★ 廖寶源 李長達(dá) 孫蔚華 方慧瓊（.江西省贛州市食品藥品檢驗(yàn)所 贛州34000；.江西贛州市第三人民醫(yī)院 贛州34000）

藥物中的殘留溶劑是指在原料藥或賦型劑的生產(chǎn)中，以及在制劑制備過程中使用的，但在工藝過程中未能完全去除的有機(jī)溶劑[1]。由于殘留溶劑不僅沒有療效，還可能增加藥物的毒副作用，而且影響藥物的穩(wěn)定性，故所有的有機(jī)溶劑應(yīng)盡可能除去。為了保護(hù)患者免受藥物中殘留有機(jī)溶劑的傷害，需對藥品在生產(chǎn)過程中引入的有機(jī)溶劑殘留量進(jìn)行測定[2]。恩替卡韋是一種用于治療乙肝病毒感染的新一代鳥嘌呤核苷類似物口服藥[3]，主要用于治療成人伴有病毒復(fù)制活躍和血清轉(zhuǎn)氨酶持續(xù)增高，或肝組織學(xué)為活動(dòng)性病變的慢性乙型肝炎，是目前降病毒最快最強(qiáng)、變異幾率最低的核苷類似物[4]。由于合成本品過程中使用三氯甲烷等有機(jī)溶劑，故有可能會殘留在產(chǎn)品中。資料表明，氯仿具有致癌、致畸、致突變作用，長期接觸將對人體產(chǎn)生嚴(yán)重影響[5，6]。本文參考中國藥典2005 年版二部有關(guān)品種三氯甲烷殘留量檢測方法，建立了氣相色譜法，結(jié)果表明本法分離度高、靈敏、準(zhǔn)確且簡便。

1 儀器與試劑

Agilent 7890A氣相色譜儀（配有ECD檢測器），恩替卡韋原料（廠方提供，批號20090515、20090520、20090526）。三氯甲烷、二甲基亞砜均為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-624 毛細(xì)管柱（30m×0.53mm×3.0μm）；柱溫：初始60℃，保持6 分鐘，再以20℃∕分鐘的升溫速率升溫至200℃，保持4 分鐘；檢測器：ECD；檢測器溫度：300℃；進(jìn)樣口溫度：200℃；載氣：氮?dú)猓髁?.5mL∕min）；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣；分流比：15：1；進(jìn)樣體積：1.0μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取三氯甲烷12.4mg，迅速加入已裝有適量二甲基亞砜溶劑的100mL 量瓶中，定容至刻度，搖勻，精密量取1mL 至50mL 量瓶中，定容至刻度，搖勻，即得三氯甲烷對照溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取本品0.2g，置5mL量瓶中，加二甲基亞砜溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.4 空白干擾試驗(yàn)

取三氯甲烷對照品溶液、供試品溶液及有機(jī)溶劑二甲基亞砜照上述色譜條件分別進(jìn)樣，結(jié)果空白溶劑對恩替卡韋的三氯甲烷殘留量測定無干擾。見圖1。

圖1 氣相色譜圖

2.5 最低檢測量

取對照溶液稀釋10-9倍得三氯甲烷的檢出限溶液，按上述色譜條件測定，結(jié)果最低檢出量為2.457 54×10-9μg∕mL，相對供試品最低檢出量為6×10-14g∕g。

2.6 精密度試驗(yàn)

取上述三氯甲烷對照品溶液，照上述色譜條件進(jìn)行氣相分析，連續(xù)進(jìn)樣5次，RSD為0.99%。

2.7 線性關(guān)系

精密量取上述三氯甲烷對照溶液1mL、2mL、5mL、8mL、10mL，分別置10mL 量瓶中，分別加入二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，即得濃度分別為10%、20%、50%、80%、100%的溶液，作為線性回歸測定溶液。分別照上述色譜條件進(jìn)樣測定，每個(gè)濃度測定3 份，取平均值，以濃度為X軸，以峰面積為Y值，計(jì)算線性回歸方程：Y= 4030.204 1X+380.918 4，r＝1.000 0。結(jié)果表明三氯甲烷在0.2457 54-2.457 54 μg∕mL濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.8 回收率試驗(yàn)

精密稱取樣品（批號20090520）約0.2g，置5mL量瓶中，用上述濃度為50%、80%、100%的溶液溶解，并稀釋至刻度，即得回收率測定溶液。照上述色譜條件測定，每個(gè)濃度測定3份，計(jì)算平均回收率為96.99%，RSD為0.98%。

2.9 樣品測定

取本品3 批（批號20090515、20090520、200905 26）樣品，分別制成供試品溶液，照上述色譜條件測定。結(jié)果見表1。

表1

3 討論與小結(jié)

3.1 色譜柱的選擇

試驗(yàn)中先后選擇了DB-1、DB-1701、HP-5、DB-624等不同極性的色譜柱，以在DB-624上的峰形和分離度最佳。

3.2 溶劑介質(zhì)的選擇

由于三氯甲烷在水中溶解度極小[7，8]，所以不宜用水作溶解介質(zhì)，考慮到恩替卡韋的的溶解度，且二甲基亞砜（DMSO）沸點(diǎn)不高，用其作溶解介質(zhì)有利于待測溶劑及溶解介質(zhì)的有效汽化和縮短分析時(shí)間。

3.3 檢測器的選擇

三氯甲烷在FID 檢測器上靈敏度低，無法準(zhǔn)確定量，因?yàn)槠浣Y(jié)構(gòu)上含有鹵原子，改用ECD 檢測器后靈敏度顯著提高，所以選擇ECD檢測器檢測三氯甲烷[1、8]。

[1]國家藥典委員會.中國藥典.（二部）[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄54-57.

[2]王衛(wèi).藥品中有機(jī)溶劑殘留量及其測定[J].天津藥學(xué)，2001，13（3）：26-27.

[3]姚光弼，張定風(fēng)，王寶恩，等.替卡韋抗乙型肝炎病毒劑量和療效的研究[J].中華肝臟病雜志，2005，13（7）：484-485.

[4]李金金，耿長新，呂志國.恩替卡韋治療慢性乙型肝炎30例[J].世界華人消化雜志，2009，17（4）：425-426.

[5]丁錦舂，陳儲良.水中揮發(fā)性鹵代烴的危害性及其分析方法的研究現(xiàn)狀[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，1995，5（6）：364-366.

[6] Yang CY，Chiu HF. Chlorination of drinking water and cancer mortality in Taiwan[J].Environ Res，1998.78：1-6.

[7]容凱文，霍燕蘭，李月微.氣相色譜法測定酒石酸長春瑞濱中三氯甲烷的殘留量[J].今日藥學(xué)，2010，20（6）：30-32.

[8]宋更申，姜建國.GC-ECD法測定馬來酸桂哌齊特中三氯甲烷的殘留量[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2010，11（3）：211-212.