左 濤，李學(xué)敏，曹 露，王靜鳳，王玉明，李兆杰，薛長(zhǎng)湖，唐慶娟

(中國(guó)海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院山東青島 266003)

腸道不僅是消化吸收的重要場(chǎng)所，也是生物體最大的免疫器官。腸道粘膜面積龐大，它的結(jié)構(gòu)和功能構(gòu)成了強(qiáng)大的粘膜免疫系統(tǒng)。腸粘膜免疫是全身免疫的一部分，其功能不僅僅作用于腸粘膜，還參與全身免疫功能的調(diào)節(jié)。分泌型IgA(SIgA)是由小腸上皮細(xì)胞分泌的免疫球蛋白，在腸道粘膜表面起到重要的免疫保護(hù)作用，用以抵抗外來(lái)微生物如細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)等的入侵，是腸道免疫屏障的主要效應(yīng)因子。腸道SIgA主要是通過(guò)小腸上皮細(xì)胞的pIgR(多聚免疫球蛋白受體)穿胞轉(zhuǎn)運(yùn)dIgA從而分泌到細(xì)胞外的，在腸腔中 SIgA發(fā)揮粘膜防御功能［1－3］。當(dāng)腸道的免疫屏障受到應(yīng)激、化療藥物(如環(huán)磷酰胺)、免疫抑制劑、燒傷等內(nèi)部或外界因素影響而被削弱時(shí)，輕者發(fā)生腸炎，重者甚至?xí)＜吧?］。因此，保護(hù)腸道粘膜免疫屏障的完整性，維持SIgA的正常分泌，對(duì)于防治腸源性感染、保護(hù)人類健康至關(guān)重要。

大量研究表明，許多多糖類物質(zhì)可以明顯改善機(jī)體免疫力。但是，具有改善腸道免疫促進(jìn)SIgA分泌活性的多糖類物質(zhì)鮮有報(bào)道。魷魚(yú)墨主要由黑色素和富含巖藻糖的粘多糖組成，具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、升高白細(xì)胞、抗輻射以及促凝血等多種生理活性，是一種極具應(yīng)用潛力的天然資源［5］。已有報(bào)道證實(shí)，魷魚(yú)墨黑色素具有免疫調(diào)節(jié)作用［6］，而且魷魚(yú)墨粘多糖也能夠明顯改善氫化可的松所致的小鼠免疫功能低下?tīng)顩r［7］。但迄今尚未見(jiàn)魷魚(yú)墨多糖與腸道粘膜免疫關(guān)系的報(bào)道。

北太平洋魷魚(yú)(Ommastrephes bartrami)是目前的一種主要捕撈和加工魷魚(yú)品種，在中國(guó)、日本都有較高的產(chǎn)量。其個(gè)體墨囊相對(duì)較大，一般一個(gè)成熟魷魚(yú)的魷魚(yú)墨囊大約占其體重的1.3%，而在其加工過(guò)程中，墨囊往往作為廢棄物丟棄，一些國(guó)家甚至為處理這些加工廢棄物投入大量的財(cái)力和物力。因此，研究魷魚(yú)墨的加工再利用具有重要的意義。本文主要研究魷魚(yú)墨多糖對(duì)免疫低下模型小鼠的腸道免疫調(diào)節(jié)作用，旨在篩選出改善腸粘膜免疫的活性成分，為魷魚(yú)墨多糖在食品、營(yíng)養(yǎng)保健等領(lǐng)域的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 魷魚(yú)墨囊 北太平洋魷魚(yú)墨囊，由浙江舟山漁業(yè)公司提供，－20℃凍藏，使用時(shí)于0℃解凍。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康♂Balb/c小鼠50只(體質(zhì)量18－22 g)，SPF級(jí)，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào):SCXK(京)2007－0001;

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器 試劑:氯化鈉，甲醛(10%)，磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉，均為國(guó)產(chǎn)分析純;環(huán)磷酰胺購(gòu)自江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司;膜蛋白提取試劑盒(上海生工);Mouse SIgA ELISA Kit(武漢USCNK);Mouse pIgR ELISA Kit(武漢 USCNK);Mouse IgA antibody(Bethyl Laboratories);山羊抗SABC免疫組化試劑盒(博邁德);濃縮型DAB試劑盒(Solarbio);TRIzol(Invitrogen);M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶(Promega);dNTP(TaKaRa);RNase inhibitor(Roche);隨機(jī)引物B0043-9(上海生工生物工程有限公司);儀器:高速臺(tái)式離心機(jī)TGL-16G(上海安亭科學(xué)儀器廠);酶標(biāo)儀Model680(美國(guó)Bio RAD產(chǎn)品);全溫振蕩培養(yǎng)箱(HZQ-F)(哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司);電熱恒溫水浴鍋(HHS-Ni)(北京長(zhǎng)安科學(xué)儀器廠)，光學(xué)顯微鏡(Olympus BX41)，凝膠成像系統(tǒng)(Tanon GIS-2000，上海天能科技有限公司)。

1.4 方法

1.4.1 魷魚(yú)墨粗多糖制備 魷魚(yú)墨囊解凍去皮經(jīng)水浸泡過(guò)夜，超速離心后得到魷魚(yú)墨上清液。上清液經(jīng)木瓜蛋白酶酶解、醇沉、丙酮洗，再經(jīng)三氯乙酸除去雜蛋白，所得溶液透析后經(jīng)真空冷凍干燥，得魷魚(yú)墨粗多糖樣品。粗多糖的得率約為1.5%(m/V)，粗多糖樣品中多糖含量使用苯酚－硫酸法檢測(cè)濃度為68.9%，蛋白含量使用福林－酚法檢測(cè)濃度為8.9%。

1.4.2 環(huán)磷酰胺腹腔注射液劑量的確定 通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)將36只Balb/c小鼠，按體重隨機(jī)分成6組，每組6只，分別為1組正常組小鼠和5組環(huán)磷酰胺模型組小鼠。5組環(huán)磷酰胺模型組小鼠分別連續(xù)腹腔注射環(huán)磷酰胺(50 mg·kg－1)1、2、3、4、5 d，d6 脫頸椎處死小鼠。刮取腸粘膜，測(cè)定脾指數(shù)、胸腺指數(shù)和腸粘膜SIgA分泌量。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)連續(xù)2 d注射環(huán)磷酰胺已造成胸腺、脾嚴(yán)重受損，SIgA分泌量也明顯下降。故確定環(huán)磷酰胺最終注射劑量與時(shí)間為:連續(xù)2 d腹腔注射環(huán)磷酰胺(50 mg·kg－1)構(gòu)建機(jī)體免疫下降小鼠模型。

1.4.3 魷魚(yú)墨多糖灌胃劑量確定 通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)將50只Balb/c小鼠，按體重隨機(jī)分成5組，選擇魷魚(yú)墨多糖灌胃劑量為 2 mg·kg－1、20 mg·kg－1、200 mg·kg－1，28 d灌胃飼養(yǎng)。于第25天開(kāi)始連續(xù)兩天給予小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺(50 mg·kg－1)處理。第28天殺鼠刮取腸粘膜通過(guò)酶聯(lián)免疫反應(yīng)試劑盒測(cè)定腸道SIgA分泌量與脾指數(shù)、胸腺指數(shù)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)各組中僅200 mg·kg－1劑量魷魚(yú)墨多糖具有明顯改善胸腺指數(shù)、脾指數(shù)與腸粘膜SIgA的功效。故將后續(xù)試驗(yàn)小鼠灌胃劑量確定為50、100、200 mg·kg－1。

1.4.4 動(dòng)物分組 將50只Balb/c小鼠，按體重隨機(jī)分成5組:正常對(duì)照組、模型組、低、中、高劑量組，每組10只(飼養(yǎng)在專門動(dòng)物飼養(yǎng)籠內(nèi)，給予清潔無(wú)菌喂養(yǎng))。飼養(yǎng)小鼠28 d，每日給以小鼠低、中、高劑量組分別灌胃魷魚(yú)墨多糖50、100、200 mg·kg－1，正常組、模型組分別灌服同等體積的生理鹽水;并每日記錄體重;最后連續(xù)2 d，模型組、低、中、高劑量組腹腔注射環(huán)磷酰胺(50 mg·kg－1)，正常組注射等體積的無(wú)菌生理鹽水。第28天小鼠禁食不禁水12 h，脫頸椎處死小鼠檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)。

1.4.5 胸腺指數(shù)/脾指數(shù) Balb/c小鼠于末次給藥后，禁食不禁水12 h，分別稱重，脫頸椎處死，剝離胸腺、脾臟稱重并計(jì)算胸腺/體重和脾臟/體重比值。

1.4.6 小腸組織切片及HE染色結(jié)構(gòu)觀察 小鼠處死后，沿腹部正中線切開(kāi)，取出靠近空腸5～10 cm片段于中性甲醛中固定。將甲醛固定的小腸組織于進(jìn)行小腸石蠟包埋、組織切片制備與HE染色，中性樹(shù)膠封片。

1.4.7 小腸粘膜SIgA含量測(cè)定 沿小鼠腹部正中線切開(kāi)，用鑷子與剪刀小心取出靠近十二指腸段的空腸約5 cm稱重，刮取腸粘膜，溶于2 ml PBS(pH 7.4)，于 5 000 r·min－1，5 min 離心收集上清，按mouse SIgA ELISA Kit試劑盒(武漢USCNK)說(shuō)明書(shū)操作檢測(cè)單位質(zhì)量小腸內(nèi)SIgA含量。

1.4.8 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)小腸固有層IgA表達(dá)量 小腸石蠟切片組織經(jīng)常規(guī)脫蠟至水，0.3%甲醇過(guò)氧化氫輕搖孵育30 min以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，胰蛋白酶37℃ 10 min，IgA抗體4℃孵育過(guò)夜，二抗37℃孵育1 h，DAB顯色5 min，PBS終止顯色，蘇木素復(fù)染，蒸餾水1 min，脫水，中性樹(shù)膠封片，置于顯微鏡下觀察。

1.4.9 小腸pIgR含量測(cè)定 截取0.1 g小鼠空腸，經(jīng)膜蛋白提取試劑盒法提取總膜蛋白，按mouse pIgR ELISA Kit試劑盒(武漢USCNK)說(shuō)明書(shū)操作檢測(cè)小腸內(nèi)pIgR含量。

1.4.10 RT-PCR法檢測(cè)小腸pIgR mRNA表達(dá)量截取0.1 g小鼠空腸采用TRIzol法提取總RNA，紫外分光光度計(jì)測(cè)定總RNA濃度，OD260/OD280為1.8～2.0，于－80℃冰箱保存。取1 μg總RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA，并取逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA用于PCR擴(kuò)增，以β-actin的表達(dá)量為內(nèi)參。β-actin上游引物:5'-GAGACCTTCAACACCCCAGC-3'，下游引物:5'-ATGTCACGCACGATTTCCC-3';pIgR上游引物5'-CAGACATTAGCATGGCAGACTTCAA-3'，下 游 引物5'-TGCCGAGTAGGCCATGTCAG-3';PCR條件:94℃ 2 min;變性、退火、延伸各為 94℃ 30 s、53℃30 s、72℃ 1 min，重復(fù)23個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸5 min。PCR產(chǎn)物在1%的瓊脂糖凝膠(EB+)中電泳，紫外光(300 nm)觀察并照相記錄，用Image J軟件進(jìn)行灰度掃描比對(duì)。

2 結(jié)果

2.1 小鼠體重變化 小鼠飼養(yǎng)結(jié)束時(shí)，模型組和魷魚(yú)墨多糖各劑量組小鼠的平均體重均低于正常組，差異有顯著性(P＜0.05)(Fig 1)。在未注射環(huán)磷酰胺之前，各組小鼠體重均處于緩慢上升趨勢(shì)，但從第25天腹腔注射環(huán)磷酰胺之后，模型組和魷魚(yú)墨多糖劑量組小鼠體重逐漸下降(Fig 1)，但各劑量組小鼠體重均高于環(huán)磷酰胺模型組小鼠。環(huán)磷酰胺作為一種烷化劑類化療藥物，對(duì)快速增殖的細(xì)胞具有損傷作用。腸道上皮細(xì)胞增殖迅速，容易受到環(huán)磷酰胺的損傷。本研究中注射環(huán)磷酰胺小鼠的體重均下降，提示環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠腸道具有損傷作用。魷魚(yú)墨多糖有改善小鼠體重的趨勢(shì)，提示魷魚(yú)墨多糖對(duì)腸道損傷具有一定的修復(fù)作用。

Fig 1 Change of mouse bodyweight

2.2 脾指數(shù)/胸腺指數(shù) 胸腺和脾臟是重要的免疫器官，胸腺的主要功能是產(chǎn)生T淋巴細(xì)胞和分泌胸腺素，主要參與細(xì)胞免疫;脾臟中有豐富的淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞比例較大，因此與體液免疫關(guān)系更為密切。其重量與其功能以及其中免疫細(xì)胞數(shù)量有關(guān)。所以臟器指數(shù)可在一定程度上反映機(jī)體免疫功能的強(qiáng)弱。研究中環(huán)磷酰胺模型組小鼠的胸腺指數(shù)與脾指數(shù)均低于正常組小鼠并有差異顯著性(P＜0.01)，而且魷魚(yú)墨多糖可明顯提高環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠的脾指數(shù)、胸腺指數(shù)(Fig 2)。雖然魷魚(yú)墨多糖劑量組小鼠脾指數(shù)與胸腺指數(shù)均未達(dá)到正常水平，但是與模型對(duì)照組相比，低、中、高劑量組的脾指數(shù)分別提高了12.7%、13.1%、15.6%，胸腺指數(shù)分別提高了53.5%、67.6%、61.8%，差異均有顯著性(P＜0.05)。由此提示，魷魚(yú)墨粗多糖可以改善免疫低下小鼠的免疫功能。

Fig 2 Effects of Squid Ink glycosaminoglycan on immune function in immunosuppressed mice

2.3 腸粘膜的結(jié)構(gòu)完整性 環(huán)磷酰胺可以導(dǎo)致機(jī)體免疫低下，而增殖更新較快的腸道作為機(jī)體最大的免疫器官易受化療藥物環(huán)磷酰胺的損傷。小腸組織切片HE染色觀察小腸粘膜結(jié)構(gòu)(Fig 3)，結(jié)果提示連續(xù)2 d注射環(huán)磷酰胺(50 mg·kg－1)后，小腸絨毛的完整性與形態(tài)結(jié)構(gòu)未有明顯變化。小腸絨毛的上皮細(xì)胞排列、固有層結(jié)構(gòu)、腸隱窩結(jié)構(gòu)等均未有明顯變化。且模型組小鼠和魷魚(yú)墨劑量組小鼠中均未出現(xiàn)上皮細(xì)胞明顯病理?yè)p傷、炎癥浸潤(rùn)、白細(xì)胞穿越進(jìn)入固有層等現(xiàn)象。說(shuō)明此劑量的環(huán)磷酰胺注射小鼠并未引起腸道明顯病理反應(yīng)。

2.4 腸粘膜SIgA含量 雖然連續(xù)2 d注射環(huán)磷酰胺(50 mg·kg－1)并未引起腸道明顯生理結(jié)構(gòu)變化，但腸粘膜免疫功能亦與腸道許多免疫因子，如獲得性免疫因子SIgA有重要關(guān)系。因此在研究中我們進(jìn)一步探討了環(huán)磷酰胺與魷魚(yú)墨多糖對(duì)腸粘膜SIgA的影響。通過(guò)單位質(zhì)量小腸內(nèi)腸粘膜SIgA的含量比較研究(Tab 1)可以看出，模型組小鼠腸道SIgA的含量明顯低于正常組(P＜0.01)，作為腸道免疫屏障重要效應(yīng)因子的SIgA分泌量明顯降低說(shuō)明腸道抵抗外來(lái)微生物的能力及腸道粘膜的免疫保護(hù)作用明顯下降，提示環(huán)磷酰胺可以造成腸粘膜SI-gA損傷。與模型組相比，魷魚(yú)墨多糖低、中、高劑量組小鼠SIgA的含量均明顯高于模型組(P＜0.05)，說(shuō)明魷魚(yú)墨多糖對(duì)腸粘膜損傷小鼠的SIgA分泌具有改善作用，并且這種改善作用具有劑量依賴性。

Tab 1 Comparison of SIgA content in mouse small intestine

2.5 小腸固有層IgA的表達(dá)量 SIgA的分泌主要依賴于分泌IgA的漿細(xì)胞，以及表達(dá)pIgR的上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)功能。為了探討魷魚(yú)墨多糖促進(jìn)腸道SIgA分泌的作用機(jī)制，本研究對(duì)小鼠腸道IgA和pIgR的表達(dá)量進(jìn)行了研究。

免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示(Fig 4):相比正常組，模型組小鼠小腸固有層的IgA染色明顯較淺，表明環(huán)磷酰胺會(huì)造成腸粘膜IgA的表達(dá)量減少。與模型組相比，魷魚(yú)墨粗多糖低劑量組表達(dá)量有明顯變化，且中、高劑量組的小腸固有層IgA明顯染色較深，高劑量組IgA染色尤為深。結(jié)果表明，北太平洋魷魚(yú)墨多糖可以改善小腸固有層IgA的表達(dá)受損情況，并且呈劑量依賴性。

2.6 腸pIgR mRNA與蛋白質(zhì)表達(dá)量 小腸上皮細(xì)胞為腸道粘膜免疫的重要物理屏障，在其基底膜側(cè)表達(dá)的pIgR負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)運(yùn)固有層IgA并形成SIgA，以發(fā)揮免疫清除腸道有害因子的作用。為了探究魷魚(yú)墨多糖改善腸粘膜SIgA的功效，是否與促進(jìn)pIgR的表達(dá)有關(guān)，本研究對(duì)pIgR的mRNA與蛋白質(zhì)表達(dá)量進(jìn)行了檢測(cè)。小腸pIgR的RT-PCR結(jié)果(Fig 5)提示:環(huán)磷酰胺與魷魚(yú)墨粗多糖對(duì)小鼠小腸上皮細(xì)胞pIgR的mRNA表達(dá)量影響不大。pIgR的蛋白表達(dá)量結(jié)果(Fig 6)與mRNA表達(dá)量基本相似，環(huán)磷酰胺與魷魚(yú)墨多糖對(duì)小鼠小腸上皮細(xì)胞pIgR的蛋白表達(dá)量影響不大，但魷魚(yú)墨高劑量組的pIgR蛋白表達(dá)量明顯增高(P＜0.05)。

體外純化蛋白和細(xì)胞與組織表達(dá)蛋白的相關(guān)研究表明，人、牛、大鼠、小鼠和兔的pIgR均是高度N－糖基化的，分子中大約有15% ～24%碳水化合物［2］。在高劑量組小鼠中，小腸上皮細(xì)胞pIgR的表達(dá)在轉(zhuǎn)錄水平mRNA上沒(méi)有變化而蛋白質(zhì)水平上卻有明顯提高。這可能與魷魚(yú)墨多糖影響pIgR的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控如糖基化等過(guò)程有關(guān)。高劑量魷魚(yú)墨多糖促使pIgR高表達(dá)，提示魷魚(yú)墨多糖對(duì)上皮細(xì)胞功能具有改善作用。另外，pIgR高表達(dá)時(shí)，經(jīng)上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)并剪切后在腸腔內(nèi)形成的分泌片(secretory component，SC)也增多，可以發(fā)揮更強(qiáng)的抑制腸道有害菌的作用。

Fig 3 Photographs of small intestine by HE staining

Fig 4 Photographs of IgA expression of small intestine by immunohistochemistry staining

Fig 5 Relative mRNA expression of pIgR in mouse intestine

Fig 6 Expression of pIgR in mouse intestine

3 討論

腸粘膜表面存在大量的微生物，通常外環(huán)境中的大部分病原體進(jìn)入胃腸道后，會(huì)被粘膜天然免疫成分形成的屏障阻止在體外。而腸道分泌的SIgA是腸粘膜免疫的重要免疫屏障，其主要功能是阻抑細(xì)菌、病毒等病原體的粘附，使之不能在腸粘膜表面定植并繁殖，從而防止感染的發(fā)生［8］?；熕幬?、糖皮質(zhì)激素、嚴(yán)重燙傷、吸煙等因素，都可以導(dǎo)致腸粘膜SIgA的減少［9－10］。當(dāng)機(jī)體SIgA分泌能力下降時(shí)，會(huì)引起腸道菌群的失調(diào)、菌群移位、消化吸收障礙等，甚至還會(huì)引起腸炎和腸源性全身感染等情況。此外，臨床上出現(xiàn)部分患者在血清中存在抗食物蛋白的抗體和超敏反應(yīng)發(fā)生率的增加，這與SIgA的分泌下降不能有效阻止食物性抗原經(jīng)腸道入侵有關(guān)［11］。因此，尋找促進(jìn)腸道SIgA分泌的活性物質(zhì)具有重要意義。

環(huán)磷酰胺是一種抗腫瘤的化療藥物，可以導(dǎo)致免疫低下，引起腸道SIgA的減少，適于構(gòu)建SIgA減少的動(dòng)物模型。食物和中藥首先接觸的是胃腸道粘膜免疫，而且?guī)缀鯖](méi)有毒性，成為尋找促進(jìn)SIgA活性物質(zhì)的重要來(lái)源。已有報(bào)道指出:中藥四君子湯復(fù)方的多糖能使環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)小鼠的腸粘膜中IgA+細(xì)胞數(shù)量增加［12］;海帶多糖能夠明顯提高小鼠腸粘膜組織中 SIgA含量，并呈劑量依賴效應(yīng)［13］。魷魚(yú)墨多糖具有改善免疫功能低下的作用［7］，但是對(duì)改善腸粘膜SIgA方面的活性尚未見(jiàn)報(bào)道。

本研究的結(jié)果顯示，北太平洋魷魚(yú)墨多糖可以明顯改善環(huán)磷酰胺所致免疫功能低下小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)，初步證實(shí)了魷魚(yú)墨多糖對(duì)小鼠具有免疫增強(qiáng)作用。另外，北太平洋魷魚(yú)墨多糖可以明顯改善小鼠腸道SIgA的分泌，提示其對(duì)腸道獲得性免疫具有改善作用，并且呈劑量依賴關(guān)系。腸道SIgA的生成依賴于兩種細(xì)胞:分泌IgA和J鏈的漿細(xì)胞，以及表達(dá)pIgR的腸上皮細(xì)胞。本研究結(jié)果表明，魷魚(yú)墨多糖可明顯促進(jìn)小鼠腸道SIgA分泌，這與其促進(jìn)漿細(xì)胞分泌IgA增多和促進(jìn)上皮細(xì)胞表達(dá)pIgR相關(guān)。小鼠腸道固有層IgA表達(dá)量增多，上皮細(xì)胞pIgR穿胞轉(zhuǎn)運(yùn)dIgA含量隨之增加，因此分泌到腸腔中的SIgA含量亦會(huì)增加而使腸道粘膜防御功能增強(qiáng)。其中魷魚(yú)墨多糖高劑量組小鼠SIgA的明顯升高(P＜0.01)可能還與魷魚(yú)墨多糖促進(jìn)上皮細(xì)胞pIgR表達(dá)量增高有關(guān)。本研究為魷魚(yú)墨多糖在食品、營(yíng)養(yǎng)保健等領(lǐng)域的實(shí)際應(yīng)用提供了一定的理論依據(jù)。

［1］Duffield A，Caplan M J，Muth T R.Protein trafficking in polarized cells［J］.IntRev Cell Molecul Biol，2008，270:145 －79.

［2］唐慶娟，戚 欣，耿美玉.多聚免疫球蛋白受體(pIgR)在粘膜免疫中的重要功能［J］.中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)，2007，23(9):724－9.

［2］Tang Q J，Qi X，Geng M Y.Important role of polymeric immunoglobulin receptor in mucosal immunity［J］.Chin J Biochem Mol Biol，2007，23(9):724 －9.

［3］Alavi A，Stupack D G.Cell survival in a three-dimensional matrix［J］.Meth Enzymol，2007，426:85 － 101.

［4］Brandtzaeg P，Carlsen H S，Halstensen T S.The B-cell system in inflammatory bowel disease［J］.Adv Exp Med Biol，2006，579:149－67.

［5］Takaya Y.Biological activities of natural resources around us are now in the limelight［J］.Yalugaku Zasshi，2000，120(11):1075－89.

［6］雷 敏，趙夢(mèng)醒，劉 淇.魷魚(yú)墨黑色素的免疫調(diào)節(jié)作用［J］.食品工業(yè)科技，2012，33(6):397－400.

［6］Lei M，Zhao M X，Liu Q.Immunomodulatory effects of sepia melanin on hypoimmune mice［J］.Sci Technol Food Indust，2012，33(6):397－400.

［7］劉治東，王靜鳳，王玉明，等.魷魚(yú)墨粘多糖對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的研究［J］.中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，39:147－50.

［7］Liu Z D，Wang J F，Wang Y M，et al.The effect s of squid ink glyco saminoglycan on the immune function of mice［J］.Period O-cean Univ China，2009，39:147－50.

［8］Brandtzaeg P.Role of secretory antibodies in the defence against infections［J］.Internat J Med Microbiol，2003，293(1):3 －15.

［9］Sano Y，Gomez F E，Kang W，et al.Intestinal polymeric immunoglobulin receptor is affected by type and route of nutrition［J］.J Parent Ent Nutrit，2007，31(5):351 －7.

［10］胡正強(qiáng)，江詠梅.SIgA基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展［J］.免疫學(xué)雜志，2003，19(3):75－8.

［10］Hu Z Q，Jiang Y M.Progress of preclinical and clinical research of SIgA［J］.Immunol J，2003，19(3):75 －8.

［11］Wijburg O L，Uren T K，Simpfendorfer K，et al.Innate secretory antibodies protect against natural Salmonella typhimurium infection［J］.J Experiment Med，2006，203(1):21－6.

［12］劉 良，周 華，王培訓(xùn)，胡英杰.四君子湯復(fù)方總多糖對(duì)小鼠腸道粘膜相關(guān)淋巴組織的影響［J］.中國(guó)免疫學(xué)雜志，2001，17(4):204－6.

［12］Liu L，Zhou H，Wang P X，Hu Y J.Influence of total polysaccharide extracted from sijunzi decoction on the intestinal mucosa associated lymphoid tissues of mice［J］.Chin J Immunol，2001，17(4):204－6.

［13］王庭祥，王庭欣，劉崢顥，等.海帶多糖對(duì)小鼠腸黏膜組織SI-gA的影響［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37(12):5515－20.

［13］Wang T X，Wang T X，Liu Z H，et al.Effect of Laminarina japonica polysaccharides on the intestinal mucosal secretory SlgA in mice［J］.J Anhui Agri Sci，2009，37(12):5515 －20.