李海麗 ，潘國慶 ，酉志亮，姜 偉，南康鵬

1青海民族大學化學與生命科學學院，青海 西寧810007;2 青海省植物化學資源重點實驗室，青海 西寧810007

紫堇屬(Corydalis DC. )全球約320 種，主要產(chǎn)于亞洲。我國約200 余種，全國均有分布，以西南部種類分布最多，其中青藏高原約120 余種。賽北紫堇［Corydalis impatiens(Pall.)Fisch］為罌粟科紫堇屬植物［1，2］。賽北紫堇是藏藥應用中很重要的藥材，用于治療各種出血、肝炎、膽囊炎、流感等疾病，也有將其用于治療跌打損傷或其它外傷、發(fā)燒、腸胃炎等［3，4］。

但是迄今為止，賽北紫堇藥理活性的研究尚處于空白階段，本試驗對賽北紫堇總生物堿的鎮(zhèn)痛藥理活性進行了初步的研究，為藏藥賽北紫堇的臨床用藥提供了理論基礎。

1 材料、動物與儀器

1.1 藥品與試劑

藏藥賽北紫堇總生物堿提取物，每克生藥約含0.04399 g 生物堿(藏藥賽北紫堇于2011 年8 月21日采于青海省貴德縣，并經(jīng)由青海省藥檢所藏藥室駱桂法研究員鑒定，總生物堿提取物是由粗粉經(jīng)2%鹽酸滲漉提取，提取液濃縮至小體積后加堿堿化至pH =12，收集沉淀干燥即得，待用時用生理鹽水稀釋);阿司匹林泡騰片(阿斯利康制藥有限公司，生產(chǎn)批號1101102);生理鹽水;冰醋酸為分析純。

1.2 試驗動物

KM 小白鼠，雌雄兼用，體重(20 ±2)g，購于青海省實驗動物中心，青醫(yī)動字第2012004 號，飼養(yǎng)于青海民族大學動物飼養(yǎng)室，環(huán)境溫度22～26 ℃，相對濕度55%～65%。動物飲用純凈水，飼料購于青海省實驗動物中心(普通全價顆粒飼料Ⅱ號)，適應環(huán)境一周后進行實驗，實驗前禁食不禁水12 h。

1.3 試驗儀器

RB-200 智能熱板儀(成都泰盟科技有限公司);XB-5200B 超聲波清洗(寧波新芝生物科技股份有限公司);FA1604 電子天平(上海精密科學儀器有限公司);金馬牌JPT-5 架盤天平(上海岑達天平秤有限公司);灌胃器;量筒等。

2 試驗方法與結(jié)果

2.1 統(tǒng)計學方法

2.2 對熱刺激所致小鼠疼痛的影響［5，6］

取健康雌性小鼠，體重18～22 g，實驗前對小鼠進行篩選，智能熱板儀溫度設定在(55.0 ±0.5)℃，預熱10 min。將小鼠置于熱板儀上，以放置熱板儀至出現(xiàn)小鼠舔后足所需時間(s)為該鼠的正常痛閾值，重復2 次，每次間隔30 min，以2 次痛閾值平均值作為該小鼠給藥前的正常痛閾值。凡在5 s 內(nèi)或在30 s 后才出現(xiàn)舔后足及跳躍者均棄之不用。選出合格小鼠50 只，隨機分成5 組，每組10 只，空白對照(生理鹽水)組，陽性對照(阿司匹林)組，藏藥賽北紫堇總生物堿高、中、低組(計量依據(jù)前期藏藥賽北紫堇總生物堿對小鼠LD50 測定的試驗，根據(jù)藥典以其LD50 8.55 mg/mL 生物堿的0.2 倍、0.15倍、0.1 倍為高中低劑量)。按表1 給藥，灌胃給藥1次/天，連續(xù)灌胃7 d，末次給藥后15、30、45、60 min測定痛閾值，若給藥后小鼠的痛閾值超過60 s，立即取出，以免燙傷，其痛閾值以60 s 計算。結(jié)果見表1。

表1 賽北紫堇總生物堿對小鼠熱板法痛閾值的影響(x+s)Table 1 Effect of Saibei Corydalis on pain threshold of mice in hot-plate test (±s)

表1 賽北紫堇總生物堿對小鼠熱板法痛閾值的影響(x+s)Table 1 Effect of Saibei Corydalis on pain threshold of mice in hot-plate test (±s)

注:與空白對照組比較* P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01。Note:Compare with control * P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01.

組別Group劑量Dose(mg/kg)給藥前痛閾值The pain threshold before administration(s)給藥后不同時間的痛閾值The pain threshold after administration(s)15 min 30 min 45 min 60 min空白對照組Control — 12.20 ±0.65 13.92 ±4.22 12.89 ±3.47 12.44 ±4.56 13.41 ±2.97阿司匹林組Aspirin 40 13.00 ±4.16 21.91 ±19.63＊＊ 18.53 ±10.78＊＊ 0.81 ±5.37＊＊ 15.60 ±5.15紫堇高劑量組Saibei Corydalis-H 34.2 13.25 ±2.57 18.36 ±3.83* 20.53 ±1.45＊＊ 34.11 ±4.00＊＊＊ 16.36 ±3.04*紫堇中劑量組Saibei Corydalis-M 25.65 14.79 ±3.27 16.13 ±4.80 15.92 ±4.28 17.95 ±3.64* 15.64 ±2.62紫堇低劑量組Saibei Corydalis-L 17.1 12.96 ±3.17 13.41 ±6.16 14.47 ±5.42 16.91 ±4.19 14.63 ±4.62

結(jié)果顯示賽北紫堇總生物堿高、中、低劑量組均能顯著提高小鼠對熱反應的痛閾值，在給藥45min后各組出現(xiàn)最大痛閾值，并且高劑量組與空白對照組比較在各時間段均出現(xiàn)顯著性差異，顯示藏藥賽北紫堇總生物堿對熱刺激所致小鼠疼痛具有鎮(zhèn)痛作用。

2.3 對醋酸引起的小鼠扭體反應的影響［7，8］

取健康小鼠50 只，體重18～22 g，隨機分為5組，每組10 只，空白對照(生理鹽水)組，陽性對照(阿司匹林)組，藏藥賽北紫堇總生物堿高、中、低組(計量依據(jù)前期藏藥賽北紫堇總生物堿對小鼠LD50測定的試驗，根據(jù)藥典以其LD50 8.55 mg/mL 生物堿的0.2 倍、0.15 倍、0.1 倍為高中低劑量)。灌胃給藥1 次/天，連續(xù)灌胃7 d，每組小鼠連續(xù)灌胃給藥1 周后，再腹腔注0.6%的醋酸溶液0.2 mL，注射醋酸15 min 后，觀察記錄小鼠的扭體反應次數(shù)并計算各組平均值和抑制百分率。結(jié)果見表2。

表2 賽北紫堇總生物堿對醋酸所致小鼠扭體反應的影響(±s)Table 2 Effect of Saibei Corydalis on writhing body response of mice induced by acetic acid (±s)

表2 賽北紫堇總生物堿對醋酸所致小鼠扭體反應的影響(±s)Table 2 Effect of Saibei Corydalis on writhing body response of mice induced by acetic acid (±s)

注:與空白對照組比較* P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01。Note:Compare with control * P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01.

組別Group劑量Dose(mg/kg)扭體次數(shù)Number ofwrithing抑制率Inhibition (%)Control－45.7 ±10.2 0阿司匹林組Aspirin 250 26.8 ±13.4＊＊ 41.4紫堇高劑量組Saibei Corydalis-H 34.2 25.1 ±3.5＊＊ 45.1紫堇中劑量組Saibei Corydalis-M 25.65 27.9 ±9.6＊＊ 38.9紫堇低劑量組Saibei Corydalis-L 17.1 30.2 ±10.1*空白對照組33.9

結(jié)果顯示阿司匹林組和賽北紫堇總生物堿各組的扭體次數(shù)均明顯減少，均與空白對照組比較有顯著性差異，顯示賽北紫堇總生物堿對醋酸引起的小鼠扭體反應產(chǎn)生的疼痛有明顯的鎮(zhèn)痛作用。

3 討論

紫堇屬植物絕大多數(shù)具清熱解毒，除濕止痛功效，用于發(fā)燒感冒、風濕痹痛，外治瘡瘍癰腫等癥。藏藥賽北紫堇中醫(yī)藥用部位為全草，清熱解毒，用于腫痛，疥癖瘡毒，毒蛇咬傷刀傷等，藏醫(yī)藥用部位為全草，譯名桑格絲哇，可活血散瘀利氣止痛，治胃炎，胃潰瘍跌打損傷，坐骨神經(jīng)痛，另有藏醫(yī)用止血記載［1］。

植物化學研究表明，本屬植物含多種生物堿，是防治心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病及抗病毒、抗癌的有效成分［4］，但鎮(zhèn)痛藥效學仍處于空白階段，本實驗通過采用小鼠熱板法和醋酸扭體法觀察藏藥賽北紫堇總生物堿的鎮(zhèn)痛作用。在熱板實驗中，藏藥賽北紫堇生物堿延長了小鼠的痛閾值，說明藥賽北紫堇生物堿對由熱引起的疼痛有一定緩解作用;扭體實驗是化學刺激物注射到小鼠腹腔引起深部的、大面積而較持久的疼痛刺激，是篩選鎮(zhèn)痛藥最常用的模型之一，藏藥賽北紫堇生物堿對冰醋酸引起小鼠的扭體反應具有較好的緩解作用。在實驗過程中觀察到藏藥賽北紫堇高劑量組在30、45 min 時可明顯延長小鼠痛閾值，并且藏藥賽北紫堇各組均能減少小鼠扭體次數(shù)，具有明顯的鎮(zhèn)痛作用［9-11］。

青海產(chǎn)藏藥賽北紫堇植物，海拔在2500～5700 m 間，被藏醫(yī)視為珍貴藥材［12］，并且青海省該植物資源豐富，且易于采收加工，若從藥理方面進行嚴格篩選，有可能制成安全、有效、廉價的新成藥用于中醫(yī)、藏醫(yī)臨床。

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