★ 賴佐發(fā) 廖寶源 鐘國慶 (江西省贛州市食品藥品檢驗所 贛州341000)

胃得康膠囊是以行氣止痛，用于氣滯所致的胃病為主治病癥的復(fù)方膠囊制劑，由延胡索(醋制)、佛手、雞骨香、白及、枯礬、石菖蒲等中藥組方。為有效控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，筆者應(yīng)用薄層色譜(TLC)法建立了佛手、延胡索(醋制)、石菖蒲的鑒別方法，采用高效液相色譜(HPLC)法對延胡索中主要有效成分廷胡索乙素進行了含量測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1260 型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司);電子天平BS110(北京賽多利斯天平公司);USC－302 型超聲波清洗器(上海波龍電子設(shè)備有限公司)。佛手對照藥材(批號為120933 －200303)、延胡索對照藥材(批號為120928 －201007 )、石菖蒲對照藥材(批號為121098 －200904 )均購自中國藥品生物制品檢定所，供薄層色譜對照鑒別用;延胡索乙素對照品(批號為110726 －201112，含量為99.6% )購自中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用;胃得康膠囊(批號分別為090801，090802，090803，江西保利制藥有限公司);硅膠G(國藥集團化學(xué)試劑有限公司);甲醇為色譜純，水為蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

佛手［1］167:取本品內(nèi)容物4.0g，加乙醇l0mL，超聲處理30 分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇10mL 使溶解，置中性氧化鋁柱上，以無水乙醇40mL洗脫，收集洗脫液，減壓回收溶劑至干，殘渣加無水乙醇2mL 使溶解，作為供試品溶液。另取佛手對照藥材0 5g，加乙醇5 mL，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005 年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各2μL，分別點于同一硅段G 溥層板上，以環(huán)己烷一乙醇乙酯(3∶1)為展開劑，展開.取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。而陰性對照品溶液則無此斑點(圖1 A)。

延胡索［1］130:取延胡索對照藥材lg，加甲醇20mL，加熱回流l 小時，濾過，濾液蒸干，殘渣用10%醋酸20mL 使溶解，加濃氮試液調(diào)節(jié)pH 值至10 －1l，用乙醚振搖提取3 次，每次20mL.合并乙醚提取液，蒸干，殘渣加甲醇lmL 使溶解，作為對照藥材溶液。另取延胡索乙素對照品適量，加甲醇制成每1mL 含0.5mg 的溶液作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010 年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各2 μL，含量測疋項下供試品溶液2μL 分別點于同一硅段G 溥層板上，以正己烷一甲醇一乙醇乙酯一濃氨試液(8∶2∶2∶0.1)為展開劑，展開.取出，晾干，置碘蒸氣。熏3 分鐘后取出，揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。而陰性對照品溶液則無此斑點(圖1B)。

石菖蒲［1］85:取本品內(nèi)容物4g，加水50mL，加熱回流30 分鐘，濾過，濾液用石油醚(30 －60℃)振搖提取2 次，每次l5mL，合并石油醚液，蒸干，殘渣加甲醇2mL 使溶解，作為供試品溶液。另取石菖蒲對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010 年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液10 μL，對照藥材溶液5 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以石油醚(60 －90℃)－乙酸乙酯(3∶1)為展開劑，展開. 取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相同的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。而陰性對照品溶液則無此斑點(圖1C)。

圖1 薄層色譜圖

2.2 延胡索乙素含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱:DiamonsilC18 柱(200 mm×4.6 mm，5μm);以甲醇－0.1%磷酸(三乙胺調(diào)pH = 6. 0)(62 ∶38)為流動相:檢測波長為282nm;柱溫:40℃;流速:1. 0 mL /分;進樣量:10μL。理論板數(shù)按延胡索乙素峰計算應(yīng)不低于3 000。

2.2.2 溶液制備 精密稱取延胡索乙素對照品適量，加甲醇制成每1mL 含48ug 的溶液，即得。取本品裝量差異項下的內(nèi)各物，混勻，取約3g，精密稱定，精密加入甲醇－ 濃氨試液(20 ∶1)混合溶液50mL，稱定重量，加熱回流1 小時，放冷，加甲醇－濃氨試液(20∶1)混合溶液補足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液25mL. 蒸干，殘渣用10% 醋酸20mL 使溶解于分液漏斗中，用濃氨試液凋節(jié)pH 值至10 －11，加乙醚振搖提取4 次，每次20mL，合并乙醚提取液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中.加甲醇至刻度，搖勻，即得。取缺延胡索的陰性樣品約3 g，精密稱定，按供試液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察 干擾試驗:照上述色譜條件，分別取供試品溶液、對照品溶液和陰性對照品溶液各10μL，分別注入色譜儀。供試品溶液色譜圖中，在與對照品溶液色譜圖相應(yīng)位置上顯示相同保留時間的色譜峰，而陰性對照品溶液在此保留時間處無干擾(見圖2)。

線性關(guān)系考察:分別精密吸取延胡索乙素對照品溶液(0.096 0 g /L )1、2、5、8、10mL，置10mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配成質(zhì)量濃度分別為0.009 6、0.019 2、0.048 0、0.076 8、0.096 0 g/L系列對照品溶液。分別精密吸取上述對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)、延胡索乙素質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程Y=1156.6X－1.133 3，r=0.999 9。結(jié)果:延胡索乙素進樣量在0.096 －0.960μg 范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗:精密吸取延胡索乙素對照品溶液(0.048 g /L)10 μL，按上述色譜條件重復(fù)進樣6次，測定延胡索乙素峰面積積分值。結(jié)果的RSD 為0.71% (n=6 )，表明精密度良好。

重現(xiàn)性試驗:取同一批(批號為090801 )樣品，依法制備供試品溶液并測定。結(jié)果平均含量為100.4ug / 粒，RSD 為0.87%(n =6 )，表明重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品(批號為090801)溶液，分別于0，2，4，6，8，12 小時時分別進樣10μL，測定延胡索乙素的峰面積。結(jié)果的RSD 為0. 48%，表明供試品溶液在12 小時內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗:取延胡索乙素對照品約12.0mg，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取續(xù)濾液10mL 置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.048 g /L 的對照品溶液，備用。取已知含量的樣品(批號為090801 )1.5 g，精密稱定，分別加入上述延胡索乙素對照品溶液1 mL，各2 份，按供試品溶液的制備方法制備加樣回收供試品溶液，分別進樣10μL，測定。結(jié)果見表1。

表1 延胡索乙素加樣回收試驗結(jié)果(n=6 )

2.2.4 樣品含量測定 取胃得康膠囊3.0 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備溶液并進樣10 μL，測定峰面積，計算延胡索乙素的含量。結(jié)果批號為090801，090802，090803 的樣品中延胡索乙素的含量分別為100.4，100.6，100.8 μg /粒。

圖2 高效液相色譜圖

3 討論

延胡索乙素(dl － tet rahy dro palmat ine，dl －THP)是從中藥延胡索中提取的生物堿，其左旋體l－T HP 又稱顱痛定，具有鎮(zhèn)痛作用［2］。近年來發(fā)現(xiàn)還有降壓、抗心率失常、抗血栓、鈣拮抗、抑制胃酸分泌等藥理作用［2］。2010 年版《中國藥典(一部)》中延胡索以甲苯－丙酮(9∶2)為展開劑，為了避免使用甲苯，采用了正己烷一甲醇一乙醇乙酯一濃氨試液(8 ∶2 ∶2 ∶0. 1)為展開劑，取得很好的分離效果。［1］佛手醇提取液具有明顯鎮(zhèn)咳，平喘，祛痰作用和提高抗應(yīng)激能力。［4］采用了2010 年版《中國藥典(一部)》佛手的薄層鑒別方法［1］，但供試品經(jīng)過中性氧化鋁柱，可消除延胡索的干擾，并分別與陰性對照溶液進行對照，結(jié)果沒有干擾、專屬性強。延胡索乙素為延胡索中的主要有效成分，并且在方中的含量較高，因此選擇延胡索乙素作為胃得康膠囊含量測定的指標(biāo)成分。采用了2010 年版《中國藥典》(一部)延胡索含量測定項下的流動相，分離效果好，無干擾，結(jié)果準(zhǔn)確。本試驗建立的定性、定量方法，可用于胃得康膠囊的質(zhì)量控制。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)［M］. 北京. 中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［2］徐婷，金昔陸，曹惠明.延胡索乙素藥理作用的研究進展［J］. 中國臨床藥學(xué)雜志，2001，(1):58 －59

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［5］景玉宏，馮慎遠，湯曉琴，等.石菖蒲對學(xué)習(xí)記憶的影響及突觸機制［J］.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2002，8(6):38.

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［7］金國章，胡江元.顱通定(rotundin e)的鎮(zhèn)痛作用機制與多巴胺受體－中藥延胡索研究的系統(tǒng)論壇［M］.見:藥理學(xué)進展(1999).北京:科學(xué)出版社，1999:64 －73.