★ 許偉英 張繼全 沈潔 任世禾*(.上海中醫(yī)藥大學附屬市中醫(yī)院 上海0007;.上海中醫(yī)藥大學中藥現(xiàn)代制劑技術教育部工程研究中心 上海003)
新咳靈合劑為我院自制制劑,處方由黃芩、浙貝母、麻黃、夏枯草等中藥組成,具有宣肺止咳的作用,臨床用于感冒后咳嗽,咽癢及慢性支氣管炎等。本制劑長期在臨床使用,療效確切。鑒于該制劑的質(zhì)量標準尚未建立含量測定項,本文參考《中國藥典》2010 版一部黃芩苷含量測定等有關文獻[1-3],采用高效液相色譜法對其含量進行測定。該方法簡便,快速,重現(xiàn)性好,可為完善新咳靈合劑質(zhì)量標準提供依據(jù)。
1.1 儀器
Agilent 1100 高效液相儀,VWD 檢測器(Agilent公司,美國);Shiseido Capcell pak MG C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm);XS-105 電子分析天平(Sartorius,瑞士);超純水器(上海賽鴿電子科技有限公司);T890∕H超聲波清洗器(Elma,德國)。
1.2 試藥
黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110715-201016 供含測用);新咳靈合劑(自制,批號:110923、111005、111022);乙腈為色譜純(Merck,德國),其余試劑為分析純。
2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應性實驗
色譜柱:Shiseido Capcell pak MG C18(250mm×4.6mm,5μm),流動相:乙腈-水(96:4),流速:1mL∕分,柱溫:25℃,檢測波長:203nm,進樣量:10μL。理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計算應不低于2500。
2.2 對照品溶液的制備
精密稱取黃芩苷對照品5.02mg,置50mL 的容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,配制成0.1004mg∕mL的黃芩苷對照品溶液,備用。
2.3 供試品溶液的制備
精密吸取本品1mL,加流動相稀釋,定容至5mL,搖勻,0.45μm微孔濾膜過濾,即得。
2.4 陰性對照溶液的制備
按質(zhì)量標準中處方比例制成缺黃芩的樣品,制備陰性對照溶液,依法測定。結(jié)果表明,新咳靈合劑中其他成分對黃芩中黃芩苷的測定無干擾。
圖1 對照品、供試品色譜圖
2.5 線性關系考察
精密吸取以上黃芩苷對照品溶液1、2、4、6、8、10mL 至10mL 容量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻,按以上色譜條件測定,以峰面積(y)對進樣量(x),進行線性回歸,得回歸性方程y=2503.7x+3.6958,r=0.9998,線性范圍為:0.1004-1.0040μg,說明在其線性范圍內(nèi)峰面積與進樣量呈良好的線性關系。結(jié)果見表1。
表1 線性關系考察
2.6 精密度試驗
精密吸取濃度為60.2μg∕mL 對照品溶液,按以上色譜條件,連續(xù)進樣6次,記錄峰面積A值,RSD=0.31%,結(jié)果表明本方法精密度良好。結(jié)果見表2。
2.7 重復性試驗
精密吸取同一批號為111005 的供試品溶液6份,按2.3 項下方法處理,進樣10uL,計算新咳靈合劑中黃芩苷的含量,結(jié)果RSD 為0.15%,表明供試品溶液重復性良好。結(jié)果見表3。
2.8 穩(wěn)定性試驗
取2.7 項下1 號樣品溶液,照上述色譜條件,于0、2、4、6、8小時分別進樣,測定黃芩苷峰面積A值,計算RSD 為0.39%(n=5),結(jié)果表明供試品溶液在8h內(nèi)基本穩(wěn)定。結(jié)果見表4。
表2 供試品精密度試驗結(jié)果
表3 供試品重復性試驗結(jié)果
表4 供試品穩(wěn)定性試驗結(jié)果
表5 加樣回收率實驗結(jié)果
2.9 加樣回收率試驗
精密稱取0.5mL 已知含量的批號為111005 的供試品9 份,分別加入濃度為0.1004mg∕mL 的對照品適量,按照供試品溶液制備項下方法處理,測定峰面積,計算回收率,結(jié)果見表5。
2.10 樣品的含量測定
取3 批新咳靈合劑,分別按照供試品項下方法制備,按上述色譜條件分別進行測定,計算黃芩苷的含量。結(jié)果見表6。
表6 樣品含量測定結(jié)果
3.1 供試品處理方法的選擇,由于本品為合劑,直接稀釋后即可測定,試驗中對供試品采用不同稀釋倍數(shù)后進樣測定,結(jié)果表明供試品在稀釋5 倍后目標成分的峰面積與對照品相當,故選擇供試品處理方法為,取本品1mL,加流動相稀釋定容至5mL。
3.2 流動相選擇,實驗過程中曾用文獻[2-3]報道的黃芩苷的含量測定方法進行實驗,采用甲醇:水:磷酸:三乙胺(60:40:0.2:0.2)和乙腈:0.25%磷酸(24:76)作為流動相,發(fā)現(xiàn)其分離效果不是很理想,經(jīng)多次實驗,確定乙腈:水(96:4)作為流動相。
3.3 本法樣品處理方法簡單,重現(xiàn)性及分離度好,能較好測定新咳靈合劑中黃芩苷的含量,為完善和提高新咳靈合劑質(zhì)量標準提供依據(jù)。
[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].第1部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:282-283.
[2]錢穎.HPLC 法測定清肺合劑中黃芩苷含量[J].首都醫(yī)藥,2011,2:53-54.
[3]胡大強,楊曉軍,傅若秋.HPLC法測定養(yǎng)咽合劑中黃芩苷的含量[J].中國藥師,2012,15(3):332-334.