張 雅 王劍波 李穆瓊 曹 蔚 王四旺

第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系天然藥物學(xué)教研室（西安710032）

復(fù)方地榆栓是由地榆、白及、鐵莧菜、冰片等六味藥材組成的復(fù)方中藥新藥，具有清熱解毒，利濕消腫，止血止痛的功效。2008年獲得國家SFDA臨床批件，現(xiàn)已進(jìn)行三期臨床研究，主要用于內(nèi)痔、外痔、混合痔等引起的便血、腫脹和疼痛。其中冰片，味辛、苦，微寒；功能開竅醒神，清熱止痛［1］。本方主要取其“清熱止痛”之功，可直達(dá)病所，為方中使藥。為更有效控制復(fù)方地榆栓的內(nèi)在質(zhì)量，參考文獻(xiàn)［2，3］，本文建立了以氣相色譜法測定復(fù)方地榆栓中冰片的含量，為控制該制劑的質(zhì)量提供依據(jù)。

1 儀器與試藥 1.1 儀 器 Thermo fisher ISQ型氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測器（美國Thermo fisher公司）；Sartorius AG ME235S型電子分析天平（德國Sartorius公司）；SK250LHC型超聲波振蕩器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥 冰片對照品（批號為110743－200905）購自中國藥品生物制品檢定所；水楊酸甲酯（批號為110707－201011）購自中國藥品生物制品檢定所；復(fù)方地榆栓樣品（第四軍醫(yī)大學(xué)藥物研究所提供）；其他試劑均為分析純。

2 色譜條件 采用彈性石英毛細(xì)管柱GsBPINOWAX－MS（柱長30m，內(nèi)徑0.25mm，膜厚度0.25μm）；柱溫140℃；進(jìn)樣口溫度220℃，檢測器溫度220℃；分流比為50∶1。

3 方法與結(jié)果 3.1 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取水楊酸甲酯適量，精密稱定，加乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻即得，濃度為1.90mg／mL的溶液。

3.2 對照品溶液制備 精密稱取冰片對照品80.4mg，置10mL容量瓶中，加乙酸乙酯使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品母液。

3.3 供試品溶液的制備 取復(fù)方地榆栓樣品5粒，切碎，混勻，取1g精密稱定，置25mL具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液 （1.90mg／mL）5mL，超 聲（53KHz）處理30min，取出搖勻，靜置濾過。

3.4 陰性對照溶液的制備 按處方量制備不含冰片的陰性供試品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。

3.5 線性關(guān)系 精密量取對照品母液（8.04mg／mL）0.2，0.5，1，1.5，2，2.5mL分別各置于5mL容量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)溶液（5.08mg／mL）2mL，加乙酸乙酯至刻度，搖勻。在上述色譜條件下分別精密吸取1μL，注入氣相色譜儀，記錄峰面積。以冰片對照品的濃度為橫坐標(biāo)，冰片峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為：y＝0.751x－0.0069，相關(guān)系數(shù)r＝0.9999。結(jié)果表明，冰片對照品在0.3216～4.0200mg／mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表1和圖1。

表1 冰片對照品濃度與峰面積值的關(guān)系

3.6 專屬性試驗(yàn) 取對照品溶液、樣品溶液、陰性對照溶液，按本文條件分別進(jìn)樣，色譜圖見圖2，結(jié)果表明，本條件下陰性無干擾。

圖1 冰片對照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

圖2 對照品溶液、樣品溶液、陰性對照溶液色譜圖

3.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液1μL，按上述色譜條件操作，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定冰片峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值，其比值的RSD值為0.23%；精密吸取供試品溶液1μL，按上述色譜條件操作，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定冰片峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值，其比值的RSD值為0.26%。結(jié)果見表2。

3.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 將對照品溶液和供試品溶液，每間隔一定時(shí)間（0，2，4，6，8，12h）分別進(jìn)樣1次，對照品中冰片的峰面積與水楊酸甲酯的峰面積的比值的RSD為0.72%；供試品中冰片的峰面積與水楊酸甲酯的峰面積的比值的RSD為0.72%。結(jié)果表明對照品溶液和供試品溶液在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表3。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

3.9 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批（批號為111101）樣品，按供試品溶液的制備方法，制備6份供試品溶液。按上述色譜條件操作，進(jìn)樣測定結(jié)果；冰片平均含量為1.09%，RSD%為0.31%。結(jié)果表明本方法重復(fù)性好。結(jié)果見表4。

3.10 回收率實(shí)驗(yàn) 采用加樣回收法，取已測知含量的復(fù)方地榆栓（含量為1.09%），分別添加冰片對照品，按供試品溶液制備法操作，按上述色譜條件進(jìn)行測定，以下式計(jì)算回收率，結(jié)果見表5，表明本方法具有良好的回收率。

表4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

表5 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

3.11 含量測定 取復(fù)方地榆栓樣品三批（091103，091104，091105），按照供試品溶液處理方法制備供試液，進(jìn)樣測定，結(jié)果見表6，表明本方法穩(wěn)定。

表6 復(fù)方地榆栓樣品測定結(jié)果

3.12 含量測定限度制定 根據(jù)上述樣品中冰片含量測定結(jié)果及復(fù)方地榆栓重量（1.5g／粒）進(jìn)行計(jì)算，樣品中冰片的含量范圍在15.95mg～16.17mg之間，考慮到不同來源的冰片藥材含量有一定的變動(dòng)范圍，故將本品的含量測定限度暫定為：每粒含冰片的總量不得少于12mg。

4 討 論 用氣相色譜法對本品進(jìn)行含量測定，在不同柱溫130℃、140℃、150℃，不同分流比10∶1、30∶1、40∶1、50∶1及不同流速0.8mL／min、1mL／min、1.2mL／min、1.5mL／min下測定，所得出的保留時(shí)間、分離度、對稱性得到一定的改善，當(dāng)柱溫為140℃、分流比為50∶1、流速為1mL／min時(shí)，使本品的保留時(shí)間確定在12min內(nèi)，分離度好，對稱性好。

本實(shí)驗(yàn)分別用乙酸乙酯、石油醚、環(huán)己烷為溶劑對復(fù)方地榆栓中冰片的含量進(jìn)行了測定。結(jié)果表明用乙酸乙酯為溶劑提取的冰片含量較高，故使用乙酸乙酯為溶劑。

本實(shí)驗(yàn)還對溶劑量進(jìn)行了考察，分別在5mL、10mL、30mL條件下進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明用5mL提取的冰片含量較高且節(jié)省溶劑。

對提取方法（超聲和搖晃）、超聲時(shí)間（10min、20min、30min、45min）進(jìn)行了選擇，根據(jù)結(jié)果，最終選擇了超聲30min進(jìn)行提取。

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用氣相色譜法對本品中冰片進(jìn)行含量測定，方法簡便、準(zhǔn)確、可靠，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

［1］中國藥典委員會(huì).中國藥典（一部）［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：136.

［2］張秋瓊，劉文志，張秋菊，等.GC法測定復(fù)方苦參栓中冰片含量.湖北中醫(yī)學(xué)院報(bào)，2010，12（5）：36－37.

［3］楊亞麗，吳 芳.氣相色譜法測定三七傷藥片中冰片的含量［J］.陜西中醫(yī)，2011，32（8）：1067－1069.