%～90%。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CD56、Syn、TTF-1在SCLC中的陽性表達(dá)均顯著高于NSCLC，而TTF-1在SCLC中的陽性表達(dá)與肺腺癌比較差異無顯著性。其中CD56、TTF-1在SCLC中的表達(dá)率與近年國內(nèi)外文獻(xiàn)大多數(shù)報(bào)道的結(jié)果較一致，Syn與CgA的表達(dá)結(jié)果與以往報(bào)道的結(jié)果有差異[10]。

國外有研究將CD56列入神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤診斷標(biāo)記物[6,11]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CD56在SCLC組織中有高表達(dá)率，進(jìn)一步證實(shí)了CD56對(duì)SCLC的診斷價(jià)值。作為傳統(tǒng)的神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)志物，本研究中Syn的陽性表達(dá)率要比以往文獻(xiàn)報(bào)道的水平偏高，而CgA的陽性表達(dá)率比以往文獻(xiàn)報(bào)道的水平偏低，但由于Syn、CgA表達(dá)的高特異性，應(yīng)用Syn及CgA對(duì)SCLC的協(xié)助診斷有幫助。SCLC與低分化肺鱗癌及大細(xì)胞癌有時(shí)在形態(tài)上很難區(qū)分，有研究結(jié)果表明，TTF-1在SCLC中的表達(dá)較高，在肺鱗癌及大細(xì)胞癌中的表達(dá)較低[4,9]。本實(shí)驗(yàn)TTF-1在SCLC中的陽性表達(dá)率較高，在肺鱗癌及大細(xì)胞癌組織中的表達(dá)率均較低，表明TTF-1可以作為區(qū)分SCLC與肺鱗癌及大細(xì)胞癌的免疫標(biāo)記物。

表1 SCLC組織中各指標(biāo)表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系(例)

鑒于CD56、CgA、Syn及TTF-1在SCLC中的特異性均較高，聯(lián)合應(yīng)用上述4項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)可以有效鑒別SCLC與NSCLC，進(jìn)一步提高SCLC診斷的準(zhǔn)確率。SCLC組織中CD56、CgA、Syn、TTF-1的表達(dá)在活檢組織中與手術(shù)切除組織中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示可以通過活檢組織中上述4項(xiàng)指標(biāo)的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)SCLC病人進(jìn)行診斷；它們?cè)诓煌呐R床病理學(xué)參數(shù)之間(如年齡、性別、有無吸煙史、腫瘤的分期與分型及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)的差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即各指標(biāo)的表達(dá)不受病理學(xué)參數(shù)的影響，在腫瘤早期無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的時(shí)候就可以檢測(cè)到，表達(dá)較穩(wěn)定。

綜上所述，CD56、CgA、Syn及TTF-1對(duì)SCLC的診斷以及鑒別診斷有重要作用，它們具有穩(wěn)定表達(dá)及特異性高的特點(diǎn)，聯(lián)合應(yīng)用有助于對(duì)SCLC進(jìn)行診斷、早期診斷，從而進(jìn)行早期治療。

[1] SPIRA A, ETTINGER D S. Multidisciplinary management of lung cancer[J]. N Engl J Med, 2004,350(4):379-392.

[2] 云徑平,向錦,侯景輝,等. CD56在小細(xì)胞組織中的表達(dá)及其對(duì)診斷中應(yīng)用[J]. 癌癥, 2005,24(9):1140-1143.

[3] BEASLEY M B. Immunohistochemistry of pulmonary and pleural neoplasia[J]. Arch Pathol Lab Med, 2008,132(7):1062-1072.

[4] FUJITA J, OHTSUKI Y, BANDOH S, et al. Expression of thyroid transcription factor-1 in 16 human lung cancer cell lines[J]. Lung Cancer, 2003,39:31-36.

[5] 趙海濱,楊樹東,周志華,等. 腎原發(fā)性神經(jīng)內(nèi)分泌癌臨床病理觀察[J]. 診斷病理學(xué)雜志, 2011,18(2):121-123.

[6] FARINOLA M A, WEIR E G, ALI S Z. CD56 expression of neuroendocrine neoplasms on immunophenotyping by flow cytometry: a novel diagnostic approach to fine-needle aspiration biopsy[J]. Cancer, 2003,99(4):240-246.

[7] KONTOGIANNI K, NICHOLSON A G, BUTCHER D, et al. CD56 a useful tool for lung carcinomas on biopsies with extensive crush artifact [J]. Clin Pathol, 2005,58,(9):978-980.

[8] 林東亮,李玉軍,趙潔,等. Secretagogin在胃腸道類癌診斷中的作用[J]. 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2010,46(3):258-262.

[9] HIROSHIMA K, IYODA A, SHIDA T, et al. Distinction of pulmonary large cell neuroendocrine carcinoma from small cell lung carcinoma: a morphological, immunohistochemical, and molecular analysis[J]. Mod Pathol, 2006,19:1358-1368.

[10] NICHOLSON S A, BEASLEY M B, BRAMBILLA E, et al. Small cell lung carcinoma (SCLC): a clinicopathologic study of 100 cases with surgical specimens[J]. Am J Surg Pathol, 2002,26(9):1184-1197.

[11] YAMAMOTO J, OHSHIMA K, IKEDA S, et al. Primary esophageal small cell carcinoma with concomitant invasive squamous cell carcinoma or carcinoma in situ[J]. Hum Pathol, 2003,34(11):1108-1115.