陳 強(qiáng)，王立成，費(fèi)東亮，蘇禹剛

布魯氏菌病（Brucella）流行范圍廣，危害大，不僅威脅人、家畜及野生動(dòng)物的健康［1］，還嚴(yán)重影響了乳、肉及其制品等。在中國流行的主要是牛、羊、豬3種布魯氏菌?。?］。全世界有3.5億的人受到本病的威脅［3］。分離到錦州地區(qū)的布魯氏菌菌株，有利于了解它在本地的流行特點(diǎn)，對保障本地人畜的生命安全有著重要的意義。本試驗(yàn)在對錦州地區(qū)兩家奶牛場布魯氏菌血清學(xué)檢測的基礎(chǔ)上，采集陽性牛的全血和奶樣進(jìn)行了布魯氏菌的分離和純培養(yǎng)。

1 材料與方法

1.1 樣品

奶牛場的血清126份，全血15份和奶樣71份。

1.2 培養(yǎng)基、試劑及儀器

布魯氏菌病試管凝集抗原；標(biāo)準(zhǔn)陰、陽性血清；革蘭氏染色液；液體培養(yǎng)基等；奧林巴斯顯微鏡。以上用品全部由遼寧醫(yī)學(xué)院畜牧獸醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.3 試管凝集試驗(yàn)（SAT）檢測方法與步驟

第1～4管分別加入稀釋液1.2mL、0.5mL、0.5mL、0.5mL，然后吸取奶牛血清0.05mL，加入第1管內(nèi)，充分混勻后棄去0.25mL。吸0.5mL第1管內(nèi)液體加入第2管，混勻，再吸第2管內(nèi)液體0.5 mL到第3管，再吸第3管內(nèi)液體0.5mL到第4管，最后第4管棄去0.5mL液體。將0.5mL20倍稀釋的抗原加入管中，并振搖均勻，置37℃溫箱24 h，取出檢查并記錄結(jié)果。每次試驗(yàn)均應(yīng)設(shè)陰、陽性血清和抗原對照。

1.4 細(xì)菌分離培養(yǎng)

1.4.1 細(xì)菌分離 將奶樣充分搖勻，無菌條件下在選擇性培養(yǎng)基上均勻涂布。平皿放于37℃5%CO2溫箱，每天注意菌落生長，詳細(xì)記下菌落數(shù)量等。

將全血充分搖勻，無菌條件下移0.2mL至雙相培養(yǎng)基中，注意混勻，放于37℃5%CO2溫箱，每天注意菌落生長，詳細(xì)記下菌落數(shù)量等。

1.4.2 細(xì)菌純培養(yǎng) 用接種環(huán)挑取平皿上的單菌落，交叉劃線接種于固體和液體培養(yǎng)基，放于37℃5%CO2溫箱，觀察純培養(yǎng)細(xì)菌的生長特性。

1.5 革蘭氏染色法鑒定

涂片固定→草酸銨結(jié)晶紫染1min→自來水沖洗→加碘液覆蓋涂面染約1min→水洗，用吸水紙吸去水分→加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色，20s后水洗，吸去水分→蕃紅染色液（稀）染2min后，自來水沖洗。干燥，鏡檢［4］。

2 結(jié)果與分析

2.1 試管凝集試驗(yàn)（SAT）檢測結(jié)果

見表1，從表1中得知，牛場1和牛場2奶牛布魯氏菌檢測陽性率分別為31.6%、27.4%。

表1 試管凝集試驗(yàn)（SAT）檢測結(jié)果

2.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)果

從兩牛場所采集的71份奶樣分離培養(yǎng)共獲得7株細(xì)菌。培養(yǎng)基上觀察到透明、邊緣整齊、隆起的露珠狀菌落。

2.3 革蘭氏染色結(jié)果

革蘭氏染色法染色7株菌全部被染成紅色、短棒狀。

3 討論

由于布魯氏菌生長緩慢、對營養(yǎng)的要求高［5］，再加上奶樣中可能混有其他細(xì)菌，而這些細(xì)菌易于生長，所以就影響了布魯氏菌的分離率。本試驗(yàn)結(jié)果表明，從71分奶樣中共分離得到7株布魯氏菌。

4 結(jié)論

對錦州地區(qū)兩家奶牛場的126頭奶牛進(jìn)行布病檢測，對71只陽性牛只采集病料分菌，分離純化菌株7株，均為布魯氏菌，應(yīng)當(dāng)引起足夠重視。

［1］白文彬，于康震主編.動(dòng)物傳染病診斷學(xué)［M］.中國農(nóng)業(yè)出版社，2002.621－627.

［2］毛開榮.動(dòng)物布魯氏茵病防治研究進(jìn)展［J］.中國獸藥雜志，2003，37（9）：39－40.

［3］尚德秋.布氏菌病研究進(jìn)展［J］.中國地方病防治雜志，2004，19（4）：204－212.

［4］蔡一非，范偉興，伊日蓋.兩奶牛場布氏桿菌分離鑒定及四種血清學(xué)檢測方法比較［J］.中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2009，24（4）：40－42.

［5］雷連成.布魯氏菌鑒定和檢測方法研究進(jìn)展［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2002，33（2）：22－24.